一种25羟基维生素D检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于化学免疫分析领域，具体涉及一种25羟基维生素D检测试剂盒；本发明专利技术的25羟基维生素D检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1中含有CAPS

【技术实现步骤摘要】
一种25羟基维生素D检测试剂盒


[0001]本专利技术属于化学免疫分析领域，具体涉及一种25羟基维生素D检测试剂盒。

技术介绍

[0002]25
‑
羟基维生素D(25
‑
hydroxyvitamin D，25
‑
OH VD)是维生素D在体内的主要存在形式。维生素D为类固醇衍生物，属脂溶性维生素，为环戊烷多氢菲类化合物。维生素D不仅仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的生理作用，是维持人体健康、细胞生长和发育的必不可少的物质，与多种疾病密切相关。在人体内有两种形式的维生素D，维生素D3(胆钙化醇)和维生素D2(麦角钙化醇)，维生素D在肝脏中通过羟基化作用转化成25
‑
羟基维生素D(25
‑
OH VD)，然后在肾脏中转换为具有活性的1,25
‑
羟基维生素D。25
‑
羟基维生素D的浓度被认为是测定全面维生素D状态的最可靠指标，因而可用于测定患者是否出现维生素D缺乏情况。
[0003]临床中对于25
‑
羟基维生素D检测主要有液相色谱
‑
串联质谱法(LC
‑
MS/MS法)、免疫法等。
[0004]其中，LC
‑
MS/MS法仪器昂贵，安装条件严格，需要较大场地方可满足要求；样本前处理复杂，检测通量比较低，比较难适应临床大批量样本的需求，且手工操作比较复杂，操作人员需要经过比较专业的培训，难以推广；尽管被公认为检测25
‑
OH VD的黄金标准，LC
‑
MS/MS法仍然易受3
‑
epi
‑
25OH D3和3
‑
epi
‑
25OH D2等异构体的交叉影响，尤其对婴幼儿的检测易出现假阳性；另外，由于色谱和质谱条件等未标准化，不同实验室之间的处理方法和色谱条件等不同，对同一个体也会产生不同的临床评价。
[0005]免疫法中以胶乳免疫比浊法制备的试剂盒可适用于全自动生化分析仪，实现自动化操作，血清样本无需进一步前处理步骤即可检测，出结果时间短，一般在10分钟内可测出浓度。
[0006]但是胶乳免疫比浊法参与反应的成分较多，且是生物活性物质，如底物、酶、抗体等，由于涉及抗体和酶的相互作用，抗体和酶等关键原材料筛选对于方法的建立至关重要，一方面，各成分之间的比例协调对方法的线性、灵敏度有很大影响。因此该方法的原料筛选及配方开发都有较大的难度。同时，由于相关的酶、抗体要求较高，原料本身的获取不易，而进入生产端的检验难度也相应提高，因此也加大了该方法的研发及制造成本。
[0007]与LC
‑
MS/MS法相比，免疫法易还存在以下问题：
①
基质效应和交叉反应，容易使检测结果偏高：
②
检测结果为总25
‑
OH VD，易低估25
‑
OH VD2的水平，导致总25
‑
OH VD检测结果偏低；
③
无法区分25
‑
OH VD2和25
‑
OH VD3，导致免疫法特异性差。即便是LC
‑
MSMS也面临25
‑
OH VD与结合蛋白彻底分离的问题。
[0008]总之，目前无论哪种免疫法的试剂盒在检测精确性上都无法与LC
‑
MS/MS 25
‑
OH VD检测试剂盒媲美。
[0009]因此寻找一种优化的胶乳增强免疫比浊法制备25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，在发挥胶乳增强免疫比浊法优势的同时，增强其检测精度是亟待解决的问题。
[0010]参考文献：[1].潘晓芳,吴静标,黄燕虹,等.我国25
‑
羟基维生素D检测方法及其研
究进展.分子诊断与治疗杂志,2020,12(12):5.

