神经递质类物质检测方法技术

本申请提供了一种神经递质类物质检测方法，以血液和尿液为检测对象，采用超高效液相色谱串联质谱法对其中的神经递质类物质进行超高效液相色谱串联质谱检测。本申请为全面检测患者的代谢通路提供了一种神经递质类物质检测方法，有利于临床全面有效解读患者病理原因；本申请通过超高效液相色谱串联质谱法对其中的神经递质类物质进行检测，检测方法简单，对检测仪器要求不高、前处理操作简单，耗时短，适用于大批量样本的处理。适用于大批量样本的处理。

【技术实现步骤摘要】
神经递质类物质检测方法


[0001]本申请涉及神经递质类物质检测
，特别涉及神经递质类物质检测方法。

技术介绍

[0002]现有技术中关于神经递质类物质检测的过程主要缺点在于：一、这类物质在血浆中含量低，对检测方法及仪器要求较高；二、这类物质常用衍生化方法进行前处理，操作复杂，耗时较长，不适合大批量样本的处理；三、现有的大部分仅仅检测儿茶酚胺类物质，基本代谢通路没有检测全面，不利于临床的解读；四、神经递质存在血浆和尿液中，2者都进行检测才能更好反应人体内神经递质的水平。

技术实现思路

[0003]本申请实施例提供一种神经递质类物质检测方法，以解决现有神经递质类物质检测存在对方法和仪器要求较高、前处理操作复杂、耗时较长、不适合大批量样本的处理、基本代谢通路没有检测全面，不利于临床解读的技术问题。
[0004]本专利技术提供了一种神经递质类物质检测方法，以血液和尿液为检测对象，采用超高效液相色谱串联质谱对其中的神经递质类物质进行检测。
[0005]一些实施例中，为了有效检测血液和尿液中的神经递质类物质，将两者分别进行超高效液相色谱串联质谱检测，为了有效分离检测出血液中的各种神经递质类物质，采用第一、二、三种不同的超高效液相色谱串联质谱法对血液中的第一、二、三组神经递质类物质进行检测；为了有效分离检测出尿液中的各种神经递质类物质，采用第四、五两种不同的超高效液相色谱串联质谱法对尿液中的第四、五组神经递质类物质进行检测；
[0006]其中，第一组神经递质类物质包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3
‑
甲氧酪胺、多巴胺 d4、去甲肾上腺素
‑
d6和甲氧基去甲肾上腺素
‑
d3，第二组神经递质类物质包括酪氨酸、色氨酸和色氨酸
‑
d5，第三组神经递质类物质包括 5
‑
羟色胺和5
‑
羟色胺
‑
d4，第四组神经递质类物质包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3
‑ꢀ
甲氧酪胺、多巴胺d4、去甲肾上腺素
‑
d6和甲氧基去甲肾上腺素
‑
d3，第五组神经递质类物质包括高香草酸、香草扁桃酸、5
‑
羟基吲哚乙酸和5
‑
羟基吲哚乙酸
‑
d2。
[0007]一些实施例中，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为甲酸和甲醇的混合溶液，所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈，所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈，所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为甲酸和甲醇的混合溶液，所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈。
[0008]一些实施例中，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸
‑
甲醇的混合溶液；
[0009]所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液；
[0010]所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液；
[0011]所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸
‑
甲醇混合溶液；
[0012]所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液。一些实施例中，所述第一、二、三、四、五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.2ml/min
‑
0.5ml/min。
[0013]一些实施例中，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.4mL/min；
[0014]所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.3mL/min；
[0015]所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.3mL/min；
[0016]所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.4mL/min；
[0017]所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.4mL/min。
[0018]一些实施例中，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱为Shim
‑
packVeloxPFPP色谱柱；
[0019]所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱为Shim
‑
packScepterPhenyl
‑
120色谱柱；
[0020]所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱为Shim
