一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法技术

本发明专利技术涉及植物RNA提取技术领域，具体涉及一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法。该方法包括以下步骤：将植物组织样品研磨至粉末状，加入改良后的提取液水浴裂解提取，离心收集上清，加入等体积氯仿混匀后静置，离心收集上清，加入6MLiCl溶液沉淀RNA，离心收集沉淀，加入75％无水乙醇洗涤沉淀后，再加入DNA消化液，水浴溶解RNA，最后再加入DNA酶灭活试剂，室温静置后，离心取上清即得。采用本发明专利技术改良后的方法提取的多糖多酚类植物RNA可用于全长转录组文库构建，提取成功率能从64％提高到82％，建库成功率能从92％提高到98％。建库成功率能从92％提高到98％。

【技术实现步骤摘要】
一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法


[0001]本专利技术涉及植物RNA提取
，具体涉及一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法。

技术介绍

[0002]核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸是一类生物聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
[0003]高质量的核糖核酸(RNA)的获得即获得特定生物体在某种状态下所有基因转录产物的总和，是功能基因组学以及遗传学研究的一项重要内容。
[0004]目前对动物、植物和微生物RNA提取的方法很多，其中以Trizol法、酚
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SDS法、RNeasy Plant Mini Kit和CTAB法等几种提取方法的应用最为广泛。其中CTAB法是一种最为有效和经济的提取方法，在植物RNA提取中广泛应用，然而，专利技术人在实际操作中发现，当采用传统的CTAB法进行苹果等多糖多酚类植物的RNA抽提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1，将植物组织样品在液氮条件下研磨至粉末状；步骤S2，向研磨后的样品中加入45～55℃预热的提取液充分混匀后，将样本放入45～55℃水浴锅中消化8～12min，提取液包括以下成分：质量体积比为2％的CTAB、质量体积比为2％的聚乙烯吡咯烷酮、100Mm Tris
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HCl、25Mm EDTA、2M NaCl、体积比为4％的β
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巯基乙醇；步骤S3，裂解完成后，冷却至室温，4℃，10000～12000g离心3～8min，收集上清；步骤S4，上清加入等体积氯仿，漩涡混匀后，静置，4℃，10000～12000g离心8～15min，收集上清，并重复操作至少一次；步骤S5，加入0.4倍上清体积的6M LiCl溶液，上下颠倒混匀，4℃静置过夜沉淀RNA，4℃，12000～14000g离心8～15min，弃上清；步骤S6，加入75％无水乙醇，上下颠倒清洗，12000～14000g离心后，吸去上清，并重复操作至少一次；步骤S7，瞬时离心，吸去残留液体，室温晾干，加入DNA消化液，混匀，水浴溶解RNA；步骤S8，加入DNA酶灭活试剂，室温静置3分钟以上，4℃，10000～12000g离心8～15min，取上清即得。2.根据权利要求1所述的改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法，其特征在于，步骤S2中，水浴消化处理时，每隔2min颠倒混匀一次。3.根据权利要求1所述的改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小康，罗骏，王飞，王洋，汪德鹏，
申请(专利权)人：武汉希望组生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：