技术实现思路

[0011]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，采用优化的胶乳增强免疫比浊法，并且通过改进抗体包被的胶乳颗粒溶液的制备工艺，有效增强了试剂的分析灵敏度和抗干扰能力；此外，通过优化缓冲体系，添加复合表面活性剂、复合增敏剂和复合胶乳稳定剂，科学配比，优化了反应体系，极大的提高了试剂的稳定性。本专利技术25
‑
羟基维生素D试剂盒使用方便，可实现自动化操作，便于各级医院推广使用。
[0012]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0013]一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；
[0014]所述试剂R1包括如下含量的组分：
[0015][0016]所述试剂R2包括如下含量的组分：
[0017][0018]所述鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液的组分包括：复合封闭剂、胶乳颗粒、鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体；
[0019]所述复合表面活性剂的组分包括单油酸聚乙二醇400磷酸酯、异丙烯磷酸共聚物、异构十三烷醇醚CLD
‑
1303和酰化氨基聚醚硅油；
[0020]所述复合胶乳稳定剂的组分包括单硬脂酸甘油硫酸钠和褐藻多糖；
[0021]所述防腐剂为1,3
‑
二羟甲基
‑
5,5二甲基海因。
[0022]优选的，所述试剂R1和试剂R2的体积比为4:1。
[0023]优选的，试剂R1中，所述缓冲液A为CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液，25℃下，pH＝6.53；试剂R2中，所述缓冲液B为CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液，25℃下，pH＝7.22。
[0024]进一步的，所述CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液的制备方法为：称取5.1～12.2g 3
‑
(环己胺)
‑1‑
丙磺酸，用900mL去离子水完全溶解后，加入1.5g甘氨酸，搅拌溶解后，再加入乙二胺四乙酸二钠二水合物，用NaOH或HCl调节pH至6.53或7.22，最后用去离子水定容至1L。
[0025]进一步的，所述复合增敏剂的制备方法为：称取聚乙二醇10000加入到水中，30～
60℃搅拌溶解，冷却，加入乙二醇、聚乙二醇400，搅拌，使之完全溶解；然后再加入氯化胆碱、氯化钙、氯化钾，搅拌至完全溶解，得到复合增敏剂。
[0026]进一步的，所述复合表面活性剂的制备方法为：取单油酸聚乙二醇400磷酸酯加入到去离子水中，30～45℃下搅拌，依次加入异丙烯磷酸共聚物、异构十三烷醇醚CLD
‑
1303和酰化氨基聚醚硅油，30～45℃搅拌8～24h，用NaOH或HCl调本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括如下含量的组分：所述试剂R2包括如下含量的组分：所述鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液的组分包括：复合封闭剂、胶乳颗粒、鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体；所述复合表面活性剂的组分包括单油酸聚乙二醇400磷酸酯、异丙烯磷酸共聚物、异构十三烷醇醚CLD
‑
1303和酰化氨基聚醚硅油；所述复合胶乳稳定剂的组分包括单硬脂酸甘油硫酸钠和褐藻多糖；所述防腐剂为1,3
‑
二羟甲基
‑
5,5二甲基海因。2.如权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为4:1。3.如权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，所述缓冲液A为CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液，25℃下，pH＝6.53；试剂R2中，所述缓冲液B为CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液，25℃下，pH＝7.22。4.如权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于，所述复合封闭剂主要成分为：BSA、乙二胺、PEG200和NaCl；其中，按质量比，BSA：乙二胺：PEG20：NaCl＝3.5：1：5：5。5.如权利要求3所述的一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于，所述CAPS
‑
甘氨酸
‑
EDTA缓冲液的制备方法为：称取5.1～12.2g 3
‑
(环己胺)
‑1‑
丙磺酸，用900mL去离子水完全溶解后，加入1.5g甘氨酸，搅拌溶解后，再加入乙二胺四乙酸二钠二水合物，用NaOH或HCl调节pH至6.53或7.22，最后用去离子水定容至1L。6.如权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于，所述复合增敏剂的制备方法为：称取聚乙二醇10000加入到水中，30...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志明，胡晓飞，董雯，周东，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：