一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于活性肽蛋白技术领域，具体涉及一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽及其制备方法与应用。本发明专利技术从多管藻藻红蛋白酶解产物中筛选得到具有特定序列的抗氧化、抗衰老活性肽，多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体为Arg

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于活性肽蛋白
，具体涉及一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]体内的自由基过量产生会导致衰老及多种疾病(如关节炎、动脉硬化、冠心病、神经性疾病和癌症等)。因此，应用抗氧化剂、抗衰老剂能调节生理生化反应、防治疾病和延缓衰老。
[0003]食品中的脂质氧化或酸败形成脂质过氧化物会引起食品变质。在食品中添加抗氧化剂能防止脂质氧化，延长保质期。目前，在食品添加丁基羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、丁基羟基甲苯(BHT)和没食子酸丙酯(PG)等人工合成抗氧化剂，来延缓食品的氧化。但化学合成抗氧化剂存在潜在的健康风险，研制安全、高效的天然抗氧化剂十分必要。
[0004]抗氧化肽是一类具有清除自由基、抑制脂质过氧化以及螯合金属离子等作用的生物活性肽，具有抗氧化、抗衰老功效，可用于防治疾病、延缓衰老和延长食品保质期，因此抗氧化肽可用作功能性食品、保健品、药品、化妆品及食品防腐剂等。抗氧化肽的用途广泛，应用前景广阔。抗氧化肽的研究受到国内外的关注。
[0005]多管藻属是真红藻纲、鲜菜目、松节藻科的高等红藻。中国沿海多管藻属红藻有10余种，黄渤海有3种，其中多管藻(Polysiphonia urceolata)是优势种。在青岛，春季繁盛，野生多管藻原料丰富，3
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5月进入繁殖期后大型世代消失。多管藻富含蛋白质和其他活性组分，其中的蛋白类的生物活性物质主要是藻胆蛋白。多管藻的藻胆蛋白包括藻红蛋白(R
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Phycoerythrin，R
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PE)、藻红蓝蛋白和别藻蓝蛋白三种，其中的藻红蛋白是三峰型藻红蛋白，为六聚体结构，水溶性好，性质稳定，荧光量子产率高，在浓度为10
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12
M时不解聚且荧光亮度高，在488nm处的吸光度比B
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PE高，是优秀的色素蛋白、荧光标记物和药物。多管藻的R
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PE含量高，而且多管藻的藻胶含量低，因此R
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PE的分离纯化效率高，多管藻也成为R
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PE制备与研究的主要藻材料。多管藻藻红蛋白的生物活性高，具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗肿瘤等多种生物学功能，因此多管藻藻红蛋白是筛选生物活性肽的优秀蛋白原料。目前，由多管藻藻红蛋白筛选的抗氧化肽、抗衰老肽较少。
[0006]目前已经从多种藻类(如石莼、小球藻、紫菜等)中筛选出具有抗氧化、抗衰老作用的多肽。例如，条斑紫菜RYVSYALLAGDPSVLEDRC、螺旋藻PNN、紫菜DYYKR，等。另外，还从其它食源性蛋白中发现一些抗氧化肽，如海鞘LWHTH，鹿茸WDVK，火腿MWTD、APYMM、FWIIE，海考克氏菌SSQ、PE、DI、LE，黑鳗鱼DLVKVEA等。
[0007]抗氧化肽的活性评价方法分为体内评价和体外评价两种。体外评价方法包括自由基清除能力测定、金属离子螯合能力测定、还原能力测定等；体内评价方法主要是在细胞、动物模型甚至人体上进行抗氧化活性测定。体外抗氧化性能测定法应用广泛，但没有考虑制剂在体内的生物利用度和代谢，而基于动物模型或人体的体内测定法能够真实评价制剂
的抗氧化功效，但体内测定法的成本高、耗时长、难度大。
[0008]秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的生命周期短、个体小、易培养、遗传物质简单，而且与人类的生化和遗传途径高度相似，因此被广泛用作评价抗氧化和抗衰老活性的模型生物。用活性肽孵育的线虫体内的活性氧水平(ROS)、抗氧化酶活性(SOD和CAT)和丙二醛(MDA)含量的变化等能够反映活性肽的抗氧化活性。线虫的寿命及死亡率是抗衰老活性的最直观指标。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻活性肽及其制备方法与应用，本申请首次从多管藻藻红蛋白中筛选得到了一条未经报道的生物活性肽RARPRF，质谱鉴定了小肽RARPRF的结构，生物信息学分析RARPRF具有安全、无毒性、生物活性高的优点，体内、体外试验测定新肽RARPRF具有抗氧化、抗衰老活性，因此作为功能成分用于抗氧化、抗衰老的食品、保健品、化妆品以及药品中，具有良好的应用前景。
