一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用技术

一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物，包括化合物Reflexanbene D（3,5

【技术实现步骤摘要】
一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及医药，特别是一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]山橿系樟科(Lauraceae)山胡椒属植物山橿(Lindera reflexa Hemsl.)的干燥根，在河南主要分布于大别山区，是民间用于治疗慢性胃炎、胃溃疡的常用药。山橿的化学成分主要包括挥发油类、生物碱类、黄酮类、二苯乙烯类等。银松素为山橿中含量较高的二苯乙烯类化合物之一，研究表明其有良好的抗炎和抗氧化活性。随着山橿化学成分研究的不断深入，如何从山橿中分离出更多新的化合物，扩大山橿的用药范围，明确山橿发挥药效的物质基础是本领域技术人员所关心的重要问题，而本专利技术首次从山橿中发现的Reflexanbene D(二苯乙烯类化合物3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(1”S3”S4”S)对薄荷醇基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene G(3,5
‑
二甲氧基
‑2‑
[(3”R4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene J(3,5
‑
二羟基
‑
2,6
‑
二
‑
[(3”R4”R3
”’
R4
”’
S)
‑
对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene H(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(3”S4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)和Reflexanbene K(3,5
‑
二甲氧基
‑
反式
‑
二苯乙烯)具有显著的抗炎作用，迄今为止未见有公开报道。

