血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白在诊断抑郁症中的应用制造技术

本发明专利技术公开了血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白在诊断抑郁症中的应用，属于生物科学领域。本发明专利技术发现在抑郁症及健康受试者外周血血浆小胶质细胞来源外泌体中存在差异表达，而在神经元细胞来源和星形胶质细胞来源外泌体中无差异性表达。本发明专利技术表明维生素D结合蛋白在抑郁症和健康对照者血浆小胶质细胞来源外泌体中的差异性表达，在抑郁症患者中表达水平降低；其表达水平与HAMD24评分呈负相关，通过单独使用该蛋白作为外周血液生物标记物检测其含量用于诊断抑郁症，可显著提高抑郁症与健康人群的鉴别诊断准确性。因此，外周血血浆中小胶质细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白水平检测在抑郁症的诊断中具有很高的临床应用价值。应用价值。应用价值。

【技术实现步骤摘要】
血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白在诊断抑郁症中的应用


[0001]本专利技术涉及生物科学领域，具体涉及血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白在诊断抑郁症中的应用。

技术介绍

[0002]抑郁症是最常见的重性精神疾病，高居人类疾病总负担第二位。但遗憾的是，至今尚无客观的诊断生物学标记物，诊断依然依赖临床表象。近年来，随着多组学高通量测定技术和生物信息学分析技术的迅猛发展，无论临床患者还是模式动物，基于多来源生物样本筛选候选分子如火如荼。遗憾的是，获得抑郁症患者活检或尸检脑组织极其困难，即使脑脊液获取也困难重重，并且近期研究分析进一步表明脑组织或脑脊液候选生物学标记物水平与外周血水平并不一致(PubMed PMID:31195092.)。因此提出，绝大多数采用外周血筛选的生物学标记物不能直接代表中枢。因此，从外周血中成功分离、提取、测定能代表中枢来源的候选分子迫在眉睫。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的不足，本专利技术提出了血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白在诊断抑郁症中的应用。
[0004]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0005]一种用于诊断抑郁症的设备，包括：用于分离血浆脑细胞来源外泌体的装置与用于检测所述的血浆脑细胞来源外泌体的维生素D结合蛋白浓度/含量的试剂盒。
[0006]可选地，所述的脑细胞来源外泌体包括小胶质细胞来源外泌体、神经元细胞来源外泌体与星形胶质细胞来源外泌体。
[0007]可选地，所述的用于检测所述的血浆脑细胞来源外泌体的维生素D结合蛋白浓度/含量的试剂盒为ELISA试剂盒。
[0008]可选地，其特征在于，所述的用于分离血浆脑细胞来源外泌体的装置为免疫沉淀试剂盒。
[0009]另一方面，本专利技术还提出了血浆脑细胞来源外泌体中维生素D结合蛋白作为标志物在制备抑郁症诊断试剂盒中的应用。
[0010]可选地，所述的试剂盒为ELISA试剂盒。
[0011]可选地，所述的ELISA试剂盒中提供的微孔板预先包被抗体。
[0012]可选地，所述的ELISA试剂盒采用生物素偶联抗体作为检测抗体
[0013]本专利技术的有益效果：
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：首次在血浆中证实小胶质细胞来源外泌体中VDBP作为特异性诊断抑郁症的生物标志物的用途，为鉴别诊断抑郁症提供了一条全新的途径；小胶质细胞来源外泌体中VDBP水平与HAMD24评分呈负相关；单独采用小胶质细
No.12321D)，然后去除上清液，重新悬浮在250ml隔离缓冲液中(PBS中0.1％BSA)。为了进行抗体标记，将5μg生物素标记的抗体与磁珠孵育，分别采用TMEM119(Cat.No.853302,BioLegend,San Diego,California,USA)(用于小胶质细胞来源外泌体)，L1CAM/CD171
‑
Biotin(用于神经元来源的外泌体)(Cat.No.13
‑
1919
‑
82,ThermoFisher Scientific)和GLAST(Cat.No.ACSA
‑1‑