‑
packScepterPhenyl
‑
120色谱柱；
[0021]所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱为Shim
‑
packScepterPhenyl
‑
120色谱柱；
[0022]所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱为Shim
‑
packGISTC18色谱柱。
[0023]一些实施例中，所述第一、二、三、四、五种超高效液相色谱串联质谱法中，色谱柱柱温为40℃。
[0024]一些实施例中，将尿液和血液分别进行蛋白沉淀或者固相萃取进行前处理后进行超高效液相色谱串联质谱检测。
[0025]一些实施例中，为了实现对血液和尿液中的各种神经递质类物质有效分离检测，将血液采用不同的前处理方法进行处理，将尿液采用不同的前处理方法进行处理。
[0026]一些实施例中，为了实现对血液和尿液中的各种神经递质类物质有效分离检测，将血液采用三种不同的方法进行前处理后分别对提取液中的第一组神经递质物质、第二组神经递质类物质和第三组神经递质类物质进行超高效液相色谱串联质谱检测；将尿液采用两种不同的方法进行前处理后分别对提取液中的第四组神经递质类物质和第五组神经递质类物质进行超高效液相色谱串联质谱检测。
[0027]在一实施例中，将待测血浆、包含5x10
‑8g/mL多巴胺D4、5x10
‑8g/mL去甲肾上腺素
‑
d6、5x10
‑9g/mL甲氧基去甲肾上腺素
‑
d3，的混合内标溶液以及50mmol/L的乙酸铵溶液，进行WCX固相萃取后对其中的第一组神经递质类物质进行检测；
[0028]在一实施例中，将待测血浆、包含1x10
‑5g/mL色氨酸
‑
d5内标溶液进行甲醇沉淀，离心后取上清液20μL，加入180μL包含0.1％甲酸水和0.1％甲酸
‑
甲醇的流动相，离心，取上清
液30μL对其中的第二组神经递质类物质进行检测；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种神经递质类物质检测方法，其特征在于，以血液和尿液为检测对象，采用超高效液相色谱串联质谱法对其中的神经递质类物质进行超高效液相色谱串联质谱检测。2.如权利要求1所述的神经递质类物质检测方法，其特征在于，采用第一、二、三种超高效液相色谱串联质谱法对血液中的第一、二、三组神经递质类物质进行检测；采用第四、五种超高效液相色谱串联质谱法对尿液中的第四、五组神经递质类物质进行检测；其中，第一组神经递质类物质包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3
‑
甲氧酪胺、多巴胺d4、去甲肾上腺素
‑
d6和甲氧基去甲肾上腺素
‑
d3，第二组神经递质类物质包括酪氨酸、色氨酸和色氨酸
‑
d5，第三组神经递质类物质包括5
‑
羟色胺和5
‑
羟色胺
‑
d4，第四组神经递质类物质包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3
‑
甲氧酪胺、多巴胺d4、去甲肾上腺素
‑
d6和甲氧基去甲肾上腺素
‑
d3，第五组神经递质类物质包括高香草酸、香草扁桃酸、5
‑
羟基吲哚乙酸和5
‑
羟基吲哚乙酸
‑
d2。3.如权利要求2所述的神经递质类物质检测方法，其特征在于，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为甲酸和甲醇的混合溶液；所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈；所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈；所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为甲酸和甲醇的混合溶液；所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为甲酸和水的混合溶液，B相为乙腈。4.如权利要求3所述的神经递质类物质检测方法，其特征在于，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸
‑
甲醇的混合溶液；所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液；所述第三种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％甲酸水溶液；所述第四种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％的甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸
‑
甲醇混合溶液；所述第五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相A相为0.1％的甲酸水溶液。5.如权利要求3所述的神经递质类物质检测方法，其特征在于，所述第一、二、三、四、五种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.2ml/min
‑
0.5ml/min。6.如权利要求5所述的神经递质类物质检测方法，其特征在于，所述第一种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.4mL/min；
所述第二种超高效液相色谱串联质谱法中，流动相流速为0.3mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勇，刘杨茜，
申请(专利权)人：康谱维武汉医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：