一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法技术

本发明专利技术公开了一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法，包括改良Frey氏培养基的配制，滑液囊支原体的分离，同时还包括滑液囊支原体的传代和保存方法；本检测方法优化了兽药典的支原体分离培养基的配方，与成品试剂相比价格低廉，分离率相当；并对滑液囊支原体分离的时机、方法进行了规范；同时对滑液囊支原体的培养传代方法进行了优化，对保存的方法进行了摸索，同时本方法操作简单，节省了成本，更规范化。范化。范化。

【技术实现步骤摘要】
一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法


[0001]本专利技术涉及禽病诊断检测和治疗的
，具体涉及一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法。

技术介绍

[0002]目前支原体的分离在实践操作中非常的有难度，一是支原体培养基的选择使用局限，虽然拥有成品试剂的厂家很多，但是都不一定适用于所有类型的支原体分离，其中有一到两家培养基效果很好，但是价格昂贵，不适合日常检测批量分菌使用。二是分离的时机很重要，需要找准分菌的节点进行分离。三是分离后培养的方法，操作有难度。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法，本检测方法优化了兽药典的支原体分离培养基的配方，与成品试剂相比价格低廉，分离率相当；并对滑液囊支原体分离的时机、方法进行了规范；同时对滑液囊支原体的培养传代方法进行了优化，对保存的方法进行了摸索，同时本方法操作简单，节省了成本，更规范化。
[0004]为达到上述技术目的，本专利技术采用了一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法，包括改良Frey氏培养基的配制，滑液囊支原体的分离，同时还包括滑液囊支原体的传代和保存方法；所述改良Frey氏培养基的配制包括如下步骤：（1）准备如下原料：氯化钠5.0g，氯化钾 0.4g，硫酸镁0.2g，磷酸氢二钠1.6g，磷酸二氢钾0.2g，葡萄糖10.0g，进口水解乳蛋白（BD）5.0g ，酵母浸出粉5.0g，以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解；（2）加入进口猪血清100.0ml，1%辅酶I10.0ml，1%L<br/>‑
半胱氨酸盐酸盐 10.0ml，2%精氨酸盐酸盐 20.0ml，8万IU/ml青霉素10.0ml，1%酚红 1.0ml，新制注射用水加至1000ml；（3）将以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解后，用1mol/L氢氧化钠调整PH 7.6
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8.0，用0.22um滤膜过滤除菌，定量分装，放4℃冷藏不超过7d，否则需放
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20℃冻存；所述滑液囊支原体的分离包括如下步骤：（1）挑取发生滑液囊支原体疾病的鸡，取不同程度发病症状的鸡的病变关节，喉头拭子送检，并将脏器取样后切勿冷冻，以最快的速度低温送检实验室进行分离；（2）将病鸡的关节部位，清洗外部，放置操作台进行无菌分离，剪开病变部位，用配制好的改良Frey氏的培养基对病变部位进行冲洗，冲洗液备用；（3）取病变的筋腱、粘液放置到冲洗液中，进行震动混匀，放置冰箱浸内泡一段时间；（4）取病料液8000r/min离心，5min，取上清，用0.22um的滤器进行过滤，得到过滤液，放置到玻璃试管中，用1mol/L氢氧化钠调节PH，并置于温箱培养；所述滑液囊支原体的传代和保存方法包括如下步骤：
（1）取分离到滑液囊支原体，按照10%接种量接种到改良Fery氏培养基里，置于37℃温箱培养，待培养基的PH值下降至6.7
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7.0时收获；（2）得到菌株后将菌株进行纯化，将培养颜色变黄的滑液囊支原体菌液涂布支原体固体培养基上，倒置于培养箱内进行培养一段时间，挑取固体培养基上的单菌落至滑液囊支原体液体培养基中进行培养，重复以上操作3次即得纯化后的滑液囊支原体，继续传代。
[0005]优选的，所述滑液囊支原体的分离的步骤（3）中，取病变的筋腱、粘液放置到冲洗液中，进行震动混匀，放置4℃冰箱浸泡4小时。
[0006]进一步优选的，所述滑液囊支原体的分离的步骤（4）中，使培养基PH在7.6
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8.0之间，并置于37℃温箱培养。
[0007]更进一步优选的，所述滑液囊支原体的传代和保存方法的步骤（2）中，将培养颜色变黄的滑液囊支原体菌液涂布支原体固体培养基上，倒置于5%CO2培养箱内37℃进行培养5～7ｄ。
[0008]本专利技术的检测方法具有如下优点：（1）本专利技术的检测方法优化了兽药典的支原体分离培养基的配方，与成品试剂相比价格低廉，分离率相当；（2）本专利技术的检测方法对滑液囊支原体分离的时机、方法进行了规范；（3）本专利技术的检测方法对滑液囊支原体的培养传代方法进行了优化，对保存的方法进行了摸索，同时本方法操作简单，节省了成本，更规范化。
