一种25-羟基维生素D3测定试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物分析技术领域，提供了一种25

【技术实现步骤摘要】
一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物分析
，尤其涉及一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒。

技术介绍

[0002]25
‑
羟基维生素D3在人体血清中的含量是最高、最稳定的，同时其半衰期也是最长的。通常被作为评定人体维生素D营养状况的最佳指标。维生素D缺乏症与几种不同的疾病或条件有关，如糖尿病、自身免疫性疾病以及感染性、呼吸道或心血管疾病。目前，临床上对维生素D的定量检测已成为常规检测项目和体检项目。为此，建立一种快速、简便、灵敏、准确可靠的检测维生素D水平的方法尤为重要。
[0003]25
‑
羟基维生素D的定量检测主要有理化检验方法和免疫学方法。理化检验方法采用液相色谱
‑
质谱联用技术(LC
‑
MS)，由于存在仪器昂贵、样本前处理复杂、过程繁琐费时等缺陷，该方法的应用受到限制。相对于理化检验方法，免疫学方法具有灵敏、快速、特异和简便等优势，现在成为维生素D测定的主流方法。酶联免疫法检测25
‑
羟基维生素D反应时间比较长、通常需要2
‑
3个小时，还需要配套专用的仪器，因此不能实现大批量的检测。使用化学发光法检测25
‑
羟基维生素D，虽然检测灵敏度高，但是反应速度相对较慢，检测一般需要30分钟，也需要配套价格昂贵的封闭式免疫发光仪来检测，而且进口试剂盒价格高。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少克服上述现有技术的缺点与不足其中之一，提供一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒。本专利技术目的基于以下技术方案实现：
[0005]一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，其中：
[0006]所述试剂1包括缓冲剂50～300mmol/L，氯化钠0.05～0.5mol/L，防腐剂0.01～1wt％；
[0007]所述试剂2包括缓冲剂50～300mmol/L，牛血清白蛋白0.1～5wt％，吐温
‑
20 0.1～5wt％，防腐剂0.01～1wt％，包被有抗25
‑
羟基维生素D3抗体胶乳颗粒0.1～5wt％。
[0008]优选地，所述试剂1和试剂2中：防腐剂为叠氮化钠，缓冲剂为柠檬酸钠、2
‑
吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS。
[0009]优选地，所述试剂1和试剂2中缓冲剂的pH值为6～8。
[0010]优选地，所述试剂1包括缓冲剂50～150mmol/L，氯化钠0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.05wt％；
[0011]优选地，所述试剂2包括缓冲剂50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，吐温
‑
20 0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.05wt％，包被有抗25
‑
羟基维生素D3抗体胶乳颗粒0.5～2wt％。
[0012]优选地，本专利技术的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，还包括校准品，所述校准品包含50wt％人血清、25～100mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.05wt％防腐剂、靶值浓度范围为140～200ng/mL的25
‑
羟基维生
素D3。
[0013]优选地，本专利技术的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，还包括质控品，所述质控品包含50wt％人血清、25～100mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液、5wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.05wt％防腐剂、25
‑
羟基维生素D3，所述25
‑
羟基维生素D3的水平1目标浓度范围为20～40ng/mL，所述25
‑
羟基维生素D3的水平2目标浓度范围为40～100ng/mL。
[0014]优选地，所述校准品或质控品的性状为冻干粉。
[0015]优选地，所述试剂1、试剂2与25
‑
羟基维生素D3样品进行免疫凝集反应的体积比为100～200：25～50：3。
[0016]优选地，本专利技术的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，其检测方法为：按照比例加入试剂1和25
‑
羟基维生素D3样品混匀，37℃反应5分钟，加入试剂2混匀，30秒后在570nm波长下读取吸光度值A1，5分钟后读取吸光度A2，计算
△
A＝A2
‑
A1。
[0017]优选地，所述25
‑
羟基维生素D3样品的浓度检测范围为40～100ng/mL。
[0018]本专利技术可至少取得如下有益效果其中之一：
[0019]本专利技术的试剂盒采用胶乳免疫比浊法为检测原理测定血清25
‑
羟基维生素D3，样本中25
‑
羟基维生素D3与试剂中包被在胶乳颗粒上的抗25
‑
羟基维生素D3抗体结合，形成不溶性免疫复合物，反应液产生浊度并与样本中25
‑
羟基维生素D3浓度成正比例上升，吸光度亦随之增加，与标准吸光度比较可计算出样本中25
‑
羟基维生素D3的浓度。本专利技术检测试剂盒采用双试剂模式有效地避免了非特异性反应的干扰，保证了测定结果的稳定可靠。
[0020]本专利技术采用胶乳免疫比浊法为检测原理，使用包被有抗25
‑
羟基维生素D3抗体的胶乳颗粒，有利于抗体与抗原更加充分反应，从而能够显著提高所制备复合物的灵敏度、敏感性、抗干扰性以及稳定性。与现有技术相比，采用本专利技术试剂盒进行检测具有灵敏度高、特异性强、准确度高、操作简便、快速等优点，能够应用于各种全自动生化分析仪进行大批量的测定，适于在临床推广，降低医院检测成本。
具体实施方式
[0021]下面将对本专利技术的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]实施例1试剂盒的制备
[0023]1.试剂1和试剂2
[0024]1)试剂主要原料
[0025]25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)的主要原料是包被有抗25
‑
羟基维生素D3抗体的胶乳颗粒，经过对国内外厂家的调研和筛选，选择了两个厂家的产品，分别为华元山水公司和百尚利德公司。
[0026]缓冲液及pH值：
[0027]缓冲体系pH值Tris
‑
HCl(三羟甲基氨基甲烷)7.5
PBS(NaH2PO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，其中：所述试剂1包括缓冲剂50～300mmol/L，氯化钠0.05～0.5mol/L，防腐剂0.01～1wt％；所述试剂2包括缓冲剂50～300mmol/L，牛血清白蛋白0.1～5wt％，吐温
‑
20 0.1～5wt％，防腐剂0.01～1wt％，包被有抗25
‑
羟基维生素D3抗体的胶乳颗粒0.1～5wt％。2.根据权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1和试剂2中：防腐剂为叠氮化钠，缓冲剂为柠檬酸钠、2
‑
吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS。3.根据权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1和试剂2中缓冲剂的pH值为6～8。4.根据权利要求1所述的一种25
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羟基维生素D3测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括缓冲剂50～150mmol/L，氯化钠0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.05wt％；所述试剂2包括缓冲剂50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，吐温
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20 0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.05wt％，包被有抗25
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羟基维生素D3抗体胶乳颗粒0.5～2wt％。5.根据权利要求1所述的一种25
‑
羟基维生素D3测定试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品包含50wt％人血清、25～100mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝立颖，彭勇，曹培杰，陈白燕，周晶，
申请(专利权)人：北京世纪沃德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：