一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法技术

本发明专利技术涉及一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，该方法是选用树鼩，采用高脂高糖饲料喂养12

【技术实现步骤摘要】
一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法


[0001]本专利技术属于动物模型构建
，具体涉及一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法。

技术介绍

[0002]Ⅱ型糖尿病(T2DM)是以高血糖为特征的多因素引发的代谢性疾病，对人类的健康造成了严重威胁，与胰岛素抵抗和β细胞缺乏足够的补偿有关，导致胰岛素相对缺乏，慢性高血糖会引起多种并发症，例如神经病变、肾病和视网膜病变，并增加心血管疾病的风险。构建糖尿病动物模型对研究其发病机制、预防、诊断及新治疗药物的筛选具有非常重要的意义。
[0003]目前糖尿病造模方法有饮食诱导、药物诱导和基因工程构建等。饮食诱导主要为高脂高糖饲料喂养动物，与人类自发糖尿病比较相似，但造模时间比较长；药物诱导主要是采用四氧嘧啶(ALX)诱导胰岛β细胞死亡，但ALX对肝肾损伤较大，动物死亡率较高；基因工程构建的Ⅱ型糖尿病动物模型主要是单基因模拟，而Ⅱ型糖尿病是由多个基因表达改变联合环境和遗传因素等共同引起的，因此很难完全模拟临床实际中的Ⅱ型糖尿病的发生与发展过程。
[0004]目前建立糖尿病的动物有大小鼠、非人灵长类动物、新西兰兔、猪和犬等，基于不同物种的糖尿病开展了各个方向相关研究。树鼩作为一种小型的攀鼩目动物，具有体型小、繁殖快的特点，进化上比啮齿类更接近非人灵长类，在神经系统、视觉系统、免疫系统和代谢系统上与人相似，已被用于眼部、视神经以及代谢性相关疾病以及病毒性疾病模型的研究。树鼩血液基础生理生化指标接近于人类，并且树鼩有自发的糖脂代谢异常现象，代谢系统与人类近似，这些树鼩的表型，如酮症和白内障等均与人类糖尿病表型一致，且病理学检查显示其胰岛的β细胞缺失，与人类糖尿病发病机理一致，以上都表明树鼩在代谢相关疾病的研究中是一个潜在有可能替代非人灵长类的实验动物。
[0005]目前树鼩Ⅱ型糖尿病造模方法见表1，由表1可见，目前尚缺乏造模方法简单、造模时间快速、死亡率低以及稳定的模拟人类糖脂代谢途径的Ⅱ型糖尿病动物模型，因此如何克服现有技术的不足是目前动物模型构建
亟需解决的问题。
[0006]表1树鼩Ⅱ型糖尿病造模方法汇总表
[0007]
技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法。利用本方法可以使树鼩持续性高血糖；该方法是采用高脂高糖饲料喂养树鼩1周后，采用STZ给药，再采用高脂高糖饲料喂养1周，来获得Ⅱ糖尿病树鼩；该方法成模率高、造模周期短。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，树鼩采用高脂高糖饲料喂养12
‑
15天，自由取食，自由饮水；在喂养第7
‑
9天时，利用链脲佐菌素对树鼩给药，剂量为90
‑
110mg/kg；
[0011]所述的高脂高糖饲料包括按照重量份数计的如下组分：基础饲料68
‑
70份、猪油9
‑
11份、白糖9
‑
11份、果糖9
‑
11份、胆固醇0.9
‑
1.2份。
[0012]进一步，优选的是，树鼩选择2
‑
3岁健康雄性树鼩，体重150g
‑
170g。
[0013]进一步，优选的是，在喂养第6
‑
8天时，树鼩空腹11
‑
13h后，利用链脲佐菌素对树鼩给药。
[0014]进一步，优选的是，树鼩采用高脂高糖饲料喂养14天，自由取食，自由饮水；在喂养第7天晚上开始禁食，空腹12h后，利用链脲佐菌素对树鼩给药，剂量为100mg/kg。
[0015]进一步，优选的是，给药时，将链脲佐菌素配置为浓度为2％的溶液后给药。
[0016]进一步，优选的是，将STZ溶于0.1mmol/L柠檬酸缓冲液配制成2％STZ溶液，混匀，采用0.22μm的滤过膜过滤后，给药。
[0017]进一步，优选的是，选择2
‑
3岁健康雄性树鼩，体重150g
‑
170g，采用高脂高糖饲料喂养2周；所述的高脂高糖饲料包括按照重量份数计的如下组分：基础饲料69份、猪油10份、白糖10份、果糖10份、胆固醇1份；
[0018]将树鼩高脂高糖饲料喂养1周后，给予STZ药物100mg/kg，给药时间不超过10分钟；
[0019]当树鼩空腹血糖≥11.1mmol/L，持续4周(从血糖大于等于11.1的时候开始计算)，尿糖≥++，确定该树鼩Ⅱ型糖尿病模型建立成功。
[0020]进一步，优选的是，基础饲料中，粗蛋白≥160g/kg，粗脂肪≥40g/kg，粗纤维≤40g/kg，粗灰分≤70g/kg，钙8～12g/kg，总磷6～8g/kg，钙：磷的质量比为1.2:1～1.5:1。
