一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法技术

本发明专利技术涉及文物保护领域，本发明专利技术公开了一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法，包括：(1)微生物采集；(2)增菌培养；(3)微生物分离；(4)微生物提纯；(5)降解活性鉴定；(6)老化纺织物样制备方法。本发明专利技术筛选出与纺织品文物中同源，且能够以丝织物和麻织物为单一碳、氮源的微生物，利用该微生物进行老化，可大幅减少老化时间，且可获得为目标纺织品文物性质相近的微生物老化丝织物和麻织物样品。本发明专利技术制得的微生物老化丝织物和麻织物样品，可为研究纺织品文物微生物老化机理研究提供便利，通过本发明专利技术方法可以研究蛋白质纤维和纤维素纤维微生物老化的差异。维和纤维素纤维微生物老化的差异。维和纤维素纤维微生物老化的差异。

【技术实现步骤摘要】
一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法


[0001]本专利技术涉及文物保护领域，尤其涉及一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法。

技术介绍

[0002]中国历史上丝织物和麻织物的生产与应用十分发达，丝织物和麻织物在中国纺织发展史上占据重要地位，对中国历史的研究也具有重要意义。目前已发掘的许多墓葬中都出现了丝织物和麻织物，由于丝织物和麻织物长期处于墓葬环境中，许多丝织物和麻织物都遭到了不同程度的损坏。跟据目前研究发现，土壤里的霉菌、细菌和放线菌等微生物对丝织物和麻织物都有不同程度的腐蚀作用。经过上百年的丝织物和麻织物已经被严重腐蚀且价值及其珍贵，这给科研工作者探索丝织物和麻织物文物微生物老化机理带来了很大困难，通过实验室模拟丝织物和麻织物老化来制备老化样品，给研究提供了大量廉价的样品，研究文物老化机理，可以为丝织物和麻织物文物的保存与加固等提供理论支持，根据老化机理制定相应的保护措施。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法，
[0004]本专利技术的具体技术方案为：一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法，包括如下步骤：
[0005](1)微生物采集：采集丝织物和麻织物文物遗址中的土壤，在一定的温度和相对湿度条件下，将经过漂白但未经过其他处理的丝织物和麻织物放置在土壤环境中，放置直至丝织物和麻织物发霉或腐烂，取发霉或腐烂织物及其周围土壤，加入无菌水，制成菌悬液A、B。<br/>[0006]为了制得人工老化丝织物和麻织物，前提是需要获得可对蛋白质(丝)以及纤维素(麻)具有腐蚀能力的微生物。为此，在步骤(1)中，本专利技术采集极有可能含有目标微生物的土壤，将其与丝织物和麻织物混合后培养，若可使丝织物和麻织物发霉或腐烂，则说明土壤中含有目标微生物，将其制成菌悬液A、B。并且，这些微生物来源于所要研究和保护的纺织品文物的土壤中，利用这些微生物来制备人工模拟老化纺织品样品，同源性好，更能够获得与实际文物性质相近的老化样，从而为纺织品文物的保护提供有利依据。
[0007](2)增菌培养：分别取所得菌悬液A、B加入到霉菌液体培养基中，恒温振荡培养后，将霉菌转接到相同的霉菌液体培养基中，重复多次，得到菌液A、B。
[0008](3)微生物分离：取菌液A、B加入到无菌水中，混合均匀稀释成10
‑1的菌悬液，再讲所得菌悬液加入到无菌水中，混合均匀稀释成10
‑2的菌悬液，依此稀释，制得稀释成10
‑4的菌悬液A、B。
[0009](4)微生物提纯：取稀释成10
‑4的菌悬液A、B分别涂布在霉菌培养基平板上，恒温培
养，挑取单菌落在霉菌培养基平板上划线分离，直至获得单培养物A、B。
[0010](5)降解活性鉴定：将单培养物A、B分别置于两个霉菌液体培养基中恒温培养得到霉菌A、B菌液，然后分别接种到三个不含碳、氮源的霉菌培养基平板上，其中平板1上铺有丝织物，平板2上铺有麻织物，平板3上不铺织物，恒温培养；当平板1和平板2上的微霉菌可以生长，且平板3上的霉菌不可生长时，进入下一步骤。
[0011](6)老化纺织物样制备方法：将经过漂洗但未经过其他处理的现代丝织物和麻织物制成现代丝织物长条和现代麻织物长条，用酒精灭菌处理后烘干，将步骤(5)所得霉菌A、B菌液分别涂布在以现代丝织物长条和现代麻织物长条作为唯一碳源和氮源的培养基中恒温培养，然后将现代丝织物长条和现代麻织物长条置于酒精中浸泡，用蒸馏水清洗后放入无盖的无菌培养基中，将盛有现代丝织物长条和现代麻织物长条的无菌培养基干燥至恒重，制得人工老化丝织物和麻织物样。
[0012]在步骤(5)中，对单培养物中的菌液A、B进行活性鉴定。该步骤的目的是为了获得能够以丝织物和麻织物作为唯一碳、氮源生长的微生物。原因是在步骤(6)的丝织物、麻织物老化样的制备中，需要微生物尽可能地以织物为营养源，从而可加速织物的老化，缩短老化时间。若微生物不能以丝织物和麻织物作为唯一碳、氮源生长，那么在制备老化样时就需要外加碳、氮源，如此就容易使微生物优先吸收外加营养源而不优先利用相对而言较难吸收的织物中的养分，从而导致老化时间较长。
