测定试样的调制方法、分析方法、试剂及试剂盒技术

本发明专利技术以提升受试物质的检测灵敏度作为课题。本发明专利技术由用于调制含与受试物质结合的金属纳米粒子的凝集体的测定试样的调制方法解决所述课题，所述调制方法包括：使所述受试物质和所述连接体接触并结合，及使与所述受试物质结合的所述连接体和所述金属纳米粒子接触并结合。并结合。并结合。

【技术实现步骤摘要】
测定试样的调制方法、分析方法、试剂及试剂盒


[0001]本专利技术涉及用于调制含与受试物质结合的金属纳米粒子的凝集体的测定试样的调制方法、分析方法、试剂、及试剂盒。

技术介绍

[0002]在专利文献1中公开了在含有金属的粒子及含有金属的粒子上具有阳离子性包被，带正电荷的表面增强拉曼散射(SERS)活性粒子。另外公开了具有含有金属的粒子和非金属分子，含有金属的粒子是非金属分子且衍生物化的SERS活性粒子。再者，公开了通过使SERS活性粒子接触分析物来在SERS活性粒子上捕获分析物，使捕获分析物的SERS活性粒子凝集，检测SERS光谱的信号的方法。
[0003]【现有技术文献】
[0004]【专利文献】
[0005]【专利文献1】美国专利公开第2007/0155021说明书
[0006]【专利技术的概要】
[0007]【专利技术要解决的课题】
[0008]在各种各样的领域要求以高灵敏度检测分析物，例如，在临床检查中，以高灵敏度检测要求蛋白质中的氨基酸。在专利文献1中谋求通过使用SERS活性粒子，使SERS光谱的信号增强来检测灵敏度的提升，但要求进一步的的信号的增强。
[0009]本专利技术旨在提供，用于提升分析物的检测灵敏度的测定试样的调制方法、分析方法、用于调制测定试样的试剂、及试剂盒。
[0010]【用于解决课题的手段】
[0011]本专利技术是用于调制含与受试物质结合的金属纳米粒子的凝集体的测定试样的调制方法，其包括使上述受试物质和连接体接触并结合，使与上述受试物质结合的上述连接体和上述金属纳米粒子接触并结合。由此，可调制能以高灵敏度检测受试物质的测定试样。
[0012]本专利技术涉及包括从由上述调制方法调制的测定试样取得分光光谱，基于取得的分光光谱而输出上述受试物质相关信息的分析方法。由此，可以高灵敏度检测受试物质。
[0013]本专利技术涉及含不与金属纳米粒子结合的连接体的在由上述调制方法的测定试样的调制中使用的试剂。
[0014]本专利技术涉及含上述试剂和与连接体分开包装的金属纳米粒子的在由上述调制方法的测定试样的调制中使用的试剂盒。
[0015]【专利技术的效果】
[0016]可由本专利技术提升分析物的检测灵敏度。
[0017]【附图的简单的说明】
[0018]【图1】是显示测定试样的调制方法的图。
[0019]【图2】是显示分析装置的构成例的图。
[0020]【图3】(A)是根据实施例而进行试样调制的测定试样(Phe)的SERS光谱。(B)是未加
受试物质而根据实施例进行试样调制的测定试样的SERS光谱。(C)是未加DSP而根据实施例进行试样调制的测定试样的SERS光谱。(D)是受试物质和DSP均未加的阴性对照试样的SERS光谱。
[0021]【图4】显示以20种氨基酸的各自作为受试物质使用之时的SERS光谱。图中的符号a是加受试物质之时的光谱，符号b表示未加受试物质的阴性对照的光谱。
[0022]【图5】显示以二肽作为受试物质使用之时的SERS光谱。图中的符号c表示未加受试物质的阴性对照的光谱。
[0023]【图6】(A)显示以Aβ42作为受试物质加之时的SERS光谱和未加受试物质的阴性对照的光谱。(B)显示以Aβ40作为受试物质加之时的SERS光谱和未加受试物质的阴性对照的光谱。(C)显示以Aβ38作为受试物质加之时的SERS光谱和未加受试物质的阴性对照的光谱。(D)、(E)、及(F)各自显示在取得(A)、(B)、及(C)的光谱时使用的测定试样中的金纳米粒子的凝集体的明场图像。(G)显示阴性对照的测定试样中的金纳米粒子的凝集体的明场图像。
[0024]【图7】显示以苯丙氨酸、色氨酸、或者酪氨酸作为受试物质使用，由实施例的试样调制方法调制的测定试样和由比较例的试样调制方法调制的测定试样的SERS光谱。
[0025]【图8】显示作为受试物质，使用二肽，由实施例的试样调制方法调制的测定试样和由比较例的试样调制方法调制的测定试样的SERS光谱。