技术实现思路

[0003]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从山橿中制备新的化合物，并用于制备抗炎的新药物，解决山橿药用新用途的问题。
[0004]本专利技术解决的技术方案是，一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物，包括化合物Reflexanbene D(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(1”S3”S4”S)对薄荷醇基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene G(3,5
‑
二甲氧基
‑2‑
[(3”R4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene J(3,5
‑
二羟基
‑
2,6
‑
二
‑
[(3”R4”R3
”’
R4
”’
S)
‑
对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene H(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(3”S4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)和Reflexanbene K(3,5
‑
二甲氧基
‑
反式
‑
二苯乙烯)，分子结构式分别为：
[0005][0006]其制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)制备山橿总黄酮提取物：用乙醇对山橿进行提取，大孔吸附树脂湿法装柱，山橿乙醇提取物上样吸附，纯水冲洗除去杂质，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮；
[0008](2)硅胶色谱分离：称取纯化山橿总黄酮，用甲醇进行超声溶解，经硅胶柱色谱，用石油醚
‑
二氯甲烷
‑
甲醇体系进行洗脱，结合薄层色谱合并相同流份，得到7个组份Fr.1
‑
Fr.7；
[0009](3)定向分离目标化合物：用石油醚
‑
二氯甲烷体系对组份Fr.1和Fr.3进行硅胶柱层析，然后利用MCI中压制备柱和半制备液相进行分离纯化，减压回收溶剂，得到化合物Reflexanbene D(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(1”S3”S4”S)对薄荷醇基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene G(3,5
‑
二甲氧基
‑2‑
[(3”R4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene J(3,5
‑
二羟基
‑
2,6
‑
二
‑
[(3”R4”R3
”’
R4
”’
S)
‑
对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene H(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(3”S4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)和Reflexanbene K(3,5
‑
二甲氧基
‑
反式
‑
二苯乙烯)。
[0010]本专利技术方法制备的二苯乙烯类化合物Reflexanbene D、Reflexanbene G、Reflexanbene J、Reflexanbene H和Reflexanbene K在制备抗炎药物中的应用。
[0011]本专利技术提取分离过程简单，易于操作，可有效从山橿中提取具有抗炎作用的二苯
乙烯类化合物Reflexanbene D(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(1”S3”S4”S)对薄荷醇基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene G(3,5
‑
二甲氧基
‑2‑
[(3”R4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene J(3,5
‑
二羟基
‑
2,6
‑
二
‑
[(3”R4”R3
”’
R4
”’
S)
‑
对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)、Reflexanbene H(3,5
‑
二羟基
‑4‑
[(3”S4”R)对薄荷烯基]‑
反式
‑
二苯乙烯)和Reflexanbene K(3,5
‑
二甲氧基
‑
反式
‑
二苯乙烯)，具有显著的抗炎作用，可用于制备抗炎药物，开拓了山橿的药用新用途，具有实际的临床意义本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物，其特征在于，包括化合物Reflexanbene D、G、J、H和K，分子结构式分别为：2.权利要求1所述的从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备山橿提取物溶液：将山橿药材粉碎成粉，加入体积浓度为70％的乙醇超声提取3～5次，每次提取0.8～1.2h，每次加入70％乙醇的量为山橿重量的10～14倍；合并提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得到浓缩液，浓缩液加入水稀释成质量浓度0.04～0.06mg/mL的山橿提取物溶液，备用；(2)树脂处理及装柱：将大孔吸附树脂先用体积浓度95％乙醇浸泡10
‑
14h，用体积浓度95％乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，按树脂柱子直径与柱高比1:8的比例将大孔吸附树脂湿法装柱；(3)制备纯化山橿总黄酮：取步骤(1)制备的山橿提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的3～5倍，上样流速为0.5～1.5mL/min，上样完成后静置1.9～2.1h，用大孔吸附树脂3～5倍重量的纯水冲洗杂质，再用大孔吸附树脂3～5倍量的体积浓度70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮；(4)制备单体成分：将步骤(3)制备的山橿总黄酮500g用硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、20:1、10:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1的石油醚
‑
二氯甲烷混合溶剂进行梯度洗脱，
每个梯度所用的洗脱液体积依次为12.5L、16.8L、20L、28L、100L、70.8L、67.5L和65.5L，流速为18～22mL/min；然后再用体积比为100:0、100:1、50:1、10:1、5:1、3:1、1:1和0:100的二氯甲烷
‑
甲醇混合溶剂梯度洗脱，每个梯度所用的洗脱液体积依次为46L、48.5L、97L、70.5L、71L、69L、38L和49L，流速为90～110mL/min，每500mL为一流份，共收集1740个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分离，用GF254薄层板，分别以体积比1:3的石油醚
‑
二氯甲烷、体积比为50:1二氯甲烷
‑
甲醇和体积比为3:1的二氯甲烷
‑
甲醇作为展开剂，茴香醛
‑
浓硫酸作为显色剂，105℃加热3
‑
5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份190
‑
278、流份279
‑
324、流份325
‑
454、流份767
‑
810、流份811
‑
887、流份926
‑
983、流份1316
‑
1428，得到组分Fr.1
‑
Fr.7的7个组分；将组分Fr.1经半制备液相色谱，用体积比98:5的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速2～5mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为22.30min的峰，得化合物Reflexanbene G；将组分Fr.3经中压MCI柱色谱，依次用体积比为10:90、30:70、50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇
‑
水混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用4L洗脱液，流速12～17mL/min，每250mL为一流份，收集96个流份，各流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:3的石油醚
‑
二氯甲烷作为展开剂，用茴香醛
‑
浓硫酸溶液作为显色剂，105℃加热3
‑
5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份69
‑
80、流份85
‑
90、流份91
‑
96，得到3个亚组份Fr.3
‑
1、Fr.3
‑
2、Fr.3
‑
3，将亚组份Fr.3
‑
2经半制备液相色谱，用体积比98:2的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速2～5mL/min，检测波长297nm，分别收集洗脱时间为10.44min和20.00min的峰，得化合物Reflexanbene H和化合物Reflexanbene J；将亚组份Fr.3
‑
3经半制备液相色谱，用体积比95:5的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速2～5mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为17.90min的峰，得化合物Reflexanbene D；将亚组份Fr.3
‑
3经半制备液相色谱，用体积比85:15的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速2～5mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为15.37min的峰，得化合物Reflexanbene K。3.根据权利要求2所述的从山橿中分离得到的二苯乙烯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备山橿提取物溶液：将山橿药材粉碎成粉，加入体积浓度为70％的乙醇超声提取3次，每次提取1h，每次加入70％乙醇的量为山橿重量的12倍；合并提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得到浓缩液，浓缩液加入水稀释成质量浓度0.05mg/mL的山橿提取物溶液，备用；(2)树脂处理及装柱：将大孔吸附树脂先用体积浓度95％乙醇浸泡12h，用体积浓度95％乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，按树脂柱子直径与柱高比1:8的比例将大孔吸附树脂湿法装柱；(3)制备纯化山橿总黄酮：取步骤(1)制备的山橿提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4倍，上样流速为1mL/min，上样完成后静置2h，用大孔吸附树脂4倍重量的纯水冲洗杂质，再用大孔吸附树脂4倍量的体积浓度70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮；(4)制备单体成分：将步骤(3)制备的山橿总黄酮500g用硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、20:1、10:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1的石油醚
‑
二氯甲烷混合溶剂进行梯度洗脱，每个梯度所用的洗脱液体积依次为12.5L、16.8L、20L、28L、100L、70.8L、67.5L和65.5L，流
速为20mL/min；然后再用体积比为100:0、100:1、50:1、10:1、5:1、3:1、1:1和0:100的二氯甲烷
‑
甲醇混合溶剂梯度洗脱，每个梯度所用的洗脱液体积依次为46L、48.5L、97L、70.5L、71L、69L、38L和49L，流速为100mL/min，每500mL为一流份，共收集1740个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分离，用GF254薄层板，分别以体积比1:3的石油醚
‑
二氯甲烷、体积比为50:1二氯甲烷
‑
甲醇和体积比为3:1的二氯甲烷
‑
甲醇作为展开剂，茴香醛
‑
浓硫酸作为显色剂，105℃加热3
‑
5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份190
‑
278、流份279
‑
324、流份325
‑
454、流份767
‑
810、流份811
‑
887、流份926
‑
983、流份1316
‑
1428，得到组分Fr.1
‑
Fr.7的7个组分；将组分Fr.1经半制备液相色谱，用体积比98:5的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速3mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为22.30min的峰，得化合物Reflexanbene G；将组分Fr.3经中压MCI柱色谱，依次用体积比为10:90、30:70、50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇
‑
水混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用4L洗脱液，流速15mL/min，每250mL为一流份，收集96个流份，各流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:3的石油醚
‑
二氯甲烷作为展开剂，用茴香醛
‑
浓硫酸溶液作为显色剂，105℃加热3
‑
5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份69
‑
80、流份85
‑
90、流份91
‑
96，得到3个亚组份Fr.3
‑
1、Fr.3
‑
2、Fr.3
‑
3，将亚组份Fr.3
‑
2经半制备液相色谱，用体积比98:2的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速3mL/min，检测波长297nm，分别收集洗脱时间为10.44min和20.00min的峰，得化合物Reflexanbene H和化合物Reflexanbene J；将亚组份Fr.3
‑
3经半制备液相色谱，用体积比95:5的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速3mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为17.90min的峰，得化合物Reflexanbene D；将亚组份Fr.3
‑
3经半制备液相色谱，用体积比85:15的甲醇
‑
水作为洗脱液进行洗脱，流速3mL/min，检测波长297nm，收集洗脱时间为15.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈随清，付宇航，孙孝亚，段懿哲，侯亚迪，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：