一种慢病毒包装与纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种慢病毒包装与纯化方法，包括步骤：完全培养基静置培养293T细胞；去掉完全培养基后加入无血清培养基孵育；293T细胞孵育完成后去掉无血清培养基，加入质粒转染混合液进行转染处理；转染处理结束后去除质粒转染混合液，加入无血清培养基，静置培养并收集慢病毒上清液；对慢病毒上清液进行初步纯化，获得慢病毒纯化液；对慢病毒纯化液进行浓缩、无菌过滤，获得纯化的慢病毒浓缩液。本方法中，由于293T细胞在培养的过程中采用完全培养基，保证了293T细胞的状态；在慢病毒包装的过程中使用无血清培养基，不带入动物源性成分，使下游的慢病毒纯化更简单。游的慢病毒纯化更简单。游的慢病毒纯化更简单。

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒包装与纯化方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养技术，尤其涉及一种慢病毒包装与纯化方法。

技术介绍

[0002]随着免疫治疗产业的发展，越来越多的研究机构、医药公司投身于CAR
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T的研发、临床试验和产业化制备。CAR
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T全称嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T
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Cell Immunotherapy,CAR
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T），是一种利用基因工程的方法设计、合成CAR基因，通过慢病毒载体转入T细胞，从而得到CAR
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T细胞，回输给患者。目前，国外和国内已经有CAR
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T产品上市，并且还有很多的临床试验正在进行，可以说，CAR
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T治疗很有可能开发出治愈肿瘤的细胞治疗方案，造福人类。
[0003]慢病毒具有转导效率高、可整合T细胞基因组并持续表达目标蛋白等优势，是转染、电转、逆转录病毒、腺病毒等无法比拟的优势。现如今，CAR
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T细胞的临床研究及上市产品的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种慢病毒包装与纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：将处于对数生长期的293T细胞采用完全培养基重悬后转入细胞工厂，静置培养；静置培养24小时后，去掉所述完全培养基，加入无血清培养基，继续孵育；将四质粒、PEI和OPTI
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MEM混合均匀后进行孵育，随后补充加入无血清培养基，得到质粒转染混合液；所述细胞工厂孵育293T细胞完成后去掉无血清培养基，接着往所述细胞工厂加入所述质粒转染混合液，进行转染处理；转染处理结束后，去掉所述质粒转染混合液，并加入全新的无血清培养基，静置培养；静置培养过程中，收集慢病毒上清液；对慢病毒上清液依次进行Q膜富集、核酸酶酶解、离子交换处理后，获得慢病毒纯化液；所述慢病毒纯化液依次进行超滤浓缩、无菌过滤处理后，获得纯化的慢病浓缩液，然后分装、冻存、备用。2.根据权利要求1所述的慢病毒包装与纯化方法，其特征在于，所述293T细胞转入细胞工厂时：293T细胞的转入量为5.0
×
108~10.0
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108；所述细胞工厂为十层细胞工厂；且所述完全培养基为含10%（v/v）FBS的完全培养基。3.根据权利要求1所述的慢病毒包装与纯化方法，其特征在于，所述293T细胞静置培养24小时后，所述无血清培养基的加入量为500~700ml，且孵育时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海涛，方晓，马丽雅，
申请(专利权)人：深圳市先康达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：