一种超滤稀释液及提高人凝血因子制造技术

本发明专利技术涉及一种超滤稀释液及提高人凝血因子

【技术实现步骤摘要】
一种超滤稀释液及提高人凝血因子
Ⅷ
质量的制备方法


[0001]本专利技术属于血液制品
，尤其涉及一种超滤稀释液及提高人凝血因子
Ⅷ
质量的制备方法。

技术介绍

[0002]人凝血因子
Ⅷ
是治疗甲型血友病的特效药，而由于国内目前原料血浆的严重不足造成了目前市场供应不足的局面，造成了临床供应的巨大缺口。考虑到血液制品的特殊性和安全性，避免不同的人种的血浆来源问题和潜在的病毒传染问题，所以我们必须加快研发生产，缓解国内人凝血因子
Ⅷ
的临床使用的极度短缺。因此，在现阶段研发、生产出高质量的人凝血因子
Ⅷ
具有重要意义。
[0003]但是，在人凝血因子
Ⅷ
的制备过程中，常常发现会产生效价损失严重、外观不好、容易产生异物等质量等问题。

技术实现思路

[0004]鉴于现有技术所存在的问题，本专利技术提供一种超滤稀释液及提高人凝血因子
Ⅷ
质量的制备方法，能有效减少人凝血因子
Ⅷ
在后续分装、冻干、干热灭活等步骤中的效价损失，并能提高人凝血因子
Ⅷ
复溶后的外观等效果；该制备方法制备人凝血因子
Ⅷ
成品可以提高收率和质量。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供一种超滤稀释液，所述超滤稀释液包括聚山梨酯80。
[0007]采取上述技术方案的有益效果包括：本专利技术提供的超滤稀释液的配方中含有聚山梨酯80，可以有效减少可见异物，能有效防止蛋白质在过滤、转移、冷冻干燥、储存等过程中发生的物理损伤和表面吸附聚集等，且不会导致药物的失活或功能改变，该超滤稀释液能有效减少人凝血因子
Ⅷ
在后续分装、冻干、干热灭活等步骤中的效价损失，并提高人凝血因子
Ⅷ
的效价、外观等质量，具有比活性高、复溶时间短、成品收率高、质量好等优点。
[0008]进一步，聚山梨酯80的浓度为40
‑
80μg/mL。
[0009]采取上述技术方案的有益效果包括：采用合适浓度的聚山梨酯80可以进一步避免效价损失，有利于提高人凝血因子
Ⅷ
的效价、外观质量，提高比活性、缩短复溶时间、提高成品收率、提高质量。
[0010]进一步，超滤稀释液还包括氯化钠、枸橼酸钠、甘氨酸、氯化钙和甘露醇，氯化钠的浓度为17
‑
70mmol/L，枸橼酸钠的浓度为15mmol/L，甘氨酸的浓度为120mmol/L，氯化钙的浓度为1mmol/L，甘露醇的浓度为137mmol/L。
[0011]采取上述技术方案的有益效果包括：采用合适种类和用量的组分与聚山梨酯80配合使用可以进一步避免效价损失，有利于提高人凝血因子
Ⅷ
的效价、外观、质量、比活性、成品收率，进一步缩短复溶时间，从而避免参数过高或过低对制品产生影响。
[0012]进一步，超滤稀释液的pH值为6.50
‑
7.50，温度为2
‑
10℃。
[0013]采取上述技术方案的有益效果包括：采用上述条件的超滤稀释液可以进一步提高制品的质量，具有效价高、外观好、质量好、比活性高、成品收率高、复溶时间短等优点。
[0014]本专利技术提供上述超滤稀释液在纯化人凝血因子
Ⅷ
的过程中的应用。
[0015]进一步，上述超滤稀释液可以用于恒体积透析从层析柱上洗脱出的含人凝血因子
Ⅷ
的溶液。
[0016]采取上述技术方案的有益效果包括：将本专利技术的超滤稀释液用于制备人凝血因子
Ⅷ
可以有效减少可见异物、减少效价损失。具有效价高、外观好、质量好、比活性高、成品收率高、复溶时间短等优点。
[0017]本专利技术提供一种提高人凝血因子
Ⅷ
质量的制备方法，包括以下步骤：
[0018](1)将从人血浆中分离出的冷沉淀溶解；
[0019](2)调节pH；
[0020](3)酸沉淀；
[0021](4)采用DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶吸附；
[0022](5)过滤DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶；
[0023](6)S/D病毒灭活；
[0024](7)EMD
‑
TMAE阴离子交换层析；
[0025](8)采用上述超滤稀释液进行超滤。
[0026]采取上述技术方案的有益效果包括：采取上述方法制备的人凝血因子
Ⅷ
具有效价高、外观好、比活性高、复溶时间短、成品收率高、质量好等优点。
[0027]进一步，步骤(1)将从人血浆中分离出的冷沉淀溶解包括以下步骤：从人血浆中分离出的冷沉淀为起始原料，用含有肝素钠的水溶解，控制温度升温，在升至20
‑
25℃时停止升温，并保持停止时的温度恒温搅拌，在恒温搅拌时采用梯度降速的搅拌方式；梯度降速的搅拌方式包括以下步骤：在 20
‑
25℃温度下使用搅拌速度70rpm搅拌20min，保持上一搅拌速度的温度，使用搅拌速度60rpm搅拌20min，继续保持上一搅拌速度的温度，使用搅拌速度50rpm搅拌20min。
[0028]采取上述技术方案的有益效果包括：采取上述方法可以进一步提高人凝血因子
Ⅷ
的质量。具有效价高、外观好、质量好、比活性高、成品收率高、复溶时间短等优点。
[0029]进一步，步骤(2)调节pH包括以下步骤：使用预冷到0
‑
7℃的冰醋酸溶液调节pH值至6.5
‑
7.5，加入速度控制在60
