一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途技术

本发明专利技术公开一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途，即苦荞活性肽在防治酒精性肝病药物、食品和保健食品的应用。该苦荞活性肽的肽序为Lys

【技术实现步骤摘要】
一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途


[0001]本专利技术涉及一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途，尤其涉及一种苦荞活性肽及其制备和在治疗酒精性肝病药物中的应用，属于食品与医药


技术介绍

[0002]酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是长期过量饮酒引起的慢性肝病。在全世界范围内,酒精性肝病即病毒性肝炎之后,成为肝脏损害的第二大主要病因。近年来我国酒精性疾病发病率呈增长趋势,严重影响患者日常生活、工作,对其生命健康造成威胁。目前对于酒精性肝病无特效药物，主要治疗仍以戒酒为主。
[0003]苦荞(Fagopyrum tataricum)起源于中国和亚洲北部地区，为蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum)一年生双子叶作物，具有生育期短、耐冷凉、耐贫瘠、适应性较强等特点，常作为山区、丘陵区轮作换茬的重要作物之一；苦荞含有丰富的营养和保健成分，尤其是在预防糖尿病、高血糖、高血脂等方面有重要作用；其中，苦荞的蛋白质含量为13.4%，富含赖氨酸、苯丙氨酸等多种必需氨基酸，是一种营养均衡的蛋白质，可以很好地为人体所利用。有研究发现苦荞蛋白具有降低胆固醇、降血脂、抗衰老、抑制乳腺癌的发生、抑制胆结石等作用；但是将苦荞活性肽用于治疗酒精性肝病尚未被报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的一在于提供具有新型氨基酸序列的苦荞活性肽，所述苦荞活性肽的氨基酸序列为：Lys
‑
Leu
‑r/>Arg
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gln
‑
Val
‑
Leu，经动物试验发现，该苦荞活性肽能够显著减轻酒精导致的肝损伤，可用于制备治疗酒精性肝病的药物。
[0005]本专利技术的目的二在于提供所述苦荞活性肽在制备治疗肝损伤药物中的应用。
[0006]本专利技术的目的三在于提供所述苦荞活性肽在制备保肝护肝功能食品或保健品中的应用。
[0007]本专利技术的目的四在于提供所述苦荞活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：（1）以苦荞为原料，经酱油曲霉固态发酵后超声提取制备得苦荞活性肽粗液。
[0008]（2）采用截留分子量为5000Da的超滤膜（例如中空纤维聚砜超滤膜）对苦荞活性肽粗液进行超滤，收集小于5000Da的超滤液冷冻干燥，备用。
[0009]（3）以水为流动相（流速优选0.3mL/min），采用葡聚糖凝胶（例如G25凝胶）对步骤（2）得到的苦荞活性肽进行粗分。
[0010]（4）利用高效液相色谱技术对步骤（3）得到的粗分产物进一步分离，多次收集合并，冷冻干燥备用。
[0011]（5）将步骤（4）收集的苦荞活性肽复溶，经Q
‑
ExactiveLC
‑
MS/MS进行序列鉴定后进行初步筛选，根据测序结果选择含亮氨酸、脯氨酸和丙氨酸三种氨基酸中两种及以上的肽序列。
[0012]（6）将步骤（5）所得的肽与乙醇氧化酶分子对接后再次筛选进行合成。
[0013]（7）将合成后的肽经体外抗氧化抗炎活性测定，选取活性最好的肽即为所述苦荞活性肽。
[0014]优选的，本专利技术步骤（1）中酱油曲霉固态发酵具体过程为：将10
‑
20g苦荞粉经高压灭菌后加入1
‑
3mL的酱油曲霉孢子悬液（2
×
107个/mL）和2
‑
10mL无菌水，搅拌均匀后放入温度为20
‑
40℃、湿度为60%
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90%的环境中培养20
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40h；发酵结束后向发酵罐中加入20
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60mL无菌水，超声提取10
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40min，离心取上清液，即为苦荞粗溶液。
[0015]优选的，本专利技术步骤（4）中所述的高效液相色谱的分离条件为：色谱柱：Angilent Eclipse XDB
‑
C18柱。
[0016]流动相:A液：0.1％三氟乙酸
‑
水溶液；B液：0.1％三氟乙酸
‑
乙腈溶液。
[0017]采用线性梯度洗脱：0
‑
10min，10％～30％的B液；10～30min，30％～50％的B液；30
‑
50min，50
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80%的B液。
[0018]流速为0.6mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm。
