一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，涉及一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，检测试纸按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交。该检测试纸与、DNA裂解液、初检试剂和复检试剂构成检测试剂盒，DNA裂解液，用于对核酸提取区内的样品裂解释放幽门螺杆菌核酸；初检试剂，用于对检测试纸初检区的幽门螺杆菌核酸进行反应释放荧光团；复检试剂，用于对检测试纸复检区中捕获探针捕获的幽门螺杆菌核酸进行酶切循环扩增同时进行反应释放荧光团。本发明专利技术集核酸提取与检测为一体，灵敏地检测唾液样本中幽门螺杆菌核酸，并通过不同分区的结果来进行半定量地筛查。筛查。筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸


[0001]本专利技术属于生物检测
，涉及一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]由于幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的感染具有普遍性和长期性，无论是对其进行控制、治疗还是预后跟踪，都需要长期、频繁、实时的检验，给病人带来了很大的负担，便捷、家用和廉价的检测方法对其防治工作有重要意义。据专利技术人研究了解，目前没有能够快速、灵敏、准确检测H.pylori的家用产品。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒，集核酸提取与检测为一体，灵敏地检测唾液样本中幽门螺杆菌核酸，并通过不同分区的结果来进行半定量地筛查。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0006]一方面，一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，所述样品区设置为用于滴加样品，所述复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交。
[0007]另一方面，一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒，包括：
[0008]检测试纸，按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，所述样品区设置为用于滴加样品，所述复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交；
[0009]DNA裂解液，用于对核酸提取区内的样品裂解释放幽门螺杆菌核酸；
[0010]初检试剂，用于对检测试纸初检区的幽门螺杆菌核酸进行反应释放荧光团；
[0011]复检试剂，用于对检测试纸复检区中捕获探针捕获的幽门螺杆菌核酸进行酶切循环扩增同时进行反应释放荧光团。
[0012]本专利技术在一个检测试纸中同时设置初检区和复检区，当幽门螺杆菌核酸核酸量较多时，通过初检试剂在初检区进行反应，即可通过释放的荧光团对幽门螺杆菌进行可视化检测，当幽门螺杆菌核酸核酸量较少时，仅在初检区进行反应释放的荧光团较少，荧光信号肉眼不可辨，此时，再通过复检试剂在复检区进行循环扩增同时进行反应释放荧光团，经过扩增后荧光团的释放量增多，从而产生肉眼可辨的荧光信号，由此实现高浓度幽门螺杆菌与低浓度幽门螺杆菌的筛查。
[0013]由于不同时间获得样品中的幽门螺杆菌浓度不同，当采用初检浓度较低时，再采
样进行复检，存在样品不同导致的误差，因而本专利技术在同时设置初检区和复检区时，还设置样品区、核酸提取区，实现一次采样，能够同时进行初检和复检。其过程为：将样品置于样品区时，经过流动进入核酸提取区，通过DNA裂解液对样品中的幽门螺杆菌核酸进行提取，提取后的幽门螺杆菌核酸进入初检区和复检区。由于初检区进行即时检测，因而可以通过添加初检试剂后进行孵育即可实现初次检测。而复检区是在初检后进行再次检测，因而设置捕获探针，在核酸提取区提取的幽门螺杆菌核酸依次进入初检区和复检区后，被复检区内的捕获探针捕获，从而同一样品提取的幽门螺杆菌核酸固定在复检区，当进行复检时，添加复检试剂即可实现对初检后的同一样品中的幽门螺杆菌核酸进行再次检测，避免再次采样带来的误差，检测更为准确。
[0014]本专利技术的有益效果为：
[0015]1.本专利技术将样品区、核酸提取区、初检区和复检区设置在同一检测试纸中，能够实现核酸提取与检测通过一次进样完成，大大缩短了样本前处理的时间，适用于现场即时检测，方便家用，同时利用初检区和复检区中荧光团的释放，可以通过可视化条带信息实现对幽门螺杆菌核酸的检测。
[0016]2.本专利技术的初检区和复检区分别与初检试剂和复检试剂配合，通过一次信号转化和循环信号扩增完成对不同浓度的幽门螺杆菌核酸进行检测，通过不同区的荧光信号能够用于初步判定幽门螺杆菌感染的不同阶段，在激发光照射下以荧光信号的强弱表示幽门螺杆菌核酸的浓度高低，可以灵敏地对不同浓度范围的幽门螺杆菌进行检测。
附图说明
[0017]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0018]图1为本专利技术实施例的检测原理示意图；
[0019]图2为本专利技术实施例的可行性验证结果图，a为荧光谱图，b为凝胶电泳图；
[0020]图3为本专利技术实施例初检区进行CRISPR/Cas12a检测的条件优化结果图，a为荧光信号强度与温度变化关系的柱状图，b为cas12a酶浓度对荧光信号强度影响曲线，c为目标链(幽门螺杆菌核酸)加入后荧光信号随时间变化曲线，d为荧光信号强度与报告DNA(reporter DNA)浓度的关系柱状图；
[0021]图4为本专利技术实施例初检区和复检区对不同浓度目标链(幽门螺杆菌核酸)检测的结果图；a为高浓度目标链所对应的荧光谱图，b为高浓度目标链检测标准曲线拟合，c为低浓度目标链所对应的荧光谱图，d为低浓度目标链检测标准曲线拟合；
[0022]图5为本专利技术检测不同浓度幽门螺杆菌核酸的检测结果，a为高浓度(0.1nM)样品条带，b为低浓度(0.01nM)样品条带。
具体实施方式
[0023]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0024]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根
据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0025]鉴于目前没有能够快速、灵敏、准确检测H.pylori的家用产品，本专利技术提出了一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒。
[0026]本专利技术的一种典型实施方式，提供了一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，所述样品区设置为用于滴加样品，所述复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交。
[0027]该实施方式的一些实施例中，捕获探针为发夹探针，发夹探针连接纳米金。通过纳米金将捕获探针固定在复检区，能够将幽门螺杆菌核酸固定在复检区，从而触发酶切循环反应，更有利于实现低灵敏检测。
[0028]该实施方式的一些实施例中，核酸提取区、初检区和复检区位于硝酸纤维素膜上。
[0029]在一种或多种实施例中，样品区搭接在核酸提取区。
[0030]本专利技术的另一种实施方式，提供了一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒，包括：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，其特征是，按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，所述样品区设置为用于滴加样品，所述复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交。2.如权利要求1所述的多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，其特征是，捕获探针为发夹探针，发夹探针连接纳米金。3.如权利要求1所述的多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸，其特征是，核酸提取区、初检区和复检区位于硝酸纤维素膜上；优选的，样品区搭接在核酸提取区。4.一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒，其特征是，包括：检测试纸，按照液体流动方向依次设置样品区、核酸提取区、初检区和复检区，所述样品区设置为用于滴加样品，所述复检区设置捕获探针，所述捕获探针能够与幽门螺杆菌核酸杂交；DNA裂解液，用于对核酸提取区内的样品裂解释放幽门螺杆菌核酸；初检试剂，用于对检测试纸初检区的幽门螺杆菌核酸进行反应释放荧光团；复检试剂，用于对检测试纸复检区中捕获探针捕获的幽门螺杆菌核酸进行酶切循环扩增同时进行反应释放荧光团。5.如权利要求4所述的多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试剂盒，其特征是，捕获探针为发夹探针，发夹探针连接纳米金；或，核酸提取区、初检区和复检区位于硝酸纤维素膜上；优选地，样品区搭接在核酸提取区。6.如权利要求4所述的多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：易思睿，杨欢，庄妙慧，张晓荣，胡善文，叶为民，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：