一种表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的DNA分子制造技术

本发明专利技术公开了一种表达水痘

【技术实现步骤摘要】
一种表达水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白的DNA分子


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种表达水痘
‑
带状疱疹病毒gE蛋白的DNA分子。

技术介绍

[0002]水痘
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带状疱疹病毒的唯一天然宿主是人类，仅有一个血清型，基因组有71个基因，编码60多不同蛋白。儿童时感染水痘
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带状疱疹病毒引起水痘，恢复后病毒潜伏在感染者体内；老年时病毒复发而引起带状疱疹，并常伴有严重的并发症。随着世界老龄化趋势加剧，带状疱疹预防已成为公共卫生关注的问题，研发针对中老年人带状疱疹预防的产品具有重要的社会及经济意义。
[0003]疫苗开发过程中，关键抗原的表达和制备是首要考虑因素，但水痘
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带状疱疹病毒关键抗原gE蛋白(glycoprotein E)天然信号肽不利于蛋白表达。因此，开发高表达水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白的稳转细胞株，是水痘
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带状疱疹病毒疫苗研发过程中亟需解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何制备水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白和/或如何提高水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白表达效率。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了DNA分子。所述DNA分子含有双信号肽的编码基因和水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白的编码基因。所述双信号肽可为由信号肽1和信号肽2连接而成的信号肽。
[0006]上文所述DNA分子可为表达盒。所述DNA分子具体可表达双信号肽和水痘
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带状疱疹病毒的gE蛋白。上文所述DNA分子中，所述双信号肽的编码基因位于所述水痘
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带状疱疹病毒抗原组分gE蛋白的编码基因的上游。
[0007]上文所述DNA分子中，所述双信号肽的排布方式可为下述任一种：
[0008]1)信号肽1
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信号肽2
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gE蛋白；
[0009]2)信号肽1
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信号肽2
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gE蛋白
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融合标签；
[0010]3)信号肽1
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信号肽2
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融合标签
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gE蛋白。
[0011]所述融合标签可为组氨酸标签。
[0012]上述DNA分子中，所述信号肽1可为抗体重链信号肽。所述信号肽2可为所述水痘
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带状疱疹病毒的gE蛋白的天然信号肽。所述信号肽1的羧基端与所述信号肽2的氨基端相连。所述信号肽1和/或信号肽2还可为抗体轻链、gE蛋白、人抑癌蛋白M(hOSM)、骨连蛋白(BM40)、人白蛋白(HSA)、分泌型荧光素酶(Gaussia Luc)、白介素2(IL
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2)和/或人胰岛素等信号肽。
[0013]上述水痘
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带状疱疹病毒gE蛋白可为Ellen株水痘
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带状疱疹病毒株gE蛋白，也可为Oka株、野生型、Dumas和/或VZV
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32等其他水痘
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带状疱疹病毒株gE蛋白。
[0014]上述DNA分子可含有调控序列。所述调控序列包括，但不限于，前导序列、多聚腺苷
酸化序列、前肽序列、启动子、信号序列和转录终止子。最低限度，调控序列要包括启动子以及转录和翻译的终止信号。为了导入载体的特定限制性酶位点以便将调控序列与编码蛋白质的核酸序列的编码区进行连接，可以提供带接头的调控序列。调控序列可以是合适的启动子序列，即可被表达核酸序列的宿主细胞识别的核酸序列。启动子序列含有介导蛋白质表达的转录调控序列。启动子可以是在所选宿主细胞中有转录活性的任何核酸序列，包括突变的、截短的和杂合的启动子，可以得自编码与宿主细胞同源或异源的胞外或胞内蛋白质的基因。调控序列还可以是合适的转录终止序列，即能被宿主细胞识别从而终止转录的一段序列。终止序列可操作连接在编码蛋白质的核酸序列的3
’
末端。在所选宿主细胞中可发挥功能的任何终止子都可以用于本专利技术。调控序列还可以是合适的前导序列，即对宿主细胞的翻译十分重要的mRNA非翻译区。前导序列可操作连接于编码蛋白质的核酸序列的5
’
末端。在所选宿主细胞中可发挥功能的任何前导序列均可用于本专利技术。调控序列还可以是信号肽编码区，该区编码一段连在蛋白质氨基端的氨基酸序列，能引导编码蛋白质进入细胞分泌途径。能引导表达后的蛋白质进入所用宿主细胞的分泌途径的信号肽编码区都可以用于本专利技术。添加能根据宿主细胞的生长情况来调节蛋白质表达的调控序列可能也是需要的。调控系统的例子是那些能对化学或物理刺激物(包括在有调控化合物的情况下)作出反应，从而开放或关闭基因表达的系统。调控序列的其他例子是那些能使基因扩增的调控序列。在这些例子中，应将编码蛋白质的核酸序列与调控序列可操作连接在一起。
[0015]上述DNA分子中，所述信号肽1的氨基酸序列可为SEQ ID No.2的第1
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19位。所述信号肽2的氨基酸序列可为SEQ ID No.1的第1
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30位。
[0016]上述DNA分子中，所述水痘
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带状疱疹病毒的gE蛋可白为下述任一种蛋白质：
