一种纳豆激酶活性测定的方法技术

本发明专利技术公开了一种纳豆激酶活性测定的方法，包括配制基板溶液、配制BSB溶液、配制100μM4

【技术实现步骤摘要】
一种纳豆激酶活性测定的方法


[0001]本专利技术涉及一种纳豆成分检查方法，具体为一种纳豆激酶活性测定的方法，属于纳豆制品测定


技术介绍

[0002]市场上目前流行应用的FU(Fibrin Degradation Unit)方法:通过测量人工血栓上溶解部分的大小来判别活性。
[0003]该方法存在明显对目标物质活性物质的含量数据判断问题：
[0004]1.任何有分解性的酵素或是强酸性物质，都会显示出结果；
[0005]2.无法判别是否是真的纳豆激酶；
[0006]3.测试时间长，结果非常不安定。
[0007]通过实验可以证明：将胰脏中的酵素以及工业酵素送到官方分析，两种物质都不是纳豆激酶，却都测试出了纳豆激酶的活性结果，但是两种酵素都是无法入口，否则会对人体健康产生危害的成份；纳豆激酶会对某种特定的基质产生特别反应，因此可以分辨纳豆激酶成分的真假，同时其操作可以更加高效、简单、准确地测试纳豆激酶的活性物质含量，因此，通过采用NIKU基质检测法所获得的纳豆激酶活性物质数据，可以更加真实的反映出产品中所应该承诺消费者的纳豆激酶活性物质总量，基于此，本申请提出了一种纳豆激酶活性测定的方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的就在于为了解决上述至少一个技术问题而提供一种纳豆激酶活性测定的方法。
[0009]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：一种纳豆激酶活性测定的方法，包括以下步骤
[0010]步骤一、配制基板溶液
[0011]合成底物
①
MeO
‑
Suc
‑
Arg
‑
Pro
‑
Tvr
‑
pNA(Peptide)和合成底物
②
Suc
‑
Ala
‑
Ala
‑
Pro
‑
Phe
‑
pNA(Sigma)5
×
10
‑
3M分别溶解于DMSO(二甲基亚砜)中使其成型；
[0012]步骤二、配制BSB溶液
[0013]将9.92克硼酸、3.816克十水四硼酸钠和2.336克氯化钠溶解在纯净水中，然后称重至1L；
[0014]步骤三、配制100μM4
‑
硝基苯胺溶液
[0015]将4
‑
硝基苯胺(Sigma,N2128)溶解在DMSO中至100μM；
[0016]步骤四、制备纳豆激酶溶液
[0017]用纯净水将纳豆激酶样品稀释至0.5
‑
0.6IU/ml；
[0018]步骤五、创建吸光度校准曲线
[0019]选用DMSO和BSB稀释100μM4
‑
硝基苯胺溶液，并测量405nm处的吸光度，由所得结果
制作校准曲线，计算4
‑
硝基苯胺1μmol/ml的吸光度(AN)；
[0020]步骤六、酶活性测定
[0021]对于合成底物
①
和
②
，在石英池中混合100μl底物溶液和800μlBSB；将含有底物溶液和BSB的石英池在37℃预热2分钟，置于吸光度计中，加入100μl酶溶液，用移液管充分混匀，立即开始吸光度测量。
[0022]测量405nm处的吸光度250秒，并计算吸光度线性增加的时间段内的吸光度变化率(dA)。
[0023]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤一中，对所配制的基板溶液分装到Eppendorf管中，并进行冷冻保存，溶解后即可使用。
[0024]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤二中，对于所配制的BSB溶液，通过添加氢氧化钠或盐酸调至pH为7.8。
[0025]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤六中，使用100μlDMSO、800μlBSB和100μl纯化水的混合物作为测定吸光度的对照。
[0026]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤六中，合成底物
①
和
②
测量纳豆激酶的活性时，两者均表现出显着的活性。
[0027]作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤六中，纳豆激酶活性值的计算公式为：
[0028](IU/g)＝(dA/AN)
×
D
[0029]其中，dA为A405每分钟增加量(N/min)；AN为pNA的吸光度1μmol/ml(N/μmol/ml)；D为纳豆激酶在石英池中的稀释率(ml/g)。
[0030]本专利技术的有益效果是：能够快速且有效的实现对纳豆激酶的活性进行检查，且通过采用合成底物
①
MeO
‑
Suc
‑
Arg
‑
Pro
‑
Tvr
‑
pNA(Peptide)和合成底物
②
Suc
‑
Ala
‑
Ala
‑
Pro
‑
Phe
‑
pNA(Sigma)5
×
10
‑
3M测量纳豆激酶的活性，是利用NIKU基质检测法所获得的纳豆激酶活性物质数据，可以更加真实的反映出产品中所应该承诺消费者的纳豆激酶活性物质总量，且该方法操作过程更为精确以及便利。
附图说明
[0031]图1为本专利技术流程示意图。
具体实施方式
[0032]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0033]实施例一
[0034]如图1所示，一种纳豆激酶活性测定的方法，以合成底物
①
MeO
‑
Suc
‑
Arg
‑
Pro
‑
Tvr
‑
pNA(Peptide)作为基板溶液，包括以下步骤
[0035]步骤一、配制基板溶液
[0036]合成底物
①
MeO
‑
Suc
‑
Arg
‑
Pro
‑
Tvr
‑
pNA(Peptide)溶解于DMSO(二甲基亚砜)中使其成型；
[0037]步骤二、配制BSB溶液
[0038]将9.92克硼酸、3.816克十水四硼酸钠和2.336克氯化钠溶解在纯净水中，然后称重至1L；
[0039]步骤三、配制100μM4
‑
硝基苯胺溶液
[0040]将4
‑
硝基苯胺(Sigma,N2128)溶解在DMSO中至100μM；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳豆激酶活性测定的方法，其特征在于：包括以下步骤步骤一、配制基板溶液合成底物
①
MeO
‑
Suc
‑
Arg
‑
Pro
‑
Tvr
‑
pNA(Peptide)和合成底物
②
Suc
‑
Ala
‑
Ala
‑
Pro
‑
Phe
‑
pNA(Sigma)5
×
10
‑
3M分别溶解于DMSO(二甲基亚砜)中使其成型；步骤二、配制BSB溶液将9.92克硼酸、3.816克十水四硼酸钠和2.336克氯化钠溶解在纯净水中，然后称重至1L；步骤三、配制100μM4
‑
硝基苯胺溶液将4
‑
硝基苯胺(Sigma,N2128)溶解在DMSO中至100μM；步骤四、制备纳豆激酶溶液用纯净水将纳豆激酶样品稀释至0.5
‑
0.6IU/ml；步骤五、创建吸光度校准曲线选用DMSO和BSB稀释100μM4
‑
硝基苯胺溶液，并测量405nm处的吸光度，由所得结果制作校准曲线，计算4
‑
硝基苯胺1μmol/ml的吸光度(AN)；步骤六、酶活性测定对于合成底...

【专利技术属性】
技术研发人员：高峰，
申请(专利权)人：高峰，
类型：发明
国别省市：