一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱制造技术

本发明专利技术公开了一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱，涉及植物品种鉴别技术领域。所述分子标记包括VaSSR01

【技术实现步骤摘要】
一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱


[0001]本专利技术涉及植物品种鉴别领域，特别是涉及一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱。

技术介绍

[0002]小豆(Vigna angularis)起源于中国，隶属于豇豆属(Vigna)栽培种的一种。我国种植小豆至少已有2000多年的历史。小豆属于杂粮，小豆除富含蛋白质、维生素、矿质元素等营养物质外，适当的食用小豆有利尿消肿的作用，是广受欢迎的医食两用作物。我国的小豆种质资源丰富，截至2008年，国家种质库保存量近5000份，由于不同地区之间品种交流频繁，从而导致了其种类和品种繁多，来源较为复杂，存在大量“同名异种”和“一品多名”种质。小豆品种混乱、真假难辨，许多生产者不能区分出当地种植的品种，小豆种子生产者能否生产出优质高产的小豆品质无法得到保障，从而造成严重损失。多年来，品种鉴定是以形态学标记为依据的。这种方法虽然简单经济，但周期长，花费大，受季节限制，而且很多性状的表现受栽培措施及环境因子影响，从而制约了鉴定的准确性。DNA分子标记技术则具有高效、准确、不受环境条件影响、实验操作简单等优点，已广泛应用于植物品种真实性鉴定及纯度检测研究。SSR标记是近年来发展起来的建立在PCR基础上的第二代分子标记。由于SSR分子标记具有数量丰富、多态性高、遗传共显性、谱带扩增稳定、精度高、检测时间短、技术成熟等特点，已应用于作物遗传学研究。目前，小豆中也有利用分子标记技术进行研究的，但是没有具体只针对小豆品种开发的SSR分子标记以及利用SSR分子标记构建的技术体系。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术构建的指纹图谱能够准确鉴别不同品种的小豆。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0005]本专利技术提供一种用于鉴别小豆的分子标记组合，所述分子标记包括VaSSR01、VaSSR02、VaSSR03、VaSSR04、VaSSR05、VaSSR06、VaSSR07、VaSSR08、VaSSR09、VaSSR10、VaSSR11、VaSSR12和VaSSR13；所述VaSSR01通过如SEQ ID NO：1
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2所示引物对扩增得到，所述VaSSR02通过如SEQ ID NO：3
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4所示引物对扩增得到，所述VaSSR03通过如SEQ ID NO：5
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6所示引物对扩增得到，所述VaSSR04通过如SEQ ID NO：7
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8所示引物对扩增得到，所述VaSSR05通过如SEQ ID NO：9
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10所示引物对扩增得到，所述VaSSR06通过如SEQ ID NO：11
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12所示引物对扩增得到，所述VaSSR07通过如SEQ ID NO：13
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14所示引物对扩增得到，所述VaSSR08通过如SEQ ID NO：15
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16所示引物对扩增得到，所述VaSSR09通过如SEQ ID NO：17
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18所示引物对扩增得到，所述VaSSR10通过如SEQ ID NO：19
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20所示引物对扩增得到，所述VaSSR11通过如SEQ ID NO：21
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22所示引物对扩增得到，所述VaSSR12通过如SEQ ID NO：23
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24所示引物对扩增得到，所述VaSSR13通过如SEQ ID NO：25
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26所示引物对扩增得到。
[0006]本专利技术还提供一种用于鉴别小豆的引物组合，包括13对特异性引物对，所述引物
对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：26所示。
[0007]本专利技术还提供一种用于鉴别小豆的试剂盒，包含上述的引物组合。
[0008]本专利技术还提供一种小豆指纹图谱的构建方法，包括：采集不同生长习性的小豆并进行编号，利用上述的引物组合对不同品种小豆的DNA进行PCR扩增，再对扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测结果构建所述小豆指纹图谱。
