含CD56制造技术

本发明专利技术属于生物医用材料领域，尤其涉及一种含CD56

【技术实现步骤摘要】
含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物医用材料领域，尤其涉及一种含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料及其制备方法。

技术介绍

[0002]脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病。脊髓损伤发生后将导致神经功能丧失，严重致残。目前，临床上主要采用脊柱固定和髓内减压、激素应用等治疗减少继发损伤；细胞治疗、神经因子、基因治疗等治疗手段多数处于实验阶段。
[0003]多项研究表明间充质干细胞移植可以在衰老，脑损伤和神经退行性疾病等条件下可以促进脊髓损伤的功能恢复。目前临床间充质干细胞的主要来源为骨髓、脐带等。与骨髓来源间充质干细胞相比，人脐带组织作为医疗废物，华通胶含量丰富。但是干细胞治疗在常规临床治疗中，仍有很多问题有待解决，包括移植细胞存活率低，细胞去分化和肿瘤形成等。所以当前迫切需要去寻找一种可以发挥干细胞的积极治疗效果，同时也可以减少相关风险的治疗手段与方法。
[0004]外泌体(Exosomes,EXOs)是一种可由多种细胞分泌的纳米级小囊泡，其体内携带着母体细胞核酸和miRNA，蛋白质等多种具有生物活性的成分。外泌体植入也可以避免干细胞直接移植导致的肿瘤等风险和自体的神经干细胞移植涉及的诸多医学伦理问题。干细胞来源外泌体具有与干细胞相似的功能，可以有效促进组织修复及再生，在中枢神经系统损伤修复领域表现出了强大的保护能力，开启了无细胞治疗的新途径。
[0005]目前，具有全分化潜能的胚胎干细胞(ESC)、诱导型多能干细胞(iPS)，虽可再生神经，但ESC涉及伦理及致畸胎瘤，iPS涉及致肿瘤以及免疫排斥等风险，均不能用于临床。
[0006]现急需一种可以促进神经轴突再生的材料对脊髓损伤处的神经进行修复和再生。

