一种延缓MSCs衰老的方法技术

本发明专利技术适用于延缓衰老技术领域，提供了一种延缓MSCs衰老的方法，该方法包括如下步骤：步骤1：获取衰老的MSCs；步骤2：利用携带SCD2的慢病毒感染衰老的MSCs，使得衰老的MSCs的脂质合成水平上调，进而延缓MSCs衰老。本发明专利技术将SCD2与MSCs衰老有机联系，从干细胞脂质代谢这一新颖角度去探究干细胞衰老，发现SCD2能够通过提高细胞脂质合成水平来延缓间充质干细胞衰老，为阐明干细胞衰老的调控机制提供实验依据，也为体外培养获得大量年轻态MSCs提供了新思路和新技术，将有助于维持干细胞数量及功能，有助于延缓机体衰老及防治各种老龄化疾病，对社会长久健康发展具有重要意义。对社会长久健康发展具有重要意义。对社会长久健康发展具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种延缓MSCs衰老的方法


[0001]本专利技术涉及延缓衰老
，具体是一种延缓MSCs衰老的方法。

技术介绍

[0002]随着社会的进步和经济的快速发展，人口老龄化将成为全世界主要的社会经济问题，而衰老是其发生的最重要原因之一。衰老是一个复杂的过程，表现为生理活动下降、低能量代谢水平、应激反应诱导的体内平衡丧失，从而导致疾病和死亡的风险增加。目前，科学界已经提出300多种理论或假说来解释衰老的发生、发展及机制，其中干细胞衰老理论是目前生物体衰老机制中的最新理论之一。干细胞衰老理论认为成体干细胞衰老是组织器官衰老、个体衰老以及各种老龄化疾病发生的重要原因，干细胞是研究衰老机制极其重要的模型。因此，激活衰老的干细胞是延缓个体衰老、预防神经退行性疾病、代谢性疾病和各种恶性肿瘤等衰老相关疾病的有效措施，能够最大限度地提升老龄人口的生命质量。衰老与代谢失调密切相关，代谢失调是衰老的关键标志。与衰老相关的代谢途径，如mTOR和AMPK途径，雷帕霉素、二甲双胍和运动等能够直接或间接调控该途径，已成为抗衰老干预的主要靶点。随着年龄的增长，膜磷脂的不饱和程度也增加，脂质过氧化产物增多可能导致细胞损伤。此外，不同类型的饮食干预可以影响衰老，而这些干预往往伴随着脂质稳态的改变。膳食脂类通过影响成体干细胞活性，调控脂质代谢相关基因的表达，增强脂质分解能力，有助于实现健康衰老。脂质能够通过影响能量储存、质膜组成、信号转导和基因表达变化来调节干细胞的生物学特性。然而，脂质代谢变化如何影响干细胞衰老至今仍未被探索。
[0003]成体干细胞是存在于成体体内分化组织中的未分化细胞，其中间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有高效自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。它们易于体外培养，能够与宿主细胞接触，并具有免疫耐受性，是组织工程和治疗各种疾病的理想种子细胞。然而，在体外扩增培养过程中，MSCs脂质合成能力降低，MSCs出现衰老的特征性表型，如形态变化、增殖活性降低和生理功能失衡。因此，无法通过体外扩增获得足够数量的MSCs以满足临床治疗的需求。干细胞的衰老严重限制其临床应用，如患者自体干细胞移植，组织、器官再生和修复等。
[0004]MSCs是许多疾病细胞治疗的基础，是一种研究较早且深入的成体干细胞，已经成为干细胞组织工程学的主要种子细胞。正常的骨髓样本获取困难，无法获得充足的特定年龄阶段的骨髓MSCs，且MSCs随着体外培养次数增加，其增殖活性和多向分化潜能降低，细胞发生衰老。干细胞衰老极大制约了干细胞的临床应用，降低了患者自体干细胞移植的疗效。因此，针对以上现状，迫切需要提供一种延缓MSCs衰老的方法，以克服当前实际应用中的不足。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种延缓MSCs衰老的方法，旨在解决上述技术背景中的问题。
[0006]本专利技术是这样实现的，一种延缓MSCs衰老的方法，该方法包括如下步骤：
[0007]步骤1：获取衰老的MSCs；
[0008]步骤2：利用携带SCD2的慢病毒感染衰老的MSCs，使得衰老的MSCs的脂质合成水平上调，进而延缓MSCs衰老。
[0009]作为本专利技术进一步的方案：在步骤1中，获取衰老的MSCs的具体步骤为：
[0010]步骤1.1：从大鼠骨髓中提取原代细胞，利用全骨髓贴壁法及体外传代培养，获得早代次MSCs(EPMSCs，P2