[0013]作为优选，步骤(1)中。所述温度为30
‑
40℃，相对湿度在90
‑
98％；放置时间为7
‑
10天。
[0014]作为优选，步骤(1)中。所述菌悬液A、B中无菌水的比例为85
‑
95wt％
[0015]作为优选，步骤(2)中。所述菌悬液A、B与霉菌液体培养基的质量比为1∶8
‑
12；25
‑
30℃恒温振荡培养5
‑
9天后，将霉菌转接到相同的霉菌液体培养基中，重复2
‑
4次。
[0016]作为优选，步骤(2)中.：所述霉菌液体培养基的制备方法为：将4
‑
6g胨、8
‑
12g葡萄糖、0.8
‑
1.2g磷酸二氢钾、0.3
‑
0.7g硫酸镁、0.08
‑
0.12g氯霉素与900
‑
1100mL蒸馏水混合，搅拌加热煮沸至完全溶解，高压灭菌，所得霉菌液体培养基的pH＝5.4
‑
5.8。
[0017]作为优选，步骤(4)中，25
‑
30℃恒温培养4
‑
6天。
[0018]作为优选，步骤(4)中，所述霉菌培养基平板的制备方法为：将马铃薯洗净去皮，称取280
‑
320g切成小块，加水煮20
‑
30min，过滤、加热，加15
‑
25g琼脂继续加热搅拌混匀，待琼脂融完后，加入15
‑
25g葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至900
‑
1100mL，高压灭菌。
[0019]作为优选，步骤(5)中，将单培养物A、B分别置于两个霉菌液体培养基中25
‑
30℃恒温培养4
‑
6天得到霉菌A、B菌液，然后分别接种到三个不含碳、氮源的霉菌培养基平板上，其中平板1上铺有丝织物，平板2上铺有麻织物，平板3上不铺织物，25
‑
30℃恒温培养6
‑
10天。
[0020]作为优选，步骤(5)中，所述霉菌培养基平板的制备方法为：将0.8
‑
1.2g磷酸氢二钾，0.3
‑
0.7g硫酸镁，0.3
‑
0.7g氯化钾，0.008
‑
0.012g硫酸亚铁，18
‑
22g琼脂添加至900
‑
1100mL蒸馏水中，加热溶解，灭菌。
[0021]作为优选，步骤(6)中，所述现代丝织物长条和现代麻织物长条的尺寸为2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种研究蛋白质与纤维素纺织品文物微生物老化差异的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)微生物采集：采集丝织物和麻织物文物遗址中的土壤，在一定的温度和相对湿度条件下，将经过漂白但未经过其他处理的丝织物和麻织物放置在土壤环境中，放置直至丝织物和麻织物发霉或腐烂，取发霉或腐烂织物及其周围土壤，加入无菌水，制成菌悬液A、B；(2)增菌培养：分别取所得菌悬液A、B加入到霉菌液体培养基中，恒温振荡培养后，将霉菌转接到相同的霉菌液体培养基中，重复多次，得到菌液A、B；(3)微生物分离：取菌液A、B加入到无菌水中，混合均匀稀释成10
‑1的菌悬液，再讲所得菌悬液加入到无菌水中，混合均匀稀释成10
‑2的菌悬液，依此稀释，制得稀释成10
‑4的菌悬液A、B；(4)微生物提纯：取稀释成10
‑4的菌悬液A、B分别涂布在霉菌培养基平板上，恒温培养，挑取单菌落在霉菌培养基平板上划线分离，直至获得单培养物A、B；(5)降解活性鉴定：将单培养物A、B分别置于两个霉菌液体培养基中恒温培养得到霉菌A、B菌液，然后分别接种到三个不含碳、氮源的霉菌培养基平板上，其中平板1上铺有丝织物，平板2上铺有麻织物，平板3上不铺织物，恒温培养；当平板1和平板2上的微霉菌可以生长，且平板3上的霉菌不可生长时，进入下一步骤；(6)老化纺织物样制备方法：将经过漂洗但未经过其他处理的现代丝织物和麻织物制成现代丝织物长条和现代麻织物长条，用酒精灭菌处理后烘干，将步骤（5）所得霉菌A、B菌液分别涂布在以现代丝织物长条和现代麻织物长条作为唯一碳源和氮源的培养基中恒温培养，然后将现代丝织物长条和现代麻织物长条置于酒精中浸泡，用蒸馏水清洗后放入无盖的无菌培养基中，将盛有现代丝织物长条和现代麻织物长条的无菌培养基干燥至恒重，制得人工老化丝织物和麻织物样。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述温度为30
‑
40℃，相对湿度在90
‑
98%；放置时间为7
‑
10天。3.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述菌悬液A、B中无菌水的比例为85
‑
95wt%。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述菌悬液A、B与霉菌液体培养基的质量比为1：8
‑
12；25
‑
30℃恒温振荡培养5
‑
9天后，将霉菌转接到相同的霉菌液体培养基中，重复2
‑
4次。5.如权利要求1或4所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁传苗，王秉，刘锋，徐冰，邵帅，彭志勤，万军民，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：