[0026]【图9】显示调制将仅金纳米粒子、仅金纳米粒子和DSP混合的测定试样，取得测定试样的吸收光谱之时的结果。图中，符号a表示仅金纳米粒子的测定试样的光谱，图中符号b表示将仅金纳米粒子和DSP混合的测定试样的光谱。
[0027]【图10】显示使用不同的链长的连接体调制测定试样，取得的SERS光谱。
[0028]【图11】显示使用具有不同的粒径、及不同的形状的金属纳米粒子调制测定试样而取得的SERS光谱。
【具体实施方式】
[0029]【1.测定试样的调制方法】
[0030]由本调制方法调制含与受试物质结合的金属纳米粒子的凝集体的测定试样。本调制方法如图1所示，包括(i)使上述受试物质和上述连接体接触并结合，(ii)使与上述受试物质结合的上述连接体和上述金属纳米粒子接触并结合。另外，由受试物质也可包括(iii)使与受试物质结合的上述连接体与金属纳米粒子接触之后，再添加无机盐或酸。
[0031]本调制方法在使受试物质和连接体先反应后，使受试物质和连接体的复合体与金属纳米粒子反应。通过这样，可提升受试物质的检测灵敏度。
[0032]测定试样优选为供于受试物质的分光光谱解析的试样。分光光谱解析可举出荧光分光法、表面等离子体共振法(surface plasmon resonance：SPR)及红外分光法等，优选拉曼散射光解析、更优选为表面增强拉曼散射光(Surface Enhanced Raman Scattering：SERS)解析。
[0033](i)受试物质和连接体的接触
[0034]受试物质可含选自RNA、DNA等的核酸、氨基酸、多肽、儿茶酚胺、多胺、有机酸、及，细胞外囊泡、病毒的至少1种。其中，“多肽”是由肽键连接2个以上的氨基酸的化合物。例如，可举出二肽、寡肽、蛋白质等。受试物质具有选自氨基、羧基、及羟基的至少1种官能团。利用
此官能团与后述的连接体结合。受试物质含在水或缓冲液等的溶剂中，或含在血液、血清、血浆、唾液、腹水、胸水、脑脊髓液、细胞间质液、尿等的液体的生物体试样中。连接体只要是具有与官能团反应的反应基团，并且与后述的金属纳米粒子结合，就不限制。连接体例如下述通式(I)所表示。
[0035]R3‑
O
‑
CO
‑
R1‑
S
‑
S
‑
R2‑
CO
‑
O
‑
R4ꢀꢀꢀ
(I)
[0036](在上述式中，
[0037]R1及R2表示相同或不同的碳原子数1～12的亚烷基。
[0038]R3及R4表示相同或不同的反应基团。)
[0039]优选为构成R1及R2的亚烷基的碳原子数是2～10。另外，R1及R2更优选为相同。
[0040]R3及R4是与受试物质的官能团结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于调制含与受试物质结合的金属纳米粒子的凝集体的测定试样的调制方法，其包括：使所述受试物质和连接体接触并结合，及使与所述受试物质结合的所述连接体和所述金属纳米粒子接触并结合。2.权利要求1所述的调制方法，其中所述受试物质具有官能团，且所述连接体具有与所述官能团反应的反应基团。3.权利要求2所述的调制方法，其中所述官能团是选自下列的至少1种：氨基、羧基及羟基。4.权利要求3所述的调制方法，其中所述官能团是氨基，且所述反应基团是选自下列的至少1种：N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯、异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、磺酰氯、醛、酰亚胺酯、氟苯、环氧化物、碳二亚胺、碳酸酯及氟苯基酯。5.权利要求4所述的调制方法，其中所述反应基团是N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯，且所述连接体是选自下列的至少1种：二硫代双(丙酸琥珀酰亚胺酯)、二硫代双(十一烷酸琥珀酰亚胺酯)、二硫代双(辛酸琥珀酰亚胺酯)及二硫代双(己酸琥珀酰亚胺酯)。6.权利要求1～5之任一项所述的调制方法，其中所述金属纳米粒子是含选自金、银、铂、铜及钯的至少1种金属的纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：岛冈勇辉，冈田昌也，岩永茂树，畔堂一树，藤田克昌，名和靖矩，藤田聪史，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学国立研究开发法人产业技术综合研究所，
类型：发明
国别省市：