[0017]A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.1的第31
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546位的蛋白质，
[0018]A2)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的第50
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565位的蛋白质，
[0019]A3)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.3的第50
‑
565位的蛋白质，
[0020]A4)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.4的第50
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563位的蛋白质，
[0021]A5)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.5的第50
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563位的蛋白质，
[0022]A6)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.6的第50
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563位的蛋白质，
[0023]A7)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.7的第50
‑
563位的蛋白质，
[0024]A8)在A1)、A2)、A3)、A4)、A5)、A6)或A7)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；
[0025]A9)将A1)
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A8)中任一所述蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由A1)或A2)或A3)或A4)或A5)或A6)或A7)或A8)衍生的或与A1)或A2)或A3)或A4)或A5)或A6)或A7)或A8)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质。
[0026]上述DNA分子中，所述gE蛋白的编码基因可为下述任一种：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子含有双信号肽的编码基因和水痘
‑
带状疱疹病毒gE蛋白的编码基因；所述双信号肽为由信号肽1和信号肽2连接而成的信号肽。2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述信号肽1为抗体重链信号肽，所述信号肽2为所述水痘
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带状疱疹病毒的gE蛋白的天然信号肽，所述信号肽1的羧基端与所述信号肽2的氨基端相连。3.根据权利要求2所述的DNA分子，其特征在于：所述信号肽1的氨基酸序列为SEQ ID No.2的第1
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19位；所述信号肽2的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第1
‑
30位。4.根据权利要求1
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3中任一权利要求所述的DNA分子，其特征在于：所述水痘
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带状疱疹病毒的gE蛋白为下述任一种蛋白质：A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.1的第31
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546位的蛋白质，A2)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的第50
‑
565位的蛋白质，A3)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.3的第50
‑
565位的蛋白质，A4)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.4的第50
‑
563位的蛋白质，A5)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.5的第50
‑
563位的蛋白质，A6)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.6的第50
‑
563位的蛋白质，A7)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.7的第50
‑
563位的蛋白质，A8)在A1)、A2)、A3)、A4)、A5)、A6)或A7)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；A9)将A1)
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A8)中任一所述蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由A1)或A2)或A3)或A4)或A5)或A6)或A7)或A8)衍生的或与A1)或A2)或A3)或A4)或A5)或A6)或A7)或A8)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质。5.根据权利要求1
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4中任一权利要求所述的DNA分子，其特征在于：所述gE蛋白的编码基因为下述任一种：B1)SEQ ID No.08的第91
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1638位核苷酸所示的DNA分子；B2)SEQ ID No.09第91
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1638位核苷酸所示的DNA分子；B3)SEQ ID No.10第148
‑
1695位核苷酸所示的DNA分子；B4)SEQ ID No.11第148
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1695位核苷酸所示的DNA分子；B5)SEQ ID No.12第148
‑
1695位核苷酸所示的DNA分子；B6)SEQ ID No.13第148
‑
1695位核苷酸所示的DNA分子；B7)SEQ ID No.14第148
‑
1689位核苷酸所示的DNA分子；B8)SEQ ID No.15第148
‑
1689位核苷酸所示的DNA分子；B9)SEQ ID No.16第148
‑
1689位核苷酸所示的DNA分子；B10)SEQ ID No.17第148
...

【专利技术属性】
技术研发人员：安文琪，张静静，王斌，邢体坤，宋路萍，杨振苹，
申请(专利权)人：河南晟明生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：