一种土壤微生物生物量磷的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种土壤微生物生物量磷的测定方法，属于化学检测技术领域，所述测定方法包括如下步骤：(1)取新鲜土壤测定土壤的pH值，将测定过pH值的土壤置于放有水和NaOH溶液的装置中进行培养，得到前处理后的土壤；(2)将前处理后的土壤分为两组，其中第一组样品经氯仿熏蒸处理，并除去氯仿，加浸提剂浸提后过滤得到待测液；第二组样品不进行熏蒸处理，直接加入浸提剂进行浸提后过滤，得到对照液；(3)配置标准磷溶液，并绘制标准曲线，根据标准曲线获得土壤微生物生物量磷含量。本申请在实施过程中将土壤进行酸碱分类，根据土壤酸碱度的不同，采用不同浸提剂，对微生物量磷进行浸提，提高了检测的效率和准确度。高了检测的效率和准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种土壤微生物生物量磷的测定方法


[0001]本专利技术涉及化学检测
，具体涉及一种土壤微生物量磷的测定方法。

技术介绍

[0002]生态化学计量学是研究生态系统功能和动态的一门学科，主要强调碳(C)、氮(N)、磷(P)循环及其组成关系，对C、N、P化学计量比的研究，可以使营养物质的复杂性变得简单化。土壤微生物是陆地生态系统的重要组成部分，对土壤养分的固持、矿化，以及土壤养分循环具有重要的驱动和调节作用，在土壤肥力和有机质转化过程中扮演重要的角色。土壤微生物的数量、组成、生理活动的改变会影响它们的功能，进而影响生态系统生物地球化学循环的过程。土壤微生物可通过调整自身的生态化学计量比以及对资源的利用效率来适应周围环境的改变。微生物对土壤养分的固持和矿化可以通过土壤微生物量生态化学计量特征来反映，因此土壤微生物生物量碳氮磷生态化学计量特征是评价陆地生态系统营养限制的一个有用的工具。
[0003]虽然土壤微生物量磷在植物磷素营养方面起重要作用，但对其的研究受到研究方法的限制目前土壤微生物量磷一般采用熏蒸浸提法(FE)测定，该方法是由Brookesetal.(1982)及Hedley和Stewart(1982)分别建立起来的。其基本原理是土壤经氯仿熏蒸后，微生物细胞溶解并释放出含磷的物质，这些物质能够被特定的提取剂浸提并定量的测定出来，根据熏蒸和未熏蒸土壤所测得的磷的差值或增量(Ep)及提取测定效率或转化系数(Kp)，可以估算土壤微生物量磷。Brookes et al.(1982)及Hedley和Stewart(1982)测定土壤微生物量磷的方法基本原理相同，但仍存在一些差异，自从该方法创建以来，不少研究者也提出了不同的改进意见。主要表现在：
①
土壤样品预处理；
②
熏蒸处理；
③
浸提剂和浸提方法；
④
测定浸提液中磷浓度的方法；
⑤
微生物量磷被浸提测定效率。
[0004]中国专利申请01138248.1中公开了一种旱地土壤微生物磷测定方法，其方法包括如下步骤：(1)将土壤pH＝3.3
‑
7.4除去土样中可见的植物残体及土壤动物，过筛，混匀，调节含水量，称取土样；(2)将3份土样加入0.5毫升培养的土壤细菌和真菌混合液，土样不加，同时在
‑
0.05
‑‑
0.08MPa真空度和20
‑
40℃条件下，用去乙醇氯仿熏蒸24小时，除去氯仿后再用0.025
‑
0.5摩尔提取剂提取；土样直接用提取剂提取，测定提取液中磷含量；(3)土壤微生物磷含量转换方法：土壤微生物磷＝熏蒸与不熏蒸土壤提取的磷增强/加培养微生物的磷的回收率；该申请提供的方法规范了氯仿熏蒸土壤的温度和真空度技术参数，适合不同类型的土壤微生物磷提取的最佳提取剂和水土比，大大提高了测定结果的精密度，和测定结果的准确度，但是该申请中并没有给出提取剂具体是何种组分。
[0005]中国专利申请201810303945.9中公开了一种土壤微生物生物量磷的测定方法，测定方法包括如下步骤：将土壤样品分成两组，其中，第一组样品经过氯仿熏蒸处理，并去除氯仿后，加入碳酸氢钠浸提后过滤取第一滤液；第二组样品直接加入碳酸氢钠浸提后过滤取第二滤液。将第一滤液和第二滤液调节至中性以后均加入过硫酸钾，并在高温高压下反应10
‑
25min。测定反应后的第一滤液和第二滤液的磷含量，第一滤液的磷含量与第二滤液
的磷含量的差值为微生物生物量磷的值。此微生物生物量磷的测定方法简单，测定时间较短，减小了实验过程的磷损失量，该申请仅使用了一种浸取剂，但是由于土壤酸碱度的不同对浸提效果会产生很大的影响，经常出现检测结果异常的情况。
[0006]因此，需要开发一种能够根据不同土壤进行微生物生物量磷测定方法。