‑
150mL/min；调节pH完成后继续搅拌反应30min。
[0030]采取上述技术方案的有益效果包括：采取上述方法可以进一步提高人凝血因子
Ⅷ
的质量。具有效价高、外观好、质量好、比活性高、成品收率高、复溶时间短等优点。
[0031]进一步，步骤(4)采用DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶吸附包括以下步骤：将步骤(3)酸沉淀过程离心后收集到的上清液，控制温度在10.0℃
‑
17.0℃，用预冷到0
‑
7℃的氢氧化钠溶液，调节pH值到6.80
‑
7.20，氢氧化钠溶液的加入速度为60
‑
150mL/min，调节pH完成后继续搅拌反应10min，搅拌速度为40
‑
150rpm；然后向药液加入溶胀、平衡后的DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶，每1Kg冷沉淀重量应添加1g
‑
2.5g的DEAE Sephadex
TM A
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种超滤稀释液，其特征在于，所述超滤稀释液包括聚山梨酯80。2.根据权利要求1所述超滤稀释液，其特征在于，聚山梨酯80的浓度为40
‑
80μg/mL；和/或超滤稀释液还包括氯化钠、枸橼酸钠、甘氨酸、氯化钙和甘露醇，氯化钠的浓度为17
‑
70mmol/L，枸橼酸钠的浓度为15mmol/L，甘氨酸的浓度为120mmol/L，氯化钙的浓度为1mmol/L，甘露醇的浓度为137mmol/L；和/或超滤稀释液的pH值为6.50
‑
7.50，温度为2
‑
10℃。3.权利要求1或2所述超滤稀释液在纯化人凝血因子
Ⅷ
的过程中的应用。4.一种提高人凝血因子
Ⅷ
质量的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将从人血浆中分离出的冷沉淀溶解；(2)调节pH；(3)酸沉淀；(4)采用DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶吸附；(5)过滤DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶；(6)S/D病毒灭活；(7)EMD
‑
TMAE阴离子交换层析；(8)采用权利要求1或2所述超滤稀释液进行超滤。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤(1)将从人血浆中分离出的冷沉淀溶解包括以下步骤：从人血浆中分离出的冷沉淀为起始原料，用含有肝素钠的水溶解，控制温度升温，在升至20
‑
25℃时停止升温，并保持停止时的温度恒温搅拌，在恒温搅拌时采用梯度降速的搅拌方式；梯度降速的搅拌方式包括以下步骤：在20
‑
25℃温度下使用搅拌速度70rpm搅拌20min，保持上一搅拌速度的温度，使用搅拌速度60rpm搅拌20min，继续保持上一搅拌速度的温度，使用搅拌速度50rpm搅拌20min。6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤(2)调节pH包括以下步骤：使用预冷到0
‑
7℃的冰醋酸溶液调节pH值至6.5
‑
7.5，加入速度控制在60
‑
150mL/min；调节pH完成后继续搅拌反应30min。7.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤(4)采用DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶吸附包括以下步骤：将步骤(3)酸沉淀过程离心后收集到的上清液，控制温度在10.0℃
‑
17.0℃，用预冷到0
‑
7℃的氢氧化钠溶液，调节pH值到6.80
‑
7.20，氢氧化钠溶液的加入速度为60
‑
150mL/min，调节pH完成后继续搅拌反应10min，搅拌速度为40
‑
150rpm；然后向药液加入溶胀、平衡后的DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶，每1Kg冷沉淀重量添加1g
‑
2.5g的DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶干粉；DEAE Sephadex
TM A
‑
50凝胶加入到药液中以后，充分搅拌30
‑
60min，搅拌速度为40
‑
60rpm。8.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤(7)EMD
‑
TMAE阴离子交换层析的方法包括以下步骤：先将EMD
‑
TMAE阴离子交换层析柱，清洗层析柱，再在流速2
‑
4L/min下使用5
‑
9倍柱体积平衡液平衡层析柱，平衡液包括10mmol/L枸橼酸钠、120
‑
150mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莉，亓利思，闫磊，孙婷，谢松平，程海波，
申请(专利权)人：哈尔滨派斯菲科生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：