山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用。本发明专利技术首次发现了在

【技术实现步骤摘要】
山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用。

技术介绍

[0002]山蛭是蛭纲(Hirudinea)环节动物的1属，常见的山蛭种类包括日本山蛭(Haemadipsa.japonica)、天目山蛭(H.tianmushana)、海南山蛭(H.hainana)、盐源山蛭(H.yanyuanensis)等。海南山蛭，俗称“山蚂蝗”，是海南当地一种特征性的生物，物种归属于山蛭科山蛭属。主要栖息于中国海南岛中东部山区的泉流溪水旁、竹林及地势较低平处、极喜隐匿于潮湿的泥泞处，例如在潮湿的砂砾、朽木以及较干燥的牛排泄物、草丛接缝处、潮湿积水处。海南由于其独特的地理环境以及气候条件，具有丰富的海南山蛭资源，潜在的药用价值巨大。目前对于海南山蛭药用活性没有过多的研究，处于停滞的状态。未见从山蛭中提取出具有镇痛作用的物质的相关报道。

技术实现思路

[0003]鉴于现有技术的不足，本研究致力于从海南山蛭中实现多肽的分离提取以及利用小鼠热板实验进一步验证其镇痛活性，期望能够进一步的拓展海南山蛭的在药理方面的应用，为下一步的研究奠定基础。
[0004]本专利技术方案：
[0005]山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用，所述的山蛭提取物为水提取物，水提取温度为
‑
2～32℃。
[0006]优选的，水提取温度为
‑
2～22℃。
[0007]优选的，水提取温度为0
±
2℃。
>[0008]优选的，所述山蛭提取物为山蛭活体浆液的水提取物。
[0009]优选的，所述的水提取物的提取方法包括以下步骤：取山蛭活体，粉碎制成匀浆，加入3～10倍体积的蒸馏水，在
‑
2～32℃条件下放置过夜，离心，上清液为所需的山蛭提取物。
[0010]优选的，所述的水提取物的提取方法包括以下步骤：取山蛭活体，粉碎制成匀浆，加入3～10倍体积的蒸馏水，在
‑
2～32℃条件下放置至少8h，离心，上清液为所需的山蛭提取物。
[0011]优选的，所述痛为物理性疼痛。
[0012]优选的，所述山蛭为海南山蛭。
[0013]另一方面，本专利技术还涉及一种具有镇痛作用的山蛭提取物，所述山蛭提取物的提取方法包括以下步骤：取山蛭活体，粉碎制成匀浆，加入3～10倍体积的蒸馏水，在
‑
2～32℃条件下放置过夜，离心，上清液为所需的山蛭提取物。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0015]本专利技术首次发现了在
‑
2～32℃条件下用水提取海南山蛭所得提取物对于动物物
理性疼痛有良好的镇痛作用，明显提高痛阈值。小鼠给药105min后痛阈提高率达到150％左右。
[0016]本专利技术山蛭提取物提取方法极为简便，操作简单，容易推广使用。
[0017]本专利技术提取物给药剂量低，在0.25～1.0％质量浓度下即可达到良好的镇痛效果。
附图说明
[0018]图1：实验例2结果图。图中，*表示P＜0.05，提取物的痛阈提高率与阴性对照组有统计学差异；**表示P＜0.01，提取物的痛阈提高率与阴性对照组有显著统计学差异；***表示P＜0.001，提取物的痛阈提高率与阴性对照组有极其显著统计学差异。
具体实施方式
[0019]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0020]新鲜海南山蛭采自海南省海口市，经鉴定其物种为山蛭科山蛭属。
[0021]以下实施例所使用的试剂、产品，若无特殊说明，均为市售产品。
[0022]实验小鼠为成年昆明雌鼠(3周龄)。
[0023]实施例1海南山蛭镇痛活性物质的提取