[0009]进一步地，小豆品种包括资源库号为XD017的北23、资源库号为XD021的北26、资源库号为XD035的山东枣庄农家种、资源库号为XD036的宝清红、资源库号为XD045的LZX031、资源库号为XD050的LZX051、资源库号为XD053的红小豆、资源库号为XD054的LZX063、资源库号为XD075的红珍珠、资源库号为XD084的HD2、资源库号为XD099的FBX01、资源库号为XD113的FJMS01、资源库号为XD116的FLD01、资源库号为XD120的天津红、资源库号为XD128的A485、资源库号为XD130的杂豆、资源库号为XD132的红小豆1
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1、资源库号为XD143的保876
‑
16、资源库号为XD166的红小豆、资源库号为XD178的H05、资源库号为XD180的H06、资源库号为XD182的H07、资源库号为XD184的冀红9218、资源库号为XD188的H09
‑
1、资源库号为XD199的H14
‑
1。
[0010]进一步地，所述PCR扩增的反应体系为：DNA模板0.8μL，l0pmo1/L上游引物0.2μL，10pmo1/L下游引物0.2μL，10
×
PCRbuffer 2μL，25mmol/LMg
2+
1.2μL，10mmol/L dNTP 0.5μL，5U/μLTaq酶0.2μL，ddH2O 14.4μL；所述PCRbuffer不含Mg
2+
。
[0011]进一步地，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；72℃延伸5min，4℃保存。
[0012]本专利技术还提供上述的分子标记组合、引物组合或试剂盒在获取小豆指纹图谱中的应用。
[0013]本专利技术还提供上述的分子标记组合、引物组合、试剂盒或构建方法在鉴别小豆品种中的应用。
[0014]本专利技术公开了以下技术效果：
[0015]本专利技术公开了用于鉴别小豆的分子标记组合，仅利用13对小豆引物对即能扩增出上述的分子标记组合，进而能够将小豆品种有效鉴别，鉴别准确率高达100％。因此，本专利技术公开的分子标记组合和引物组合在进一步鉴别大量小豆品种方面具有很大潜力，与现有常规形态鉴定相比，具有效果更佳，且节约时间、成本等优点，本专利技术可为小豆品种DNA指纹鉴定提供技术支持。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别小豆的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记包括VaSSR01、VaSSR02、VaSSR03、VaSSR04、VaSSR05、VaSSR06、VaSSR07、VaSSR08、VaSSR09、VaSSR10、VaSSR11、VaSSR12和VaSSR13；所述VaSSR01通过如SEQ ID NO：1
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2所示引物对扩增得到，所述VaSSR02通过如SEQ ID NO：3
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4所示引物对扩增得到，所述VaSSR03通过如SEQ ID NO：5
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6所示引物对扩增得到，所述VaSSR04通过如SEQ ID NO：7
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8所示引物对扩增得到，所述VaSSR05通过如SEQ ID NO：9
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10所示引物对扩增得到，所述VaSSR06通过如SEQ ID NO：11
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12所示引物对扩增得到，所述VaSSR07通过如SEQ ID NO：13
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14所示引物对扩增得到，所述VaSSR08通过如SEQ ID NO：15
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16所示引物对扩增得到，所述VaSSR09通过如SEQ ID NO：17
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18所示引物对扩增得到，所述VaSSR10通过如SEQ ID NO：19
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20所示引物对扩增得到，所述VaSSR11通过如SEQ ID NO：21
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22所示引物对扩增得到，所述VaSSR12通过如SEQ ID NO：23
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24所示引物对扩增得到，所述VaSSR13通过如SEQ ID NO：25
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26所示引物对扩增得到。2.一种用于鉴别小豆的引物组合，其特征在于，包括13对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：26所示。3.一种用于鉴别小豆的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所示的引物组合。4.一种小豆指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括：采集不同生长习性的小豆并进行编号，利用权利要求2所述的引物组合对不同品种小豆的DNA进行PCR扩增，再对扩增产物进...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜吉到，张琦，任心雨，张文静，韩金鹏，唐钰鑫，褚多，马悦，张欣林，李思琪，杨一鸣，吴贵生，耿思琦，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：