本发明专利技术提供了一种基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条。该上转换发光纳米颗粒可以同时在两种不同的近红外光激发下发出红光或绿光任意一个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光。双通量免疫层析试纸条的样品垫设置在底板中央，两侧对称顺序粘连结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸。不同于单向检测试纸条，该双通量试纸条的两端结合垫分别固定有赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗体偶联的金颗粒，且对应的T线上固定了与赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗原偶联的上转换发光纳米颗粒。本发明专利技术可以实现对两种检测物质高灵敏、快速检测。本发明专利技术方法操作简便，成本低廉，检测背景值低、信号稳定、灵敏性较高。高。高。
【技术实现步骤摘要】
一种基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条
[0001]本专利技术属于生物医学诊断
，具体涉及基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条。
技术介绍
[0002]在集约农业和食品工业增长的情况下，食品安全正逐渐成为一个全球性问题；应以快速、经济、准确的方式确定到达消费者手中的食品的健康可靠性，特别是在污染物筛选方面。为了满足快速、现场分析的要求，食品质量控制用生物传感器的开发越来越受到人们的关注。
[0003]赭曲霉素A、呕吐毒素已经成为污染我国谷物极其副产品的主要因素，且与多种毒素呈现协同作用。它们广泛存在于自然界，其中小麦、玉米是最主要的受污染农作物，当被人畜摄入后，即使微量也会具有强烈的肾毒性、致突变性、致畸性和致癌性，这些毒素通过降低淋巴器官的免疫增殖，降低整体免疫功能，影响了体液免疫应答，对细胞免疫产生负反馈效应，由于这两种霉菌毒素的高稳定性，目前针对性的脱毒方法已经证明无法高效去除其污染和危害，因此，必须加大基础研究力度，开发更有效的检测方法从源头消除霉菌毒素的危害性。
[0004]免疫分析法因其简单易行、特异性高而在当前真菌毒素快速筛选中起着至关重要的作用。基于胶体金纳米颗粒(AuNP)的免疫分析法与ELISA法相比，样品制备方法简单、快速，在 3～10min内即可得到结果，不需要繁琐的样品前处理、训练有素的人员和昂贵精密的仪器，更适合于现场快速检测。
[0005]上转换纳米粒子是一种将近红外光转换为较短波长发射的无机纳米晶体。这种独特的光物理特性，加上窄的发射带宽和大的反斯托克斯位移，使UCNP成为生物传感的优秀光学标签，因为它们可以在没有样品基质的光学背景干扰的情况下被检测到，在提高检测性能方面受到越来越多的关注。
[0006]因此，将UCNPs与传统胶体金免疫层析结合，通过双向T线的设置研制了基于UCNP
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Au 复合体系的双通量免疫层析试纸条，实现对赭曲霉素A和呕吐毒素的同时检测，可以大大节约成本，提高便捷性和灵敏度。
技术实现思路
[0007]为克服上述现有技术所存在的上述不足之处，本专利技术提供一种基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条。该上转换发光纳米颗粒可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光或绿光任意一个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光，将其与胶体金结合，利用液滴的双向扩散特性，开创了一种全新的双通量检测模式，以实现食品中多重物质检测。本专利技术可以实现对多种检测物质的单线检测，方法操作简便，成本低廉，灵敏性较高。
[0008]为实现专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
[0010](1)采用晶种法制备具有三层核壳结构的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒，其以掺杂有Yb、Tm和Er的NaYF4纳米颗粒为内核，在所述内核外包裹有Yb掺杂的NaYF4第一壳层，且在所述第一壳层外包裹有Yb、Nd掺杂的NaYF4第二壳层，构成Yb、Tm、Er和 Nd共掺杂的NaYF4:Yb/Tm/Er@NaYF4:Yb@NaYF4:Yb/Nd核壳结构；制得水溶性的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒UCNPs，该上转换发光纳米颗粒在近红外光980nm激发下发出红光，在近红外光808nm激发下发出绿光。
[0011]所述的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒UCNPs的制备方法，其特征在于，其还包括如下步骤：
[0012](2)UCNPs
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抗原的制备：通过物理吸附等作用在水溶性的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒表面标记上检测物的抗原，获得标记有待检测物抗原的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒。
[0013]一种金纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
[0014](1)胶体金溶液的制备：
[0015]0.25mL0.1M的氯金酸溶液加入到100mL的超纯水中，磁力搅拌下加热回流至沸腾。迅速加入1.5mL1％的柠檬酸钠溶液，继续回流约30分钟。期间溶液的颜色由淡黄色变为黑色然后变为深红色。降至室温后，所制备的酒红色的金纳米粒子溶胶用0.22μm的滤膜过滤，获得金纳米颗粒。
[0016]所述的金纳米颗粒AuNPs的制备方法，其特征在于，其还包括如下步骤：
[0017](2)AuNPs
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抗体的制备：通过物理吸附等作用在金纳米颗粒表面标记上检测物的抗体，获得标记有待检测物抗体的金纳米颗粒。
[0018]前述方法制备的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒，其特征在于，所述的上转换发光纳米颗粒可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光或绿光两种波段中任意一个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光。