附图说明
[0009]图1所示为本专利技术中培养基培养时的状态图；图2所示为本专利技术中培养基颜色变化的状态图；图3所示为本专利技术中支原体纯化的状态图。
具体实施方式
[0010]下面采用具体实施方式对本专利技术作进一步的说明。
[0011]一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法，具体包括改良Frey氏培养基的配制，滑液囊支原体的分离，同时还包括滑液囊支原体的传代和保存方法；在本专利技术中，改良Frey氏培养基的配制包括如下步骤：（1）准备如下原料：氯化钠5.0g，氯化钾0.4g，硫酸镁0.2g，磷酸氢二钠1.6g，磷酸二氢钾0.2g，葡萄糖10.0g，进口水解乳蛋白（BD）5.0g ，酵母浸出粉5.0g，以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解；（2）加入进口猪血清100.0ml，1%辅酶I10.0ml，1%L
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半胱氨酸盐酸盐 10.0ml，2%精氨酸盐酸盐 20.0ml，8万IU/ml青霉素10.0ml，1%酚红 1.0ml，新制注射用水加至1000ml；（3）将以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解后，用1mol/L氢氧化钠调整PH7.6
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8.0，用0.22um滤膜过滤除菌，定量分装，放4℃冷藏不超过7d，否则需放
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20℃冻存；在上述步骤中，由于支原体对水的要求较高，配制培养基的水必须经过纯化，为注射用水或超纯水，不含杂质，注射用水储存不宜超过3天，现制现用为宜，以避免周围环境和
空气可能造成的污染及水质的变化，同时配制培养基的试剂厂家最好是国药集团，培养基颜色为玫红色，澄清无沉淀（本步骤的培养基培养时的状态参考图1）。
[0012]在本专利技术中，滑液囊支原体的分离包括如下步骤：（1）挑取发生滑液囊支原体疾病的鸡，取不同程度发病症状的鸡的病变关节，例如：严重肿胀的、轻微肿胀的、外观正常但是瘸腿的、精神不振的，喉头拭子送检，并将脏器取样后切勿冷冻，以最快的速度低温送检实验室进行分离；（2）将病鸡的关节部位，清洗外部，放置操作台进行无菌分离，剪开病变部位，用配制好的改良Frey氏的培养基对病变部位进行冲洗，冲洗液备用；（3）取病变的筋腱、粘液放置到冲洗液中，进行震动混匀，放置冰箱浸内泡一段时间；在该步骤中，取病变的筋腱、粘液放置到冲洗液中，进行震动混匀，放置4℃冰箱浸泡4小时；（4）取病料液8000r/min离心，5min，取上清，用0.22um的滤器进行过滤，得到过滤液，放置到玻璃试管中，用1mol/L氢氧化钠调节PH，并置于温箱培养；在该步骤中，使培养基PH在7.6
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8.0之间，并置于37℃温箱培养；在上述步骤中，分离培养初期，需要在培养72小时之内，按照10%的接种比例进行传代一次，同时原液继续培养。待培养基的PH值下降至6.7
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株鸡滑液囊支原体的培养传代和保存方法，其特征在于，包括改良Frey氏培养基的配制，滑液囊支原体的分离，同时还包括滑液囊支原体的传代和保存方法；所述改良Frey氏培养基的配制包括如下步骤：（1）准备如下原料：氯化钠5.0g，氯化钾 0.4g，硫酸镁0.2g，磷酸氢二钠1.6g，磷酸二氢钾0.2g，葡萄糖10.0g，进口水解乳蛋白（BD）5.0g，酵母浸出粉5.0g，以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解；（2）加入进口猪血清100.0ml，1%辅酶I10.0ml，1%L
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半胱氨酸盐酸盐 10.0ml，2%精氨酸盐酸盐 20.0ml，8万IU/ml青霉素10.0ml，1%酚红 1.0ml，新制注射用水加至1000ml；（3）将以上成分按比例称重，加入注射用水逐一溶解后，用1mol/L氢氧化钠调整PH 7.6
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8.0，用0.22um滤膜过滤除菌，定量分装，放4℃冷藏不超过7d，否则需放
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20℃冻存；所述滑液囊支原体的分离包括如下步骤：（1）挑取发生滑液囊支原体疾病的鸡，取不同程度发病症状的鸡的病变关节，喉头拭子送检，并将脏器取样后切勿冷冻，以最快的速度低温送检实验室进行分离；（2）将病鸡的关节部位，清洗外部，放置操作台进行无菌分离，剪开病变部位，用配制好的改良Frey氏的培养基对病变部位进行冲洗，冲洗液备用；（3）取病变的筋腱、粘液放置到冲洗液中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明清，汪建华，王胜，刘丹丹，张中波，刘晓钰，
申请(专利权)人：兰陵和康源生物育种有限公司，
类型：发明
国别省市：