一种链霉亲和素藻红蛋白冻干粉的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种链霉亲和素藻红蛋白的冻干粉制备方法，包括以下内容：针对链霉亲和素藻红蛋白优化了一种冻干预混试剂，包括浓度为300μg/mL链霉亲和素藻红蛋白、3～8％(w/v)糖类、2～4％(w/v)高分子化合物、0.1～1％(v/v)非离子型表面活性剂和PH缓冲液，配制试剂后按所需体积进行分装准备冻干；按照以下冻干程序进行冷冻干燥：预冻阶段：

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素藻红蛋白冻干粉的制备方法


[0001]本专利技术涉及冷冻干燥
，特别涉及一种链霉亲和素藻红蛋白的冻干粉制备方法。

技术介绍

[0002]藻红蛋白(P
‑
phycoerythrin,PE)是从红藻中分离出的一种藻胆蛋白，在一定的激发波长下可发出黄橙色荧光，与化学合成荧光染料相比，具有无毒性、荧光量子产率高、荧光近红光区、背景光干扰小等特点，是一种常用的荧光标记物。链霉亲和素(Streptavidin,SA)是一种细菌来源的小分子蛋白，与生物素亲和力非常高，可与其特异性结合。链霉亲和素偶联藻红蛋白后的链霉亲和素藻红蛋白常用于检测各种带生物素标记的蛋白、核酸或其它分子，可应用于酶联免疫、免疫组化、流式分析、原位杂交及斑点杂交等实验。
[0003]冷冻干燥技术是将含水物质降温冻结成固体后，在真空条件下水直接由固态变为气态升华，以去除水分保存物料的方法，可使物料的形态、活性得到最大程度得保护，目前广泛应用于食品、医药、微生物领域。
[0004]链霉亲和素藻红蛋白(SAPE)的光稳定性较差，且对温度较为敏感，长期保存过程中易发生荧光淬灭，常见的链霉亲和素藻红蛋白均为液态形式，需要保存在2～8℃的避光环境中。在运输及保存过程中常常因为气候问题(如夏季气温过高)、地域问题(如东北地区温度过低)等情况，导致实际温度超出其保存温度，从而使链霉亲和素藻红蛋白变性、荧光信号下降等问题，且目前市面上尚无可在常温环境下保存的链霉亲和素藻红蛋白。
[0005]公开号为CN106596920A的专利中提出了一种链霉亲和素藻红蛋白的冷冻稳定剂的制备和应用，使链霉亲和素藻红蛋白可以在冷冻条件下保持稳定，减少信号衰减。但其只适用于低温环境中，较高温度下信号仍会降低。