[0019]一种采用前述的基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于，样品垫设置在底板中央，两侧对称顺序粘连结合垫、NC膜以及吸水纸。组装顺序为：先在硝酸纤维素膜上设置两条检测轨道，将处理好的UCNPs溶液沿特定轨道划线到NC膜上形成两条测试线，将NC膜对称组装在底板上，再依次粘连结合垫、吸水纸和样品垫，样品垫组装在试纸条的中心；在所述结合垫上设置有金纳米颗粒，在金纳米颗粒上标记有待检测物的抗体；在硝酸纤维素膜上固定有双激发正交发射上转换发光纳米颗粒标记的检测物的抗原。
[0020]所述的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于利用上转换发光纳米颗粒可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光或绿光两种波段中任意一个波段，在层析试纸条的硝酸纤维素膜上只需划膜两条固定有双激发正交发射上转换发光纳米颗粒标记的检测物的测试线，这样双激发正交发射上转换纳米颗粒在近红外激发光下的一个波段的信号作为检测T线，另一个波段的信号可作为质控C线，从而达到多重双向单线检测的效果。
[0021]所述双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于，双通量试纸条的样品垫设置在底板中央，两侧对称顺序粘连结合垫、NC膜以及吸水纸，不同于单向检测试纸条，该双通量试纸条的两端结合垫分别固定有赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗体偶联的金颗粒，且对应的T线上固定了与赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗原偶联的UCNPs。
[0022]所述双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于：所述商用硝酸纤维素膜的尺寸为60cm；所述结合垫为两条长度为5mm的玻璃纤维，样品垫的长度为10mm，组装时样品垫粘在硝酸纤维素膜的中间位置。
[0023]所述双激发双发射的上转换发光纳米颗粒的荧光淬灭的胶体金免疫层析试纸条的检测方法，其特征在于：
[0024](1)制备好的层析试纸条在未将待检测试样滴加在结合垫上时，分别通过980nm和 808nm激光激发硝酸纤维素膜上固定有双激发正交发射上本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)采用晶种法制备具有三层核壳结构的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒，其以掺杂有Yb、Tm和Er的NaYF4纳米颗粒为内核，在所述内核外包裹有Yb掺杂的NaYF4第一壳层，且在所述第一壳层外包裹有Yb、Nd掺杂的NaYF4第二壳层，构成Yb、Tm、Er和Nd共掺杂的NaYF4:Yb/Tm/Er@NaYF4:Yb@NaYF4:Yb/Nd核壳结构；制得水溶性的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒UCNPs，该上转换发光纳米颗粒在近红外光980nm激发下发出红光，在近红外光808nm激发下发出绿光。2.根据权利要求1所述的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒UCNPs的制备方法，其特征在于，其还包括如下步骤：(2)UCNPs
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抗原的制备：通过物理吸附等作用在水溶性的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒表面标记上检测物的抗原，获得标记有待检测物抗原的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒。3.一种金纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)胶体金溶液的制备：0.25mL 0.1M的氯金酸溶液加入到100mL的超纯水中，磁力搅拌下加热回流至沸腾。迅速加入1.5mL 1％的柠檬酸钠溶液，继续回流约30分钟。期间溶液的颜色由淡黄色变为黑色然后变为深红色。降至室温后，所制备的酒红色的金纳米粒子溶胶用0.22μm的滤膜过滤，获得金纳米颗粒。4.根据权利要求4所述的金纳米颗粒AuNPs的制备方法，其特征在于，其还包括如下步骤：(2)AuNPs
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抗体的制备：通过物理吸附等作用在金纳米颗粒表面标记上检测物的抗体，获得标记有待检测物抗体的金纳米颗粒。5.根据权利要求1～4之一所述方法制备的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒，其特征在于，所述的上转换发光纳米颗粒可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光或绿光两种波段中任意一个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光。6.一种采用权利要求5所述的双激发正交发射上转换发光纳米颗粒制备的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于，双通量试纸条的样品垫设置在底板中央，两侧对称顺序粘连结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸，不同于单向检测试纸条，该双通量试纸条的两端结合垫分别固定有赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗体偶联的金颗粒，且对应的T线上固定了与赭曲霉毒素A和呕吐毒素抗原偶联的双激发正交发射上转换纳米颗粒，当滴加待测样品时，待测溶液以相同的速度向两侧迁移。7.一种采用权利要求6所述的基于双激发正交发射上转换发光纳米颗粒的高灵敏双通量检测免疫层析试纸条，其特征在于利用上转换发光纳米颗粒可以同时在两种不同波段的近红外光激发下发出红光或绿光两种波段中任意一个波段，在层析试纸条的硝酸纤维素膜上只需双向划膜两条固定有双激发正交发射上转换发光纳米颗粒标记的检测物的抗原检测线T线，这...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳芳，李春霞，
申请(专利权)人：潍坊科技学院，
类型：发明
国别省市：
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