技术实现思路

[0007]针对现有技术中的不足，本申请旨在提供一种更为科学有效、精准实用的微生物生物量磷测定方法，该方法通过采用不同的浸提剂可以针对不同酸碱度的土壤进行微生物量磷检测，检测效率高、准确度高。
[0008]本专利技术是采用以下技术方案实现的：
[0009]一种土壤微生物生物量磷的测定方法，包括如下步骤：
[0010](1)取新鲜土壤除去土壤中可见的杂质，过筛并混匀，测定土壤的pH值，将已知pH值的土壤置于放有水和NaOH溶液的装置中进行培养，得到前处理后的土壤；
[0011](2)将前处理后的土壤分为两组，其中第一组样品经氯仿熏蒸处理，并除去氯仿，加浸提剂浸提后过滤得到待测液；第二组样品不进行熏蒸处理，直接加入浸提剂进行浸提后过滤，得到对照液；
[0012](3)测定反应后待测液和对照液的磷含量，计算微生物生物量磷含量。
[0013]上述步骤(2)中所述的浸提根据土壤pH值的不同采用不同的浸提剂；若测定土壤pH≥6.5时，所述的浸提剂为ASI浸提剂，若测定土壤pH＜6.5时，所述的浸提剂为氟化铵
‑
盐酸浸提剂。
[0014]所述的pH≥6.5的土壤浸提方法为：向熏蒸后的土壤中加入ASI浸提剂，振荡30min，过滤，得到被测液；
[0015]所述的土壤与ASI浸提剂在(25
±
1)℃条件下的质量体积比为1:20(g/mL)；所述的振荡速率为160
‑
200r/min。
[0016]所述的pH＜6.5的土壤的浸提方法为：向熏蒸后的土壤中加入氟化铵
‑
盐酸浸提剂，振荡30min，过滤，得到被测液；
[0017]所述的土壤与氟化铵
‑
盐酸浸提剂在(25
±
1)℃条件下的质量体积比为1:10(g/mL)；所述的振荡速率为160
‑
200r/min。
[0018]作为一些优选的实施方案，对于pH≥6.5的土壤中微生物量磷的检测还包括消解步骤，所述的消解操作为：分别向待测液和对照液中加入硫酸溶液，超声后再加入过硫酸钾溶液，得到混合液，将混合液置于高压蒸汽灭菌锅中进行消解，即得到消解后的待测液和对照液。
[0019]其中，所述的硫酸溶液的浓度为2.5mol/L，所述的过硫酸钾溶液的浓度为50g/L；所述的待测液、硫酸溶液和过硫酸钾溶液的体积比为2
‑
5:0.05:2。
[0020]所述的消解压力为1.01kg/cm3，消解温度为115℃，消解时间为30min。
[0021]上述步骤(3)中所述的测定待测液和对照液的磷含量的具体方法为：先配制标准磷溶液，绘制标准曲线，然后测定待测液或对照液的吸光度，并和标准曲线对比，得到磷含量的值。
[0022]所述的标准磷溶液的配置方法为：
[0023]首先配制磷酸二氢钾贮存液：称取磷酸二氢钾0.4394g溶于少量去离子水中，再加入5mL浓硫酸，用去离子水定容至1L，即得100μg/mL磷酸二氢钾贮存液，置本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种土壤微生物生物量磷的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)取新鲜土壤除去土壤中可见的杂质，过筛并混匀，测定土壤的pH值，将已知pH值的土壤置于放有水和NaOH溶液的装置中进行培养，得到前处理后的土壤；(2)将前处理后的土壤分为两组，其中第一组样品经氯仿熏蒸处理，并除去氯仿，加浸提剂浸提后过滤得到待测液；第二组样品不进行熏蒸处理，直接加入浸提剂进行浸提后过滤，得到对照液；(3)配置标准磷溶液，并绘制标准曲线，根据标准曲线获得土壤微生物生物量磷含量。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的浸提根据土壤pH值的不同采用不同的浸提剂；当测定土壤pH≥6.5时，所述的浸提剂为ASI浸提剂，当测定土壤pH＜6.5时，所述的浸提剂为氟化铵
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盐酸浸提剂。3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：所述的pH≥6.5的土壤浸提方法为：向熏蒸后的土壤中加入ASI浸提剂，振荡30min，过滤，得到被测液。4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于：所述的土壤与ASI浸提剂在(25
±
1)℃条件下的质量体积比为1:20(g/mL)；所述的振荡速率为160
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200r/min。5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：所述的pH＜6.5的土壤的浸提方法为：向熏蒸...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏莹莹，刘新，朱世杰，张北，郑双，田耘，谢丽，
申请(专利权)人：广电计量检测江西有限公司广电计量检测湖南有限公司，
类型：发明
国别省市：