[0019]优选的，本专利技术步骤（4）中所述Q
‑
ExactiveLC
‑
MS/MS分离条件为：色谱柱：AngilentEclipseXDB
‑
C18柱。
[0020]流动相：A液：0.1％甲酸水；B液：纯乙腈。
[0021]采用线性梯度洗脱：0
‑
10min，5％～25％B液；10～40min，25％～75％B液。
[0022]流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm。
[0023]除特殊说明外，本专利技术所有百分比均为质量百分比。
[0024]本专利技术所提供的解酒护肝的制剂，能通过加快酒精的代谢达到醒酒和解酒的效果，且其还能改善酒精导致的新陈代谢的异常、调节人体机能，具有清热解毒、生津止渴和健脾胃护肝的效果从而降低了酒精性肝损伤的发生。
[0025]本专利技术的有益效果本专利技术公开了一种具有新型氨基酸序列结构的活性肽；经活性试验发现，该活性肽具有良好的抗氧化和抗炎活性，能够显著改善酒精性肝病模型小鼠的氧化应激和炎症反应，可用于制备治疗酒精性肝病的药物。
附图说明
[0026]图1为苦荞活性肽对急性酒精性肝损伤小鼠组织病理学的影响；图2为苦荞活性肽对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能的影响；图3为苦荞活性肽对急性酒精性肝损伤小鼠体内丙二醛含量的影响。
具体实施方式
[0027]下面结合具体实施例，对本专利技术的实施例技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1本实施例所述苦荞活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）苦荞粉10g装入发酵罐中，121℃灭菌20min；加入酱油曲霉孢子悬液（2
×
107个/mL）2.47mL、无菌水6.04mL于温度为28℃、湿度为80%的环境中培养39.84h；发酵结束后在超净台向发酵罐中加入50mL无菌水，并在功率200W，温度为18℃超声机中提取30min，而后在4℃、10000r/min条件下离心15min，收集上清液。
[0029]（2）将滤液用截留分子量为5000Da的空纤维聚砜超滤膜进行超滤，取过滤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苦荞活性肽，其特征在于：所述苦荞活性肽的氨基酸序列为：Lys
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Leu
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Arg
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Pro
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Leu
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Gln
‑
Val
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Leu。2.权利要求1所述苦荞活性肽在在制备治疗肝损伤药物中的应用。3.权利要求1所述苦荞活性肽在制备治疗酒精性肝损伤药物中的应用。4.权利要求1所述苦荞活性肽在制备保肝护肝功能食品或保健品中的应用。5.权利要求1所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）以苦荞为原料，经酱油曲霉固态发酵后超声提取制备得苦荞活性肽粗液；（2）采用截留分子量为5000Da的超滤膜对苦荞活性肽粗液进行超滤，收集小于5000Da的超滤液冷冻干燥，备用；（3）以水为流动相，采用葡聚糖凝胶对步骤（2）得到的苦荞活性肽进行粗分；（4）利用高效液相色谱技术对步骤（3）得到的粗分产物进一步分离，多次收集合并，冷冻干燥备用；（5）将步骤（4）收集的苦荞活性肽复溶，经Q
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ExactiveLC
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MS/MS进行序列鉴定后进行初步筛选，根据测序结果选择含亮氨酸、脯氨酸和丙氨酸三种氨基酸中两种及以上的肽序列；（6）将步骤（5）所得的肽与乙醇氧化酶分子对接后再次筛选进行合成；（7）将合成后的肽经体外抗氧化抗炎活性测定，选取活性最好的肽即为所述苦荞活性肽。6.根据权利要求5所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中酱油曲霉固态发酵具体过程为：将10
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20g苦荞粉经高压灭菌后加入1
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3mL的酱油曲霉孢子悬液（2
×
107个/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉蓉，韩兴，吕静，杨振光，秦宇，张贝贝，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：