一种脐带间充质干细胞功能亚群及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞功能亚群及其应用，其细胞表面具有高表达的Marker，该Marker包括CXCR4、CD271、CD105、CD73和CD90，其中，表面高表达CD105的细胞的占比为90

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞功能亚群及其应用


[0001]本专利技术属于干细胞治疗
，具体涉及一种脐带间充质干细胞功能亚群及其应用。

技术介绍

[0002]干细胞(Stem Cell)是一类未完全分化、尚不成熟的多潜能细胞，具有强大的自我更新修复能力，在一定条件下能够分化成机体所需的功能细胞，维持机体正常生命活动，医学上称之为“万能细胞”。干细胞按照其发育阶段进行分类，可分为胚胎干细胞与成体干细胞；干细胞按照其分化潜能进行分类，可分为全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞，通常讲的间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cell，MSC)就是属于多能干细胞。
[0003]干细胞在临床上广泛应用于心血管疾病、神经性退化疾病、骨退化性疾病、自身免疫性疾病、新型冠状肺炎等疾病的治疗。据Insight数据库分析统计，全球共有19款干细胞治疗药物上市，涵间充质干细胞、造血干细胞等多种成体干细胞类型；据中国国家药品审批中心(CDE)受理备案审批，国内已有13款干细胞新药获批临床IND申请。
[0004]然而，随着单细胞分析技术的发展，我们发现干细胞药物按照其基因表达差异普谱，可以分为不同的功能亚群干细胞，不同的功能亚群干细胞在分化能力、免疫调控能力、再生修复能力上各有差异。相关临床研究表明，将传统干细胞制剂直接应用于临床治疗，因干细胞制剂存在不同的功能亚群(即异质性)，临床治疗精准靶向性低，故仅有少部分患者有显著效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种脐带间充质干细胞功能亚群。
[0006]本专利技术的另一目的在于提用上述脐带间充质干细胞功能亚群的流式细胞分选方法。
[0007]本专利技术的再一目的在于提供上述脐带间充质干细胞功能亚群的应用。
[0008]本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种脐带间充质干细胞功能亚群，其细胞表面具有高表达的Marker，该Marker包括CXCR4、CD271、CD105、CD73和CD90，其中，表面高表达CD105的细胞的占比为90
‑
91％，表面高表达CD73的细胞的占比为93
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95％，表面高表达CD90的细胞的占比为91
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93％，表面高表达CXCR4的细胞的占比为94
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96％，表面高表达CD271的细胞的占比为95
‑
97％，并上调表达系列趋化因子CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCLAL2，且CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCLAL2在其中的上调表达Log2FC依次为53.7
‑
53.8、3.8
‑
3.9、7.8
‑
79、4.4
‑
4.5和53.2
‑
53.3。
[0010]在本专利技术的一个优选实施方案中，其中，表面高表达CD105的细胞的占比为90％，表面高表达CD73的细胞的占比为94％，表面高表达CD90的细胞的占比为92％，表面高表达CXCR4的细胞的占比为95％，表面高表达CD271的细胞的占比为96％。
[0011]进一步优选的，所述CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCL4L2在其中的上调表达Log2FC
依次为53.73、3.86、7.84、4.46和53.25。
[0012]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述Marker由CXCR4、CD271、CD105、CD73和CD90组成。
[0013]上述脐带间充质干细胞功能亚群的流式细胞分选方法，包括如下步骤：
[0014](1)取培养的脐带间充质干细胞消化离心，弃去上清，用FACS缓冲液清洗后，再弃上清，然后用新鲜的FACS缓冲液重悬并调整浓度，获得细胞悬液；
[0015](2)将死活染料7
‑
AAD及荧光标记表面抗体CXCR4、CD271加入上述细胞悬液中，震荡混匀后避光孵育，然后离心去上清，然后用预冷的无菌分选缓冲液稀释成细胞浓度不超过1
×
107/mL的单细胞悬液；
[0016](3)以CXCR4
+
