PD-L1免疫组化检测质控品和参考品制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体提供了一种PD

【技术实现步骤摘要】
PD
‑
L1免疫组化检测质控品和参考品


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及PD
‑
L1免疫组化检测质控品和参考品。

技术介绍

[0002]PD
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L1与T细胞表面的受体PD
‑
1结合，发挥负调控作用，抑制T细胞的激活、分化和增殖，使得肿瘤细胞逃避T细胞杀伤，获得免疫逃逸。免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC，简称免疫组化）检测是评估肿瘤组织PD
‑
L1表达状态的一种有效方法，广泛应用于包括非小细胞肺癌（non
‑
small cell lung cancer，NSCLC）等多种恶性肿瘤中。
[0003]目前的检测多采用自建检测方法（Laboratory Developed Tests，LDT），成品PD
‑
L1免疫组化试剂盒较少，因此在开发试剂盒的过程中，需要建立对应IHC检测试剂的稳定的质控品和参考品用作参考和对比。
[0004]中国专利CN202210394699.9公开了一种用于免疫组织化学检测质控品的缓冲液，属于免疫组织化学检测
所述缓冲液中各组分的质量百分数为：卡波姆0.2％
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1％、醇30％
‑
40％、三乙醇胺0.1％
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0.25％、叠氮钠0.005％
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0.015％，余量为去离子水。通过调整缓冲液溶剂、粘度、添加稳定剂、抗菌剂，使其具有挥发迅速、不易扩散、性质稳定、耐超低温储存等特性，解决了原有技术易发生交叉污染、组织/细胞不均匀易堆叠的问题，同时可更长期地保证缓冲液中的组织/细胞抗原稳定，实现超长期保存。但其整体成分较为复杂。
[0005]中国专利CN202210277843.0公开了一种免疫组化染色的质控方法和质控品，质控方法包括以下过程：获得动物或可商业化的器官或组织，用所述器官或组织制作质控蜡块，对所述质控蜡块进行切片得质控片，所述质控片包括至少两种不同增殖细胞抗原密度的部位；将待检人样本与所述质控片同步进行免疫组化染色，分别获取免疫组化后的所述待检人样本的病理图像和所述质控片的质控图像；从所述质控图像中提取至少两种不同增殖细胞抗原密度的所述部位的增殖细胞抗原指数；将各所述部位的所述增殖细胞抗原指数分别与其对应的增殖细胞抗原标准指数进行比较，判断所述免疫组化染色的质量。但其数据处理方法对技术人员要求较高。

技术实现思路

[0006]本专利选用PD
‑
L1阳性和阴性表达的人源组织作为质控品，初步确定质控品包括阳性质控品（扁桃体组织和胎盘组织）和阴性质控品（胃组织）。参考品包括阳性参考品（PD
‑
L1阳性表达的nsNSCLC组织），阴性参考品（PD
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L1阴性表达的nsNSCLC组织）。
[0007]一方面，本专利技术提供了一种PD
‑
L1免疫组化质控品或参考品的制备方法。
[0008]所述的质控品或参考品为组织切片，所述的组织切片样品包括以下前处理步骤：将样品浸泡于西达苯胺溶液。
[0009]优选地，所述的西达苯胺溶液的浓度为0.5
‑
1mg/L，优选为0.8
‑
1mg/L，进一步优选
为0.8mg/L。
[0010]优选地，所述的浸泡时间为5
‑
20min，优选为5
‑
15min，进一步优选为8
‑
10min，更进一步地，为8min。
[0011]所述的制备方法中还包括其他常规的组织切片步骤，包括但不限于：切片、烤片、脱蜡水化、染色、脱水、封片。
[0012]优选地，所述的切片条件为3
‑
5μm。
[0013]优选地，所述的染色步骤为苏木素和伊红染色。
[0014]优选地，所述的组织切片样本为扁桃体、胎盘、胃、非鳞状非小细胞肺癌临床样本中的一种或多种。
[0015]另一方面，本专利技术提供了一种PD
‑
L1免疫组化质控品或参考品。
[0016]所述的质控品或参考品为组织切片，所述的组织切片样品包括以下前处理步骤：将样品浸泡于西达苯胺溶液。
[0017]优选地，所述的西达苯胺溶液的浓度为0.5
‑
1mg/L，优选为0.8
‑
1mg/L，进一步优选为0.8mg/L 。
[0018]优选地，所述的浸泡时间为5
‑
20min，优选为5
‑
15min，进一步优选为8
‑
10min，更进一步地，为8min。
[0019]所述的制备方法中还包括其他常规的组织切片步骤，包括但不限于：切片、烤片、脱蜡水化、染色、脱水、封片。
[0020]优选地，所述的切片条件为3
‑
5μm。
[0021]优选地，所述的染色步骤为苏木素和伊红染色。
[0022]优选地，所述的组织切片样本为扁桃体、胎盘、胃、非鳞状非小细胞肺癌临床样本中的一种或多种。
[0023]再一方面，本专利技术提供了一种前述PD
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L1免疫组化质控品或参考品在制备PD
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L1免疫组化试剂盒中的应用。
[0024]又一方面，本专利技术提供了一种PD
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L1免疫组化试剂盒。
[0025]所述的PD
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L1免疫组化试剂盒中包括前述的质控品和/或参考品。
[0026]所述的PD
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L1免疫组化试剂盒还包括其他用于IHC检测的试剂，如二甲苯、乙醇、抗原修复液、过氧化氢、免疫显色试剂、DAB显色试剂、苏木素、中性树胶中的一种或多种。
[0027]本专利技术的有益效果：1、增加了样品前处理步骤，增强了染色效果，提高了保存稳定性。
[0028]2、设置了扁桃体，胎盘和胃组织质控品，这些组织易于获得，可以多次使用并对PD
‑
L1抗体和稀释液有效性进行评估。
[0029]3、参考品使用临床样本制作，与PD
‑
L1免疫组化待检测样本一致，避免了使用细胞系而导致的因为类型差异产生染色误差，对比效果好。
附图说明
[0030]图1为实施例1中各样本H&E染色结果。
[0031]图2为实施例1中H&E染色合格的扁桃体、胎盘和胃组织样本切片进行IHC检测的染色结果。
[0032]图3为nsNSCLC参考品部分代表性样本免疫组化IHC检测结果。
[0033]图4为徕卡染色机对参考品进行IHC检测结果。
[0034]图5为不同切片厚度对参考品染色的影响。
[0035]图6为nsNSCLC样本组织切片20
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25℃保存效果。
[0036]图7为ns本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PD
‑
L1免疫组化质控品或参考品的制备方法，其特征在于，所述的质控品或参考品为组织切片，所述的组织切片样品包括以下前处理步骤：将样品浸泡于西达苯胺溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的西达苯胺溶液的浓度为0.5
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1mg/L。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的西达苯胺溶液的浓度为0.8
‑
1mg/L。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的西达苯胺溶液的浓度为0.8mg/L。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的浸泡时间为5
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20min。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的浸泡时间为8
‑
10min。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的浸泡时间为8min。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中还包括以下步骤中的一种或多种：切片、烤片、脱蜡水化、染色、脱水、封片。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭佳惠，郑莉霞，于永娟，林东旭，时成龙，张亚飞，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：