湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法技术

本发明专利技术属于中医中药技术领域，具体涉及一种湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，包括(1)色谱条件与系统适用性试验(2)溶液制备(3)测定等步骤。本发明专利技术湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，该方法操作简单，专属性强，检测效率高，重现性好，误差小，适用性广；采用该方法对多家企业生产的湿毒清片中的苦参组分进行检测，能够快速准确检测出槐定碱、苦参碱、槐果碱的含量及其总含量，从而有利于对各个企业生产的湿毒清片进行检验分析和品质判定。的湿毒清片进行检验分析和品质判定。的湿毒清片进行检验分析和品质判定。

【技术实现步骤摘要】
湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法


[0001]本专利技术属于中医中药
，具体涉及一种湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]湿毒清片是一种中药成方制剂，具有养血润燥，化湿解毒，祛风止痒之功效，为皮肤科风疹痒甲类非处方药品，收载于《中国药典》2020年版一部。临床上常用于皮肤瘙痒、血虚湿蕴等皮肤疾病的治疗。由于其疗效确切，广泛应用于临床，其处方组成为地黄、当归、丹参、苦参、蝉蜕、黄芩、白鲜皮、土茯苓、甘草。
[0003]苦参作为湿毒清片处方的主要有效组成之一，具有清热燥湿、杀虫、利尿的功效。临床用于热痢、便血、黄疸、尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、皮肤瘙痒、疥癣麻风，外治滴虫性阴道炎。其主要有效成分包括氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱等多种生物碱。湿毒清片的现行标准中，《中国药典》2020年版一部，不控制氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱和槐果碱的含量，仅以苦参碱为质控指标，不够全面，不尽合理。
[0004]本专利技术的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，采用该方法对不同产地的中药饮片苦参、不同厂家生产的湿毒清片中苦参的多种生物碱组分进行测定，实验中发现，中药饮片苦参中含量较高的组分氧化苦参碱和氧化槐果碱在湿毒清片中几乎检测不到对应组分的色谱峰，根据实验结果，拟定含量较高的槐定碱、苦参碱和槐果碱作为湿毒清片中苦参组分的质控指标，操作简单，专属性强，检测效率高，误差小，检验方法较稳定，适用性广，能有效评价和控制湿毒清片的质量。

技术实现思路

[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下的技术方案：一种湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，包括以下步骤：(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：XTERRA
·
RP18柱，4.6
×
250mm，5μm或等效柱，流动相：乙腈(A)
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至8.0)(B)，梯度洗脱(程序见表1)。流速：1.0ml/min，检测波长：208nm，柱温：25℃，进样量：20μl，理论板数按槐定碱峰计算应不低于5000。表1梯度洗脱程序(2)溶液制备：
①
供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml湿润，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率
320W，频率40kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，回收溶剂至干，残渣加乙腈
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(7∶93)适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加乙腈
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(7∶93)至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，5000转/min离心5min后用0.45μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。
②
对照品溶液的制备：精密称取槐定碱对照品、苦参碱对照品和槐果碱对照品适量，用乙腈
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(7∶93)定量稀释制成每1ml含槐定碱50μg、苦参碱100μg、槐果碱100μg的混合溶液，即得。(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图。供试品溶液中各组分的含量用对照品溶液以外标法计算。
[0006]上述的湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，所述的检测器为紫外
‑
可见分光检测器。
[0007]所述的湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，用HPLC法检测湿毒清片中苦参组分的含量，将苦参组分槐定碱、苦参碱和槐果碱与其它组分分离，可单独测定这三个组分的含量。
[0008]以下为本专利技术湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法的方法学验证情况：1、专属性试验阴性对照溶液的配制：参照处方比例及供试品溶液的制备方法，配制阴性对照溶液。分别精密吸取溶剂、阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各20μl，按前述检测方法进行测定，记录色谱图(见图1、图2、图3、图4)。从图中可见，供试品溶液色谱图中，槐定碱、苦参碱、槐果碱与邻近峰均能达到基线分离，溶剂及阴性对照均无干扰，说明本专利技术方法的专属性良好。
[0009]2、线性关系考察精密称取槐定碱对照品12.49mg、苦参碱对照品10.50mg、槐果碱对照品10.77mg，分别置10ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量，用乙腈
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(7∶93)定量稀释制得不同浓度标准曲线溶液1～8，取制备得到的标准曲线溶液，进样测定，以浓度x(vg/ml)对峰面积y进行线性回归，结果：槐定碱在12.34μg/ml～1234.01μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为y＝32592x
‑
139442，相关系数r为0.9999(见图5)、苦参碱在10.36μg/ml～1036.35μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为y＝44372x
‑
24071，相关系数r为0.9999(见图6)、槐果碱在6.311μg/ml～807.75μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为y＝39536x
‑
13513，相关系数r为0.9999(见图7)
[0010]3、溶液稳定性考察取广州诺金制药有限公司生产的一批样品(批号0257006)制备供试品溶液，分别在放置0、8、16、24、36小时后进样测定，测定槐定碱、苦参碱、槐果碱的峰面积，结果表明供试品溶液在36小时内稳定，槐定碱峰面积的RSD为1.34％、苦参碱峰面积的RSD为0.66％、槐果碱峰面积的RSD为0.81％，测定结果见下表2。表2溶液稳定性试验
时间槐定碱峰面积苦参碱峰面积槐果碱峰面积0小时1065556.64543933.32455485.68小时1069092.04587380.02474841.816小时1075797.84508828.92441704.824小时1043818.74526070.12438677.336小时1080972.74555489.82421562.8平均值1067047.64544340.42446454.5RSD1.34％0.66％0.81％
[0011]4、进样精密度试验取广州诺金制药有限公司生产的一批样品(批号0257006)按前述检测方法中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液1份，连续进样6针，测定槐定碱、苦参碱、槐果碱的峰面积，考察仪器的精密度，结果槐定碱峰面积的RSD为1.14％、苦参碱峰面积的RSD为0.55％、槐果碱峰面积的RSD为0.61％，表明仪器的精密度良好。测定结果见下表3。表3进样精密度试验序号槐定碱峰面积苦参碱峰面积槐果碱峰面积11065556.64649本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.湿毒清片中苦参组分的HPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：XTERRA柱，4.6
×
250mm，5μm或等效柱，流动相：乙腈(A)
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0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至8.0)(B)，梯度洗脱(程序见表1)。流速：1.0ml/min，检测波长：208nm，柱温：25℃，进样量：20μl，理论板数按槐定碱峰计算应不低于5000。表1 梯度洗脱程序(2)溶液制备：
①
供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml湿润，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率320W，频率40kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，回收溶剂至干，残渣加乙腈
‑
0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(7∶93)适量使溶解，转移至5ml量瓶中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄玉英，
申请(专利权)人：黄玉英，
类型：发明
国别省市：