技术实现思路

[0006]在实际应用中，常常由于保存不当或试剂运输过程温度变化范围过大而使链霉亲和素藻红蛋白荧光值下降，导致信号变低，检测灵敏度下降等问题。为解决以上问题，本专利技术提供一种链霉亲和素藻红蛋白冻干粉的制备方法，通过冷冻干燥技术，使链霉亲和素藻红蛋白可以实现常温保存或运输，试剂稳定性好且降低运输保存成本。
[0007]本专利技术提供一种针对链霉亲和素藻红蛋白的冻干预混试剂，其特征在于，包括浓度为300μg/mL链霉亲和素藻红蛋白、3～8％(w/v)糖类、2～4％(w/v)高分子化合物、0.1～1％(v/v)非离子型表面活性剂和pH缓冲液，配制试剂后按所需体积进行分装准备冻干。
[0008]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述糖类是非还原性二糖。
[0009]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述糖类是蔗糖或海藻糖的一种或两种。
[0010]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述高分子化合物是蛋白质或聚合物。
[0011]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述蛋白质是牛血清蛋白BSA。
[0012]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述聚合物是聚乙二醇PEG、聚乙烯吡咯烷酮PVP、明胶或聚乙烯亚胺PEI中的一种。
[0013]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述非离子型表面活性剂是吐温Tween、曲拉通Triton、布里杰Brij或普朗尼克Pluronics中的一种。
[0014]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述非离子型表面活性剂是吐温Tween或曲拉通Triton。
[0015]具体的，所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述pH缓冲液是pH8.0的10mM的Tris
‑
HCl和1mM的EDTA的混合液。
[0016]本专利技术还提供一种链霉亲和素藻红蛋白冻干粉制备方法，其特征在于，按照以下冻干程序冷冻干燥如上述所提供的冻干预混试剂：预冻阶段：
‑
50℃，150min；一次干燥阶段：
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40℃，240min；
‑
30℃，480min；解析干燥阶段：25℃，240min。
[0017]本专利技术提供一种链霉亲和素藻红蛋白冻干粉的制备方法，可使链霉亲和素藻红蛋白在较宽的温度范围中保存，不需要冷链运输，在常温可稳定保存，不仅使用方便，还能降低运输保存成本。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面对本专利技术所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1本专利技术实施例一的5组冻干预混试剂冻干后粉末SAPE，从左到右依次为组1到组5。
[0020]图2本专利技术实施例三的3组冻干预混试剂冻干后粉末SAPE，从左到右依次为组1到组3。
具体实施方式
[0021]下面将结合附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]实施例一
[0023]1.制备链霉亲和素藻红蛋白的冻干预混试剂
[0024]分别按以下配比配制5组冻干预混试剂，并用未进行冻干的液态SAPE作为对照组，其中SAPE的浓度为300μg/mL:
[0025]冻干组1：3％(w/v)海藻糖、2％(w/v)聚乙二醇PEG、0.1％(v/v)Tween
‑
20以及pH8.0的10mM的Tris
‑
HCl和1mM的EDTA缓冲液，300μg/mL的SAPE。
[0026]冻干组2：3％(w/v)蔗糖、2％(w/v)聚乙二醇PEG、0.1％(v/v)Tween
‑
20以及pH8.0的10mM的Tris
‑
HCl和1mM的EDTA缓冲液，300μg/mL的SAPE。
[0027]冻干组3：3％(w/v)海藻糖、2％(w/v)BSA、0.1％(v/v)Tween
‑
20以及pH8.0的10mM
的Tris
‑
HCl和1mM的EDTA缓冲液，300μg/mL的SAPE。
[0028]冻干组4：3％(w/v)海藻糖、2％(w/v)聚乙二醇PEG、0.1％(v/v)Triton以及pH8.0的10mM的Tris
‑
HCl和1mM的EDTA缓冲液，300μg/mL的SAPE。
[0029]冻干组5：300μg/mL的SAPE。
[0030]液态对照组：300μg/mL的液态SAPE。
[0031]2.冷冻干燥
[0032]将配制好的预混液分装在离心管中，按照以下冻干程序进行冻干,预冻阶段：
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50℃，150min；一次干燥阶段：
‑
40℃，240min；
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对链霉亲和素藻红蛋白的冻干预混试剂，其特征在于，包括浓度为300μg/mL链霉亲和素藻红蛋白、3～8％(w/v)糖类、2～4％(w/v)高分子化合物、0.1～1％(v/v)非离子型表面活性剂和pH缓冲液，配制试剂后按所需体积进行分装准备冻干。2.根据权利要求1所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述糖类是非还原性二糖。3.根据权利要求2所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述糖类是蔗糖或海藻糖的一种或两种。4.根据权利要求1所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述高分子化合物是蛋白质或聚合物。5.根据权利要求4所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述蛋白质是牛血清蛋白BSA。6.根据权利要求4所述的冻干预混试剂，其特征在于：所述聚合物是聚乙二醇PEG、聚乙烯吡咯烷酮PVP、明胶或聚乙烯亚胺PEI中的一种。7.根据权利要求1所述的冻干预混试...

【专利技术属性】
技术研发人员：方剑秋，王佳琳，沙海天，白艳军，
申请(专利权)人：万子健生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：