靶向敲除KCNH2基因的sgRNA及其用途制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及靶向敲除KCNH2基因的sgRNA及其用途，还涉及利用上述sgRNA敲除KCNH2基因得到的猪胚胎成纤维细胞，以及利用上述猪胚胎成纤维细胞生产遗传性长QT综合征基因突变猪的方法。本发明专利技术提供的sgRNA编辑效率较高，特异性好。利用该sgRNA敲除KCNH2基因，得到猪胚胎成纤维细胞单克隆细胞株，利用其构建得到一种常染色体显性遗传长QT综合征基因突变猪模型。本发明专利技术建立的基因突变猪模型可用于常染色体显性遗传长QT综合征的研究及药物筛选，具有很高的应用研究价值。具有很高的应用研究价值。具有很高的应用研究价值。

【技术实现步骤摘要】
靶向敲除KCNH2基因的sgRNA及其用途


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及靶向敲除KCNH2基因的sgRNA及其用途，具体涉及利用该sgRNA敲除KCNH2基因的猪胚胎成纤维细胞及一种遗传性长QT综合征基因突变猪的生产方法及其应用。

技术介绍

[0002]长QT综合征(LQTS)是一种家族性的原发性心律失常综合征，以QT延长和心电图T波异常为特征，是一类异质性心脏电生理学疾病。据统计，先天性LQTS的发病率高达1/2000
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2500，发病年龄不定，患者可能终身无症状，也可能在婴儿期发生猝死。除少量Jervell和Lange
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Nielsen综合征(JLNS)：一种以伴随严重的心脏表型和感觉神经性听力损失为特征的常染色体隐性遗传情况，LQTS通常为常染色体显性遗传(Romano
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Ward综合征)。临床症状包括心悸、晕厥和继发于室性心律失常的缺氧性癫痫发作，典型的尖端扭转型室性心动过速，以及在心脏结构正常的其他健康年轻个体中心脏性猝死(SCD)的风险增加等，大多数发病情况与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向敲除KCNH2基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2.编码权利要求1所述sgRNA的DNA分子。3.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求2所述DNA分子。4.一种敲除了KCNH2基因的细胞的构建方法，其特征在于，包括：利用CRISPR
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Cas9系统敲除所述细胞的KCNH2基因，所述CRISPR
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Cas9系统使用权利要求1所述的sgRNA；所述利用CRISPR
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Cas9系统敲除所述细胞的KCNH2基因中使用pX459载体；所述细胞为猪胚胎成纤维细胞。5.一种猪胚胎成纤维细胞，其特征在于，所述猪胚胎成纤维细胞由权利要求4所述构建方法得到。6.用于鉴定权利要求5所述猪胚胎成纤维细胞的突变类型的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。7.一种遗传性长QT综合征基因突变猪的生产方法，其特征在于，包括下述步骤：利用权利要求1所述sgRNA在猪KCNH2基因7号外...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄乐南，张元，贺津，刘艳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：