[0010]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0011]一方面，本专利技术提供了一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽，所述活性肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0012]所述SEQ ID NO.1的氨基酸序列为Arg
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Ala
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Arg
‑
Pro
‑
Arg
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Phe(RARPRF)。
[0013]另一方面，本专利技术提供了组合物，所述组合物包含上述肽以及药学、食品或保健品上可接受的辅料。
[0014]另一方面，本专利技术提供了上述肽或者组合物在制备抗氧、抗衰老化妆品品中的用途。
[0015]另一方面，本专利技术提供了上述肽或者组合物在制备抗氧化、抗衰老的药物中的应用。
[0016]另一方面，本申请提供了上述肽或者组合物在制备抗氧化、抗衰老食品或保健品中的应用。
[0017]另一方面，本申请提供了筛选上述肽的方法，所述方法包括：
[0018](1)酶解：使用酶法对多管藻藻红蛋白溶液进行水解得到蛋白水解物；
[0019](2)筛选：对蛋白水解物进行超滤处理；通过高效液相色谱
‑
串联质谱法得到超滤组分中置信度较高的肽段序列；对得到的肽段序列进行虚拟筛选，根据生物信息学预测打分，筛选无毒性、生物学活性高、具有抗氧化、抗衰老活性的多肽；
[0020](3)体外活性测定：利用DPPH自由基清除率实验、ABTS自由基清除率实验鉴定多肽的体外抗氧化活性；
[0021](4)体内活性测定：在秀丽隐杆线虫上测定多肽的体内抗氧化、抗衰老活性。
[0022]进一步地，所述水解使用碱性蛋白酶。
[0023]进一步地，所述超滤组分为＜3kDa的组分。
[0024]有益效果
[0025]本专利技术公开了一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽，本申请首次从多管藻藻红蛋白中筛选得到了一条具有抗氧化、抗衰老活性的未经报道的小肽RARPRF，并明确了小肽RARPRF的结构，同时RARPRF具有安全、无毒、生物活性高的优点，因此
作为功能成分用于抗氧化、抗衰老的食品、保健品、化妆品以及药品中，具有良好的潜力和应用前景。
附图说明
[0026]图1 RARPRF的质谱分析图；
[0027]图2多肽RARPRF处理的秀丽隐杆线虫的氧化应激存活曲线；
[0028]图3多肽RARPRF处理的秀丽隐杆线虫的抗衰老存活曲线。
具体实施方式
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽，其特征在于，所述活性肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述SEQ ID NO.1的氨基酸序列为：Arg
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Ala
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Arg
‑
Pro
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Arg
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Phe(RARPRF)。2.多管藻藻红蛋白活性肽组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求1所述的具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽，以及化妆品、食品、药物或保健品上可接受的辅料。3.权利要求1所述的多管藻藻红蛋白活性肽或权利要求2所述的多管藻藻红蛋白活性肽组合物在制备具有抗氧化、抗衰老作用的产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括化妆品、食品、药物或保健品。5.一种具有抗氧化、抗衰老活性的多管藻藻红蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)多管藻藻红蛋白的提取：对多管藻进行藻红蛋白提取，得到多管藻藻红蛋白溶液；(2)酶解：使用酶法对步骤(1)所得的多管藻藻红蛋白溶液进行水解得到多管藻藻红蛋白肽溶液；(3)超滤：对步骤(2)所得的多管藻藻红蛋白肽溶液进行超滤处理，得到超滤组分；(4)筛选：对步骤(3)所得的超滤组分进行筛选，即得到所述的多管藻藻红蛋白活性肽。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述多管藻藻红蛋白的提取具体包括以下步骤：将多管藻分散到蒸馏水中，浸泡、冷冻、融化，...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜世敢，朱丽萍，张楠，李富强，张廷新，赵佳，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：