一种单克隆抗体的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种单克隆抗体的筛选方法。该方法包括：采用各个不同的第一核酸分子标识符和各个不同的第二核酸分子标识符并基于交叉定位标识法，对微孔芯片中的各个微孔进行编码，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息；基于所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息对单克隆抗体进行筛选。该筛选方法可以降低操作难度和筛选成本，还可以大大提高实验通量。实验通量。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体的筛选方法


[0001]本专利技术涉及抗体筛选
，尤其涉及一种单克隆抗体的筛选方法。

技术介绍

[0002]单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。它由两条重链和两条轻链组成，可分为重链可变区、轻链可变区、重链恒定区和轻链恒定区。
[0003]现有的单克隆筛选方法主要存在以下缺陷：
[0004]筛选成本较高、周期长，操作繁琐、操作难度高和实验通量低，需要对检测到的抗体分泌细胞进行逐个回收，回收步骤繁琐，细胞丢失率高，使用的仪器复杂且昂贵，因此难以实现广泛的应用。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种单克隆抗体的筛选方法，以解决现有技术中存在的技术问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术实施例提供了一种单克隆抗体的筛选方法，包括：
[0008]采用各个不同的第一核酸分子标识符和各个不同的第二核酸分子标识符并基于交叉定位标识法，对微孔芯片中的各个微孔进行编码，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息；
[0009]基于所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息对单克隆抗体进行筛选。
[0010]可选地，采用各个不同的第一核酸分子标识符和各个不同的第二核酸分子标识符并基于交叉定位标识法，对微孔芯片中的各个微孔进行编码，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息，包括：
[0011]通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中；
[0012]通过竖直方向的通道将各个不同的第二核酸分子标识符、连接序列和连接酶加入到所述微孔芯片的各个微孔中，以使所述第一核酸分子标识符与所述第二核酸分子标识符连接在一起，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息。
[0013]可选地，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：
[0014]在各个不同的第一核酸分子标识符的5
’
端修饰功能基团；
[0015]通过水平方向的通道并基于生物或者化学反应，将所述各个不同的第一核酸分子标识符连接到微孔芯片的各个微孔中。
[0016]可选地，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：
[0017]将各个不同的第一核酸分子标识符与微载体连接；
[0018]通过水平方向的通道将连接有所述第一核酸分子标识符的所述微载体加入到微孔芯片的各个微孔中。
[0019]可选地，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：
[0020]利用聚合反应将各个不同的第一核酸分子标识符转换成各个不同的聚合物；
[0021]通过水平方向的通道将所述各个不同的聚合物加入到微孔芯片的各个微孔中。
[0022]可选地，所述第一核酸分子标识符由5
’
至3
’
方向上包括通用域、第一定位域和连接域；其中，各个第一核酸分子标识符的第一定位域各不相同，所述连接域用于连接第一核酸分子标识符与第二核酸分子标识符。
[0023]可选地，所述第二核酸分子标识符由3
’
至5
’
方向上包括：连接域互补区、第二定位域、分子标记和模板转换寡核苷酸；其中，各个第二分子标识符的第二定位域各不相同，所述分子标记用于提供与核酸分子标识符杂交的核酸种类信息以及区分与不同核酸分子标识符杂交的核酸类型。
[0024]可选地，基于所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息对单克隆抗体进行筛选，包括：
[0025]在编码后的所述微孔芯片上涂覆与受体荧光探针偶联的抗原；
[0026]将B细胞分散到所述微孔芯片的各个微孔中，对装载了B细胞的所述微孔芯片进行培养，以使所述B细胞分泌出特异性抗体；
[0027]利用荧光共振能量转移机制并结合荧光快速成像，分析和检测所述特异性抗体，以确定分泌了特异性抗体的B细胞在所述微孔芯片中的位置信息；
[0028]根据分泌了特异性抗体的B细胞在所述微孔芯片中的位置信息，在所述微孔芯片的微孔中合成cDNA，从而构建B细胞富集文库；
[0029]对所述B细胞富集文库进行测序，从而筛选单克隆抗体。
[0030]可选地，利用荧光共振能量转移机制并结合荧光快速成像，分析和检测所述特异性抗体，以确定分泌了特异性抗体的B细胞在所述微孔芯片中的位置信息，包括：
[0031]向所述微孔芯片的各个微孔中加入与供体探针偶联标记的抗IgG二抗混合液，以使所述特异性抗体与带受体荧光探针的抗原结合；
[0032]采用显微镜扫描所述微孔芯片，确定存在荧光信号的微孔并进行拍照成像，同时记录所述存在荧光信号的微孔的位置信息；
[0033]通过荧光信号进行特异性抗体检测，以确定分泌了特异性抗体的B细胞在所述微孔芯片中的位置信息。
[0034]上述专利技术实施例的技术方案具有如下优点或有益效果：本专利技术实施例使用的微孔芯片制作简单，大大降低实验门槛，利用简单的正交编码进行核酸编码，使用的核酸编码条数减少，降低了编码成本，通过对各个微孔进行核酸编码可以增加实验通量，并且操作简单，对微孔进行核酸编码可以获取细胞的空间信息，拓宽了应用的广度，检测到目的细胞之后无需逐一回收，因此实验中无需用到昂贵的仪器，大大降低实验成本。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0036]图1根据本专利技术实施例的微孔芯片核酸编码示意图；
[0037]图2是根据本专利技术实施例的核酸编码序列连接示意图；
[0038]图3是根据本专利技术实施例的X通道式芯片的结构示意图；
[0039]图4是根据本专利技术实施例的Y通道式芯片的结构示意图；
[0040]图5是根据本专利技术实施例的X通道式芯片的局部示意图；
[0041]图6是根据本专利技术实施例的Y通道式芯片的局部示意图；
[0042]图7是根据本专利技术实施例的分泌抗体检测示意图。
具体实施方式
[0043]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0044]现有技术利用泊松分布原理进行单细胞分散，导致细胞丢失率高，在细胞回收上使用的方法操作复杂难度高，且设备昂贵，操作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，包括：采用各个不同的第一核酸分子标识符和各个不同的第二核酸分子标识符并基于交叉定位标识法，对微孔芯片中的各个微孔进行编码，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息；基于所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息对单克隆抗体进行筛选。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，采用各个不同的第一核酸分子标识符和各个不同的第二核酸分子标识符并基于交叉定位标识法，对微孔芯片中的各个微孔进行编码，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息，包括：通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中；通过竖直方向的通道将各个不同的第二核酸分子标识符、连接序列和连接酶加入到所述微孔芯片的各个微孔中，以使所述第一核酸分子标识符与所述第二核酸分子标识符连接在一起，从而得到所述微孔芯片中的各个微孔的位置编码信息。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：在各个不同的第一核酸分子标识符的5
’
端修饰功能基团；通过水平方向的通道并基于生物或者化学反应，将所述各个不同的第一核酸分子标识符连接到微孔芯片的各个微孔中。4.根据权利要求2所述的单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：将各个不同的第一核酸分子标识符与微载体连接；通过水平方向的通道将连接有所述第一核酸分子标识符的所述微载体加入到微孔芯片的各个微孔中。5.根据权利要求2所述的单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，通过水平方向的通道将各个不同的第一核酸分子标识符加入到微孔芯片的各个微孔中，包括：利用聚合反应将各个不同的第一核酸分子标识符转换成各个不同的聚合物；通过水平方向的通道将所述各个不同的聚合物加入到微孔芯片的各个微孔中。6.根据权利要求2
‑
5中任一项所述的单克隆抗体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨朝勇，朱春，俞希远，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：