‑
水提法
①
[0024]实验取海南山蛭活体20只，约40g，置于高速搅拌粉碎机中制成匀浆，加入10倍体积的蒸馏水，在恒温磁力搅拌器中冰浴(0
±
2℃)，放置过夜(8h)，在9000r/min的功率下4℃离心15min，上清液为所需的山蛭提取物，真空冷冻干燥成粉备用。
[0025]实施例2海南山蛭镇痛活性物质的提取
‑
超声提取法
[0026]取实施例1离心后的下沉淀，约35g，加入适量蒸馏水，在70％功率下超声(SCIENTZ
‑
IID超声波细胞粉碎机)粉碎10min，将超声后的溶液于9000r/min下离心15min，得到上清液，真空冷冻干燥成粉末备用。
[0027]实施例3海南山蛭镇痛活性物质的提取
‑
水提法
②
[0028]实验取海南山蛭活体20只，约40g，置于高速搅拌粉碎机中制成匀浆，加入10倍体积的蒸馏水，在恒温磁力搅拌器中，10
±
2℃放置过夜(8h)，在9000r/min的功率下4℃离心15min，上清液为所需的山蛭提取物，真空冷冻干燥成粉备用。
[0029]实施例4海南山蛭镇痛活性物质的提取
‑
水提法
③
[0030]实验取海南山蛭活体20只，约40g，置于高速搅拌粉碎机中制成匀浆，加入10倍体积的蒸馏水，在恒温磁力搅拌器中，20
±
2℃放置过夜(8h)，在9000r/min的功率下4℃离心15min，上清液为所需的山蛭提取物，真空冷冻干燥成粉备用。
[0031]实施例5海南山蛭镇痛活性物质的提取
‑
水提法
④
[0032]实验取海南山蛭活体20只，约40g，置于高速搅拌粉碎机中制成匀浆，加入10倍体积的蒸馏水，在恒温磁力搅拌器中，30
±
2℃放置过夜(8h)，在9000r/min的功率下4℃离心15min，上清液为所需的山蛭提取物，真空冷冻干燥成粉备用。
[0033]实验例1
[0034]采用SDS
‑
PAGE法测定以上各实施例的山蛭提取物以及菲牛蛭提取物分子量。结果显示，不同山蛭提取物电泳图谱在蛋白质条带数量、移动距离、蛋白浓度等方面存在差异。其中，在14.4～97.4kDa范围内，各提取物均有蛋白条带分布，但条带分布位置存在明显差
别。菲牛蛭提取物的蛋白组分数量最多，达12条，与山蛭提取物差异明显，分布位置也不同。分析结果表明海南山蛭和菲牛蛭两种不同的蛭类动物表达的蛋白种类存在显著不同，各提取方法所得海南山蛭提取物的蛋白种类及蛋白浓度也有所差异。
[0035]实验例2：海南山蛭镇痛活性研究
[0036]1.1注射方式初筛
[0037]小鼠于热板仪上测定痛阈值，热板仪的温度设置在温度55
±
0.5℃，以小鼠舔后足为观察指标，重复测量2次，时间间隔大于五分钟，获得小鼠正常痛阈值。预选在30秒内有阳性反应的小鼠12只，随机分为四组，每组3只。第一组腹腔注射0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.山蛭提取物的应用，其特征在于，所述山蛭提取物在制备镇痛药物中的应用，所述的山蛭提取物为水提取物，水提取温度为
‑
2～32℃。2.根据权利要求1所述的山蛭提取物的应用，其特征在于，水提取温度为
‑
2～22℃。3.根据权利要求1所述的山蛭提取物的应用，其特征在于，水提取温度为0
±
2℃。4.根据权利要求1所述山蛭提取物的应用，其特征在于，所述山蛭提取物为山蛭活体浆液的水提取物。5.根据权利要求1所述山蛭提取物的应用，其特征在于，所述的水提取物的提取方法包括以下步骤：取山蛭活体，粉碎制成匀浆，加入3～10倍体积的蒸馏水，在
‑
2～32℃条件下放置过夜，离心，上清液为所需的山蛭提取物。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：高炳淼，沈立姿，杨莹琛，廖燕玲，符金星，李泽友，李明，郭琦琦，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：