‑
P3)及晚代次MSCs(LPMSCs，P9
‑
P10)；
[0011]步骤1.2：通过形态学观察(细胞形态学特点、细胞表面积和长宽比)、衰老相关β半乳糖苷酶(SA
‑
β
‑
gal)染色以及衰老相关因子P16
INK4a
的表达，建立复制性衰老的MSCs。
[0012]作为本专利技术进一步的方案：在步骤1.1中，所述大鼠为1
‑
2月龄雄性Wistar大鼠。
[0013]作为本专利技术进一步的方案：在步骤2中，携带SCD2的慢病毒感染衰老MSCs的时间为48h
‑
72h。
[0014]作为本专利技术进一步的方案：所述方法在制备延缓衰老的药品中的应用。
[0015]作为本专利技术进一步的方案：所述方法在制备抗皮肤衰老保健品中的应用。
[0016]作为本专利技术进一步的方案：所述方法在制备食品添加剂中的应用。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0018]本专利技术围绕SCD2影响MSCs脂质合成水平调控细胞衰老进行探讨，首次将SCD2与MSCs衰老有机联系，从干细胞脂质代谢这一新颖角度去探究干细胞衰老，发现SCD2能够通过提高细胞脂质合成水平来延缓间充质干细胞衰老，为阐明干细胞衰老的调控机制提供实验依据，也为体外培养获得大量年轻态MSCs提供了新思路和新技术，将有助于维持干细胞数量及功能，有助于延缓机体衰老及防治各种老龄化疾病，对社会长久健康发展具有重要意义。
附图说明
[0019]图1a为本专利技术实施例1中显微镜下显示的EPMSCs及LPMSCs细胞形态；
[0020]图1b为本专利技术实施例1中EPMSCs及LPMSCs细胞形态的参数分析结构；
[0021]图1c为本专利技术实施例1中SA
‑
β
‑
gal染色结果；
[0022]图1d为本专利技术实施例1中利用RT
‑
qPCR技术检测衰老相关因子P16
INK4a
mRNA水平的结果示意图；
[0023]图2a为本专利技术实施例2中LPMSCs和EPMSCs经茜素红染色后的对照图；
[0024]图2b为本专利技术实施例2中Western Blot结果示意图；
[0025]图2c为本专利技术实施例2中EPMSCs和LPMSC的红色荧光强度对照示意图；
[0026]图2d为本专利技术实施例2中RT
‑
qPCR检测EPMSCs与LPMSCs中SCD2 mRNA表达水平示意图；
[0027]图2e为本专利技术实施例2中Western Blot检测EPMSCs与LPMSCs中SCD2蛋白表达水平示意图；
[0028]图3a为本专利技术实施例3中显示SCD2慢病毒过表达后，各组MSCs均表达绿色荧光蛋白示意图；
[0029]图3b为本专利技术实施例3中RT
‑
qPCR检测结果示意图；
[0030]图3c为本专利技术实施例3中Western Blot检测结果示意图；
[0031]图4a为本专利技术实施例4中SA
‑
β
‑
gal染色检测细胞衰老情况示意图；
[0032]图4b为本专利技术实施例4中RT
‑
qPCR检测衰老相关因子的表达图；
[0033]图4c为本专利技术实施例4中茜素红染色检测细胞成骨分化能力示意图；
[0034]图4d为本专利技术实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种延缓MSCs衰老的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤1：获取衰老的MSCs；步骤2：利用携带SCD2的慢病毒感染衰老的MSCs，使得衰老的MSCs的脂质合成水平上调，进而延缓MSCs衰老。2.根据权利要求1所述的延缓MSCs衰老的方法，其特征在于，在步骤1中，获取衰老的MSCs的具体步骤为：步骤1.1：从大鼠骨髓中提取原代细胞，利用全骨髓贴壁法及体外传代培养，获得早代次MSCs及晚代次MSCs；步骤1.2：通过形态学观察、衰老相关β半乳糖苷酶染色以及衰老相关因子P16
INK4a
的表达，建立复制性衰老的MSCs。3.根据权利要求2所述的延缓MSCs衰老的方法，其特征在于，在步骤1.1中，所述大...

【专利技术属性】
技术研发人员：何旭，于晓，孙亚楠，高星宇，张畅，孙慧，石英爱，张海英，黄凡珂，王一茗，闫悦琪，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：