技术实现思路

[0007]本申请提供了一种含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料及其制备方法，以解决如何促使脊髓处神经轴突再生的技术问题。
[0008]第一方面，本申请提供了一种含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料，包括：甲基丙烯酸酐明胶、脊髓脱细胞基质和外泌体；所述外泌体来源于带有CD56
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标记的细胞亚群；所述外泌体表达有信号素7A蛋白。
[0009]甲基丙烯酸酰化明胶(GelMA)，是一种光敏性的生物材料，配合光引发剂使用时能在蓝光或紫外光下迅速交联固化，形成具有一定强度的三维结构，结构上具有细胞黏附位点及基质金属蛋白酶水解位点，可良好支持细胞的增殖及迁移，可负载肿瘤细胞、心肌细胞、软骨细胞等多种细胞。可通过改变GelMA材料的浓度来调整交联后水凝胶的力学性能，在负载外泌体时，可以维持和提高外泌体活性，同时，确保外泌体的缓释作用。
[0010]脊髓脱细胞基质是脊髓组织经人工萃取及去细胞等处理而来的细胞外基质，具备
天然生物材料的优点。脊髓脱细胞基质成分多样，IV型胶原、层粘连蛋白和蛋白多糖不仅可以粘附大量促进神经细胞、血管等组织修复的重要因子，创造适宜神经轴突等细胞生长的微环境，促进细胞的新陈代谢与增殖，还可适度降解、吸收，促进神经轴突再生，重建脊髓的连续性。
[0011]外泌体为CD56
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人脐带华通胶间充质干细胞(Human umbilical cord Wharton's jelly mesenchymal stem cells，HUCWJMSC)外泌体；来源于带有CD56
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标记的细胞亚群，其表面表达有CD56蛋白，尤相比于其他细胞来源的外泌体，高表达信号素7A，通过活化整合素/MAPK信号通路，可以增强对神经轴突的再生和修复作用。
[0012]优选的，本申请实施例的生物材料包含：以质量分数计，10％的GelMA、5％的脱细胞基质、0.4％的光引发剂、以及终浓度为100μg/mL的外泌体。
[0013]本申请实施例中，甲基丙烯酸酐明胶、脊髓脱细胞基质和亚细胞群外泌体组合形成生物材料，甲基丙烯酸酐明胶为作为脊髓脱细胞基质及亚群外泌体的载体，形成缓释体系，脊髓脱细胞基质作为天然成分一方面为内源性神经细胞的粘附提供微环境，另一方面与亚群外泌体协同发挥诱导神经轴突再生。
[0014]在一些实施方式中，所述生物材料还包含光引发剂，具体为苯基
‑
2,4,6
‑
三甲基苯甲酰基亚磷酸锂，光引发剂在所述生物材料中的质量分数为0.25
‑
0.5％。
[0015]本申请实施例中，控制光引发剂在所述生物材料中的质量分数为0.25
‑
0.5％，具有快速光固化的积极效果，可以避免化学毒性等不利效果。
[0016]本申请实施例中，含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料可以用来作为生物墨水，制成生物支架。
[0017]在本申请第一方面的实施例中，所述外泌体在所述生物材料中的质量浓度为100
‑
200ug/mL，优选100ug/mL。
[0018]在本申请第一方面的实施例中，甲基丙烯酸酐明胶在所述生物材料中的质量分数为10％
‑
15％。
[0019]本申请实施例中，控制甲基丙烯酸酐明胶在所述生物材料中的质量分数为10％
‑
15％，具有快速成胶的积极效果，可以避免机械硬度过高不利于神经轴突再生的效果。
[0020]在本申请第一方面的实施例中，脱细胞基质在所述生物材料中的质量分数为5
‑
10％。
[0021]本申请实施例中，控制脱细胞基质在所述生物材料中的质量分数为5
‑
10％，具有有效诱导神经轴突再生的积极效果，可以避免成胶失败等不利效果。
[0022]在本申请第一方面的实施例中，所述CD56
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标记的细胞亚群来源于人脐带华通胶间充质干细胞。
[0023]在本申请第一方面的实施例中，所述生物材料具有光敏固化性能。
[0024]在本申请第一方面的实施例中，外泌体的直径≤150nm。
[0025]在本申请第一方面的实施例中，所述生物材料以敷料形式涂覆损伤脊髓局部，所述生物材料的用量为80
‑
100ul/cm2。
[0026]在本申请第一方面的实施例中，所述外泌体在损伤脊髓局部中的数量为1.5
×
107～2.5
×
107个/cm2。
[0027]本申请实施例中，控制所述外泌体在损伤脊髓局部中的数量为1.5
×
107～2.5
×
107个/cm2，可发挥促进轴突再生的积极效果，可以避免不良反应的发生。
[0028]在本申请第一方面的实施例中，所述脊髓脱细胞基质的组分包括：IV型胶原蛋白、层粘连蛋白和蛋白多糖。
[0029]本申请本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含CD56
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亚细胞群来源外泌体的生物材料，其特征在于，包括：甲基丙烯酸酐明胶、脊髓脱细胞基质和外泌体；所述外泌体来源于带有CD56
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标记的细胞亚群；所述外泌体表达有信号素7A蛋白。2.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于，所述外泌体在所述生物材料中的质量浓度为100
‑
200ug/mL，优选100ug/mL。3.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于，甲基丙烯酸酐明胶在所述生物材料中的质量分数为10％
‑
15％；和/或，脱细胞基质在所述生物材料中的质量分数为5
‑
10％。4.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于，所述CD56
+
标记的细胞亚群来源于人脐带华通胶间充质干细胞；和/或，所述生物材料具有光敏固化性能；和/或，外泌体的直径≤150nm。5.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料以敷料形式涂覆损伤脊髓局部，所述生物材料的用量为80
‑
100ul...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡建中，孙一，吕红斌，柳泉波，许琰，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：