一株副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP-P20及其在中华绒螯蟹中副溶血弧菌的防治应用制造技术

本发明专利技术提供一株副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP

【技术实现步骤摘要】
一株副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20及其在中华绒螯蟹中副溶血弧菌的防治应用


[0001]本专利技术属于微生物技术应用领域，特别涉及一株副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20及其在中华绒螯蟹中副溶血弧菌的防治应用。

技术介绍

[0002]中国水产养殖近年来发展迅猛，中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)是其中的支柱性养殖产品之一，有着不可估量的经济价值；然而随着养殖规模的不断，养殖强度的不断加大，同时也出现一系列问题，其中蟹病、蟹害的发生率也越来越严重。副溶血弧菌能引起中华绒螯蟹患病，病幼蟹感染该菌症状表现为游动无力、头胸甲发红、色素加深、背刺常折断、摄食减少和变态停滞等，24h内死亡率高达90％以上；成蟹表现症状为不能正常脱壳、行动迟缓、进食减少、体内大量腹水，死亡率可达30～50％；副溶血弧菌不仅给水产动物健康带来高风险，也给水产养殖产业造成严重的经济损失。早期随着大量大量抗生素、化学复合物的滥用，之后使得越来越多的病原微生物产生耐药性，寻找一种安全、无害、有效的生物预防或治疗方法迫在眉睫。
[0003]噬菌体是指感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称，其结构简单，特异性强，能高效裂解宿主病原菌；副溶血弧菌裂解性噬菌体体能有效裂解副溶血弧菌裂解性噬菌体，在水产养殖预防和治疗上具有非常巨大的优势和潜力，是一类具有应用前景的生物预防或治疗途径。
[0004]本专利技术通过筛选得到的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20，通过研究其生物学特性，为中华绒螯蟹中副溶血弧菌的生物控制提供新的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一是提供一株副溶血弧菌裂解性噬菌体(Vibrioparahaemolyticusphage)；
[0006]本专利技术的目的之二是将所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体(Vibrioparahaemolyticusphage)应用于防治中华绒螯蟹的副溶血弧菌病。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0008]申请人在江苏南通某水产养殖水塘，分离出一株副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20，所述噬菌体在2021年11月23日保藏至中国典型培养物保藏中心，地址中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCCNO：M20211479，分类命名为VibrioparahaemolyticusphageGVP
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P20。
[0009]进一步地，所述副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20具有较宽的裂解谱，对分离自全国不同省份的117株致病性副溶血弧菌裂解率达91.2％(107/117)，其中对6种血清型副溶血弧菌裂解率高于90％，分别为O1血清型裂解率90.5％，O2血清型裂解率95.5％，O3血清型裂解率93.3％，O4血清型裂解率94.7％，对O8血清型裂解率100％，O11血清型裂解率100％
(10/10)。
[0010]进一步的，所述副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20能用于工业生产发酵及对水产养殖的预防与治疗。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0012]1、本专利技术所述副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在工业上有巨大经济效益和对中华绒螯蟹的副溶血弧菌的防治应用。
[0013]2、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20裂解谱宽，对不同血清型副溶血弧菌均有较高的裂解率。
[0014]3、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在最佳感染复数MOI＝0.01时，发酵效价为2.95
×
10
10
PFU/mL。
[0015]4、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在pH为5
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9范围内处理8h其效价无明显变化，pH为3
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11处理1h后仍具有较高效价。
[0016]5、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在温度为65℃以下较易存活，在4
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37℃具有良好的稳定性，可长期保存。
[0017]6、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在发酵制备6h时，效价达到最高，为2.02
×
10
10
PFU/ml，在6h至12h时间段，效价稳定在10
10
PFU/mL；因此，利用发酵法进行噬菌体的大规模工业制备是切实可行的。
[0018]7、本专利技术所述的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20在对中华绒螯蟹中副溶血弧菌疾病的治疗实验中，噬菌体治疗效果与抗生素治疗效果相当，低、中和高剂量噬菌体治疗的中华绒螯蟹存活率分别为76％、 78％和86％；噬菌体治疗组的载菌与抗生素治疗组检出率相当，均比攻毒组下降了90％。
[0019]8、本专利技术中的副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20具有宿主范围广、特异性强、安全高效的特点，副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20对中华绒螯蟹中副溶血弧菌引起的疾病具有良好的预防或治疗的作用，能为噬菌体疗法的应用提供优良的菌株资源和大规模发酵生产的生物预防措施。
附图说明
[0020]图1为本专利技术副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20噬菌斑；
[0021]图2为本专利技术副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20电镜图；
[0022]图3为本专利技术不同感染复数下副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20 的效价；
[0023]图4为本专利技术反应不同时间后副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20 的pH值稳定性；
[0024]图5为本专利技术副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20于不同温度下存放不同时间后的效价；
[0025]图6为本专利技术溶藻弧菌噬菌体GVP
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P20的工业发酵动态；
[0026]图7为本专利技术不同浓度副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20对中华绒螯蟹中副溶血弧菌疾病的治疗实验结果。
具体实施方式
[0027]为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合
具体实施方式，进一步阐述本专利技术。
[0028]实施例1：
[0029]副溶血弧菌裂解性噬菌体GVP
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P20的分离纯化
[0030]在江苏南通某水产养殖水塘采集水样3份，每份50mL，6000rpm /min离心10min，取上清，并用0.22μm滤器除菌，取5mL处理后上清液与0.5mL副溶血弧菌(浓度为5...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株副溶血弧菌裂解性噬菌体(Vibrio parahaemolyticus phage)，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO：M 20211479，分类命名为Vibrio parahaemolyticus ph...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喜亮，黄金梅，田甲，张秀玲，徐岳，张晓东，李越，胡雄，
申请(专利权)人：武汉格瑞农生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：