[0021]结果显示，2周后，实验组空腹血糖≥11.1mmol/L，与对照组血糖呈显著性差异，且持续性高血糖，尿糖++++，确定该Ⅱ型糖尿病模型建立成功。体重呈下降趋势，10周体重与自身最初值对比差异具有统计学意义；胰岛素水平升高，与对照组比较有统计学意义。4周后动物被毛无光泽，出现多饮、多食、多尿，晚期尾部、脚部有溃疡形成；可见采用高脂高糖饲料联合STZ药物快速造模树鼩Ⅱ型糖尿病是可行的，可作为研究糖尿病发病机制、预防、诊断及新治疗药物的筛选的动物模型。
[0022]本专利技术采用的高脂高糖饲料，配方为69％基础饲料(其中基础饲料组分：粗蛋白≥160g/kg，粗脂肪≥40g/kg，粗纤维≤40g/kg，粗灰分≤70g/kg，钙8～12g/kg，总磷6～8g/kg，钙：磷1.2:1～1.5:1)、10％猪油、10％白糖、10％果糖和1％胆固醇。该高脂高糖饲料有较好的适口性，增加了动物的采食率。高脂高糖饲料除了诱导动物胰岛素抵抗以外，还可使动物保持高血糖状态。本专利技术的高脂高糖饲料具有成本低廉、饲养加工简单和可操作性强的特点。
[0023]其中，胆固醇为常规市售产品，购自Macklin。柠檬酸、柠檬酸钠和STZ为常规市售
产品，柠檬酸和柠檬酸钠购自aladdin，STZ购自sigma。
[0024]本专利技术对于给药方式不做具体限定，可以为口服、注射、灌注、喷雾等。
[0025]团队之前采用大剂量STZ(120mg/kg)给药，在0天、7天、28天给药，3周后血糖才升高，耗时稍长，实验效率会大大受到影响。在本专利技术之前，对比例1采用过高脂高糖饲料喂养6周后给药STZ(100mg/kg)，但是STZ需要给药2
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3次，并且3周后才出现血糖升高，耗时长。通过改善对比例1的方法，本专利技术采用1周高脂高糖饲料喂养后给药STZ(100mg/kg)，再喂养1周高脂高糖饲料，在第1周使动物糖代谢紊乱，立即给药STZ药物，并且再喂养1周高脂高糖饲料，使其不能自我调节，可使其持续性高血糖，共选入16只动物，造模成功14只，成模率88％，死亡率0，造模时间短，可提高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，其特征在于：树鼩采用高脂高糖饲料喂养12
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15天，自由取食，自由饮水；在喂养第7
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9天时，利用链脲佐菌素对树鼩给药，剂量为90
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110mg/kg；所述的高脂高糖饲料包括按照重量份数计的如下组分：基础饲料68
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70份、猪油9
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11份、白糖9
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11份、果糖9
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11份、胆固醇0.9
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1.2份。2.根据权利要求1所述的树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，其特征在于：树鼩选择2
‑
3岁健康雄性树鼩，体重150g
‑
170g。3.根据权利要求1所述的树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，其特征在于：在喂养第6
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8天时，树鼩空腹11
‑
13h后，利用链脲佐菌素对树鼩给药。4.根据权利要求1所述的树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，其特征在于：树鼩采用高脂高糖饲料喂养14天，自由取食，自由饮水；在喂养第7天晚上开始禁食，空腹12h后，利用链脲...

【专利技术属性】
技术研发人员：代解杰，邱敏，罕园园，陆彩霞，孙晓梅，王文广，李娜，仝品芬，郝佩琪，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：