CD271
+
设门收集上述单细胞悬液中所要的脐带间充质干细胞功能亚群，分选结束后用流式细胞仪检测分选细胞纯度，细胞纯度在95％以上认定为分选成功。
[0017]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中，震荡混匀后4℃避光孵育20min后，然后4℃300g离心5min去上清。
[0018]上述脐带间充质干细胞功能亚群在制备免疫活性抑制组合物中的应用。
[0019]上述脐带间充质干细胞功能亚群在制备治疗免疫性炎症疾病的组合物中的应用。
[0020]一种免疫活性抑制组合物，其有效成分包括上述脐带间充质干细胞功能亚群。
[0021]一种治疗免疫性炎症疾病的组合物，其有效成分包括上述脐带间充质干细胞功能亚群。
[0022]本专利技术的有益效果是：本专利技术具有免疫抑制能力，为干细胞精准治疗免疫性炎症疾病提供了新的治疗方案，以解决临床干细胞治疗效果差与工业生产标准化困难等问题。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例1中的单细胞测序上机前cDNA质量控制图。
[0024]图2为本专利技术实施例1中的脐带间充质干细胞单细胞分析t
‑
SNE功能亚群分类结果图。
[0025]图3为本专利技术实施例2中的脐带间充质干细胞功能亚群Cluster1的流式细胞分选结果图。
[0026]图4为本专利技术实施例3中的脐带间充质干细胞功能亚群Cluster1对PBMC的免疫抑制作用结果图。
具体实施方式
[0027]以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。
[0028]实施例1功能亚群间充质干细胞的单细胞测序分析
[0029]从健康人脐带获取中胚层组织，利用酶解消化法分离获取脐带间充质干细胞，制备成单细胞悬液(1
×
105个)。利用10
×
Genomics技术分析平台对脐带间充质干细胞捕获单个细胞，制备成油滴包裹的凝胶珠GEM，进行上机前建库分析。使用Qubit3.0检测cDNA样本浓度，根据该浓度选择合适的芯片检测样本的cDNA片段分布状况，使用Agilent 2100或Qsep 100检测样本。最后对单细胞测序结果进行t
‑
SNE亚群聚类分析，表面Marker基因分析与上调表达基因分析。
[0030]如图1所示，cDNA片段1298，总量813.2ng，Qubit浓度21.4ng/ug。综上符合单细胞测序上机要求。
[0031]如表1所示，脐带间充质干细胞上机捕获细胞数目为10394个，每个UMI含细胞数为4395.75，样本饱和度达42.1％。综上，脐带间充质干细胞单细胞分析结果可靠。
[0032]表1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞功能亚群，其特征在于：其细胞表面具有高表达的Marker，该Marker包括CXCR4、CD271、CD105、CD73和CD90，其中，表面高表达CD105的细胞的占比为90
‑
91％，表面高表达CD73的细胞的占比为93
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95％，表面高表达CD90的细胞的占比为91
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93％，表面高表达CXCR4的细胞的占比为94
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96％，表面高表达CD271的细胞的占比为95
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97％，并上调表达系列趋化因子CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCL4L2，且CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCL4L2在其中的上调表达Log2FC依次为53.7
‑
53.8、3.8
‑
3.9、7.8
‑
79、4.4
‑
4.5和53.2
‑
53.3。2.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞功能亚群，其特征在于：其中，表面高表达CD105的细胞的占比为90％，表面高表达CD73的细胞的占比为94％，表面高表达CD90的细胞的占比为92％，表面高表达CXCR4的细胞的占比为95％，表面高表达CD271的细胞的占比为96％。3.如权利要求2所述的一种脐带间充质干细胞功能亚群，其特征在于：所述CCL3、CCL13、CCL18、CCL20与CCL4L2在其中的上调表达Log2FC依次为53.73、3.86、7.84、4.46和53.25。4.如权利要求1至3中...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾子晏，郑炳义，王薛婷，杨长明，曾晓玲，曾才英，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：