优化的柑橘Ccl-eEF1a启动子和CsUAP56小内含子构建的载体和应用制造技术

本发明专利技术公开了优化的柑橘Ccl

【技术实现步骤摘要】
优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子和CsUAP56小内含子构建的载体和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子和CsUAP56小内含子构建的载体和应用。

技术介绍

[0002]柑橘是全球最重要的经济果树之一，是世界第一大类水果。但由于柑橘木虱和柑橘黄龙病的蔓延，严重威胁着我国柑橘产业的发展，而分子育种是未来实现柑橘抗虫和抗病育种的主要手段。为实现这一目标，需优化或开发可用的分子工具如优化遗传转化载体等来提高柑橘的转化效率，挖掘可用的抗病基因进行遗传改造。分子工具的开发包括鉴定不同用途的启动子、内含子、终止子及开发不同用途的植物表达载体或基因编辑载体等。目前，柑橘的遗传转化所用启动子大多使用CaMV 35S和拟南芥UBQ10启动子来驱动目的基因，而鉴定新的柑橘物种特异性的启动子和内含子研究均相对较为匮乏。使用外源基因或启动子尤其是来源于病毒时，面临生物安全评估可能会存在一定的麻烦或安全隐患。因此鉴定柑橘内源启动子、内含子和终止子等用于柑橘遗传转化载体的构建本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；优选地，该启动子已消除序列中所有Golden Gate克隆常见酶切位点，可驱动基因在柑橘和豇豆叶片和嫩芽组织中大量表达；优选地，该启动子为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列包括其截短序列具有≥60％同源性的核苷酸序列，且具有启动子的功能。2.优化的柑橘CsUAP56小内含子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；优选地，该内含子可添加于ATG起始密码子之前，保证表达盒不会在大肠杆菌和农杆菌中转录后开启目标蛋白的翻译，仅在植物寄主中翻译目标蛋白，防止农杆菌转化后mEGFP假阳性荧光信号的产生；优选地，对该内含子的5
’
UTR进行了可变剪切位点优化，优化后的5
’
UTR和小内含子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；优选地，所述内含子为与SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列包括其截短序列具有≥60％同源性的核苷酸序列，且具有内含子的功能。3.一种生物材料，其特征在于，包含如权利要求1所述的优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子和/或如权利要求2所述的优化的柑橘CsUAP56小内含子；优选地，所述生物材料为基因表达盒、表达载体、宿主细胞或宿主菌、转基因组织或转基因苗中的一种。4.如权利要求1所述的优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子在植物营养器官中表达目的基因中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，使用优化的柑橘Ccl
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eEF1a启动子驱动目的基因或植物遗传转化筛选标记构建植物表达载体，并用于遗传转化获得转基因材料；优选地，所述目的基因或植物遗传转化筛选标记为NptⅡ基因、Hpt/HygR基因、Cat基因、Spt基因、A...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏华楠，王凯丽，李利娜，钟八莲，黄爱军，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：