Biotin,Miltenyi Biotec,Auburn,California,USA)(用于星形细胞来源外泌体)三种外泌体特异性分子进行分离提取三种不同类型脑细胞来源外泌体，室温下连续混合1小时。将总外泌体(50μl)与抗体标记磁珠在4℃连续混合孵育过夜(24h)。然后磁化磁珠，去除上清液。用1ml洗涤缓冲液洗涤四次，最后用含1％BSA和PPi的200μl PBS重悬。最后，在新的EP管中加入100μl珠粒(带有脑细胞来源外泌体)，并在管中加入100μl洗脱缓冲液(0.1M glycine,pH 3.0)。将EP管在室温下混合5分钟。磁力架去除磁珠，得到的溶液就是我们想要收集的特定脑细胞亚群外泌体。然后将得到的溶液的pH调整为7.0(1M Tris
‑
HCl(pH＝8.6))。
[0025](3)酶联免疫吸附试验(ELISA)测定VDBP
[0026]使用磁珠分离出脑细胞来源的外泌体后，将RIPA裂解液直接添加到磁珠中裂解外泌体。然后磁化并去除磁珠，收集外泌体裂解液。采用ELISA方法进行VDBP定量，所用试剂盒详细信息如下：Human DBP/Vitamin D Binding Protein(Vitamin D Binding Protein)ELISA Kit，EH2937，Fine Biotech Co.,Ltd，Wuhan，China。该试剂盒的检测范围为3.906
‑
250ng/ml。
[0027]试剂盒组件外所需器材和试剂：酶标仪(波长：450nm)，37℃恒温箱，自动洗板机，精密的单道和多道移液器以及干净的一次性枪头，干净的EP管，去离子水或蒸馏水
[0028]具体地说，ELISA试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测法。试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗体。采用生物素偶联抗体作为检测抗体。依次将标准品、待测样品和生物素偶联检测抗体加入孔中，用洗涤液洗去未结合的成分。加入HRP
‑
链霉亲和素(SABC)，用洗涤液洗去未结合的偶联物。再将TMB底物溶液添加到每个孔中。通过添加硫酸溶液终止酶
‑
底物反应，并通过分光光度法在450nm的波长处测量OD值。将样品的OD450值与标准曲线进行比对，确定样品中待测蛋白的浓度。
[0029]具体实验步骤：
[0030]稀释样品和试剂时，必须将它们完全均匀地混合。在将TMB加入孔中之前，请将TMB底物在37℃下平衡30分钟。每次测试都绘制标准曲线。
[0031]设定标准品孔、待测样品孔(用样品稀释液至少稀释一倍)、空白孔，并记录其位置。为减小实验误差，每个标准品和样品一式两份进行测量。加样前，可先用洗涤缓冲液洗板2次。
[0032]加样：向相应孔中加入100ul标准品或待测样品，覆膜，并在37℃下孵育90分钟。(将溶液添加到微孔板的底部，并尽可能避免接触管壁和吸打起泡沫。)
[0033]洗板:取下覆膜或盖板，并用洗涤缓冲液洗板2次。最后一次洗涤后，通过抽吸或倾倒除去所有的洗涤缓冲液。
[0034]加生物素标记抗体工作液:每孔加100ul生物素标记抗体工作液。盖上新的覆膜，37℃孵育60分钟。
[0035]洗板:取下覆膜或盖板，并用洗涤缓冲液洗板3次，每次浸泡1分钟。最后一次洗涤
后，通过抽吸或倾倒除去所有的洗涤缓冲液。
[0036]加HRP
‑
链霉亲和素结合物(SABC):每孔加100ul SABC工作液。盖上新的覆膜，37℃孵育30分钟。
[0037]洗板:取下覆膜或盖板，用洗涤缓冲液洗涤板5次，每次浸泡1
‑
2分钟。最后一次洗涤后，通过抽吸或倾倒除去所有的洗涤缓冲液。
[0038]加TMB底物溶液:每孔加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断抑郁症的设备，包括：用于分离血浆脑细胞来源外泌体的装置与用于检测所述的血浆脑细胞来源外泌体的维生素D结合蛋白浓度/含量的试剂盒。2.根据权利要求1所述的设备，其特征在于，所述的脑细胞来源外泌体包括小胶质细胞来源外泌体、神经元细胞来源外泌体与星形胶质细胞来源外泌体。3.根据权利要求1所述的设备，其特征在于，所述的用于检测所述的血浆脑细胞来源外泌体的维生素D结合蛋白浓度/含量的试剂盒为ELISA试剂盒。4.根据权利要求1所述的设...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志珺，张高嘉，孔岩，李玲，焦娇，孔艳，徐丹丹，师亚晨，宋瑞泽，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：