识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，涉及识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒。该分子监测序列中由5

【技术实现步骤摘要】
识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒。

技术介绍

[0002]肝纤维化是肝炎长期慢性病变产生的病理反应，长期的肝纤维化进程会促进肝硬化，导致肝功能严重受损，并有进一步癌变的巨大风险；而长期的肾炎肾损伤也会诱导肾脏出现纤维化现象，导致肾器官缩小，肾功能逐渐丧失。尽管当前不少基因被发现具有阻碍肝肾器官纤维化进程的作用，但如何精确地在肝肾纤维化的病理细胞中高精度地表达这些纤维化抑制基因目前仍有待开发。同样，虽然现已发现STAT3信号通路的激活是主要的肝肾纤维化驱动性因素，也发现mir
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122、mir
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145是区分正常代谢肝细胞与纤维化代谢不良病变肝细胞的关键分子信号,mir
‑
29、mir
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200是区分正常肾细胞与纤维化病变肾细胞的关键分子信号。但是，目前尚无报道如何通过识别STAT3信号激活来区分肝肾纤维化病变组织细胞与正常健康细胞。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是提供识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列、重组质粒、抑制病毒。
[0004]本专利技术提供一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，所述分子监测序列中，由5
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端至3
’
端依次连接STAT3增强子和特异性最短启动子；所述特异性最短启动子为肝特异性最短启动子或肾特异性最短启动子。
[0005]本专利技术还可以通过以下进一步技术方案实现：
[0006]进一步，所述STAT3增强子的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]进一步，所述肝特异性最短启动子的序列如SEQ ID NO.2所示；所述肾特异性最短启动子的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0008]进一步，所述特异性最短启动子的3
’
端依次连接经过密码子优化的功能基因和细胞纤维化分子信号的互补靶向序列；所述功能基因受所述互补靶向序列的反向调控。
[0009]进一步，所述分子监测序列为识别肝细胞纤维化的分子监测序列，由5
’
端至3
’
端，依次连接5
’
反向末端重复序列、所述STAT3增强子、所述肝特异性最短启动子、所述经过密码子优化的功能基因、所述互补靶向序列、Poly(A)尾巴以及3
’
反向末端重复序列；
[0010]其中，所述互补靶向序列为mir
‑
122和mir
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145的互补靶向序列；
[0011]所述经过密码子优化的功能基因为mScarlet，SIRT1或PLAU基因中的一种。
[0012]进一步，所述mir
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122的互补靶向序列如SEQ ID NO.4所示；所述mir
‑
145的互补靶向序列如SEQ ID NO.5所示。
[0013]进一步，所述分子监测序列为识别肾细胞纤维化的分子监测序列，由5
’
端至3
’
端，
依次连接5
’
反向末端重复序列、所述STAT3增强子、所述肾特异性最短启动子、所述经过密码子优化的功能基因、所述互补靶向序列、Poly(A)尾巴以及3
’
反向末端重复序列；
[0014]所述互补靶向序列为mir
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29和mir
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200的互补靶向序列；
[0015]其中，所述经过密码子优化的基因为mScarlet、SIRT1或PLAU基因中的一种。
[0016]进一步，所述mir
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29的互补靶向序列如SEQ ID NO.6所示；所述mir
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200的互补靶向序列如SEQ ID NO.7所示。
[0017]本专利技术提供一种用于识别和调控肝肾细胞纤维化的重组质粒，所述重组质粒包括上述的分子监测序列。
[0018]本专利技术提供一种用于识别和调控肝肾细胞纤维化的抑制病毒，所述抑制病毒含有如上述的重组质粒。
[0019]本专利技术的有益效果在于：
[0020](1)本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，能够智能精准识别肝肾细胞纤维化。通过人工合成的STAT3增强子，并将该增强子与肝肾最短特异性启动子结合，确保了该监测序列只在指定器官中STAT3转录因子激活的细胞亚群体产生活性，不仅可以特异性对这类病变细胞亚群产生报告效应，也可帮助测试潜在有治疗功能的基因元件，提高了肝肾细胞纤维化研究的效率。
[0021](2)本专利技术的识别和调控肝细胞纤维化的分子监测序列，含有区分正常代谢肝细胞与纤维化代谢不良病变肝细胞的关键分子信号mir
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122和mir
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145的互补靶向序列，可以反向调控经过密码子优化的功能基因的基因表达，实现对肝细胞纤维化的调控。
[0022](3)本专利技术的识别和调控肾细胞纤维化的分子监测序列，含有区分正常代谢肝细胞与纤维化代谢不良病变肝细胞的关键分子信号mir
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29和mir
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200c的互补靶向序列，可以反向调控经过密码子优化的功能基因的基因表达，实现对肾细胞纤维化的调控。
[0023](4)本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，具有高效、精准的识别和调控效果。
[0024](5)本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，可结合在质粒上，重组质粒以腺病毒为载体，组装为抑制病毒，该抑制病毒可以作为药物制剂得到广泛应用。
附图说明
[0025]图1为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例1中制备的含有优化的mScarlet基因的肝细胞纤维化分子监测序列；
[0026]图2为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例1中制备的含有优化的SIRT1基因的肝细胞纤维化分子监测序列；
[0027]图3为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例1中制备的含有优化的PLAU基因的肝细胞纤维化分子监测序列；
[0028]图4为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例4中制备的含有优化的SIRT1基因的肾细胞纤维化分子监测序列；
[0029]图5为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例4中制备的含有优化的PLAU基因的肾细胞纤维化分子监测序列；
[0030]图6为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例2中，红色荧
光阳性组和红色荧光阴性组的
ɑ
平滑肌纤维蛋白(SMAα蛋白)相对表达量；
[0031]图7为本专利技术的识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，实施例2中，肝纤维化模型+mSirt1组，肝纤维化模型+mPla本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，其特征在于，所述分子监测序列包括由5
’
端至3
’
端依次连接STAT3增强子和特异性最短启动子；所述特异性最短启动子为肝特异性最短启动子或肾特异性最短启动子。2.根据权利要求1所述一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，其特征在于，所述STAT3增强子的序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，其特征在于，所述肝特异性最短启动子的序列如SEQ ID NO.2所示；所述肾特异性最短启动子的序列如SEQ ID NO.3所示。4.根据权利要求1～3任意一项所述一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，其特征在于，所述特异性最短启动子的3
’
端还依次连接功能基因和细胞纤维化分子信号的互补靶向序列；所述功能基因受所述互补靶向序列的反向调控。5.根据权利要求4所述一种识别和调控肝肾细胞纤维化的分子监测序列，其特征在于，所述分子监测序列为识别肝细胞纤维化的分子监测序列，包括由5
’
端至3
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端依次连接的5
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反向末端重复序列、所述STAT3增强子、所述肝特异性最短启动子、所述经过密码子优化的功能基因、所述互补靶向序列、Poly(A)尾巴以及3
’
反向末端重复序列；其中，所述互补靶向序列为mir
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122互补靶向序列和mir
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145的互补靶向序列；所述经过密码子优化的功能基因为mScarl...

【专利技术属性】
技术研发人员：余裕，姜长安，
申请(专利权)人：珠海中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：