用于DNA分离的方法和试剂盒技术

用于从液体身体样品中分离无细胞DNA的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供液体身体样品；b)向所述样品中加入：能够结合DNA的固相；包含去污剂和离液剂的结合缓冲液；和2

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于DNA分离的方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及用于分离存在于液体身体样品中的无细胞DNA (cfDNA)的改进的方法和系统。更具体地说，本专利技术涉及使用尺寸选择从血浆中分离cfDNA的方法和系统，以促进小片段cfDNA的富集和回收，同时使高分子量、较大的基因组DNA (gDNA)片段的回收率最小化。

技术介绍

[0002]1948年由Mandel和Metais首次在人循环系统中发现片段化的cfDNA分子。cfDNA也称为循环游离DNA或循环无细胞DNA，是由细胞释放到血流中的DNA片段。已经提出了几种释放血液中cfDNA分子的机制，包括坏死、凋亡、吞噬作用、主动细胞分泌、外来体释放、细胞焦亡、有丝分裂崩溃(mitotic catastrophe)和自噬，导致循环中存在具有不同物理性质的cfDNA群体。在健康个体中，cfDNA片段在100
‑
250 bp之间变化，其中最普遍的尺寸为166bp，其对应于与组蛋白核心结合的DNA分子的核小体复合物。cfDNA可以用于描述在血流中自由循环的各种形式的片段化的DNA，例如无细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于从液体身体样品中分离无细胞DNA的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供液体身体样品；b)向所述样品中加入：能够结合DNA的固相；包含去污剂和离液剂的结合缓冲液；和2
‑
丙醇，以形成其结合混合物；c)洗涤所述固相以去除未结合的物质；和d)洗脱结合的无细胞DNA，其中大部分洗脱的DNA < 400 bp。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是血浆、血清或尿液。3.根据权利要求2所述的方法，其中从在无细胞DNA稳定化管中收集的全血获得血浆。4. 根据权利要求1、2或3所述的方法，其中所述去污剂是非离子表面活性剂，例如具有亲水性聚环氧乙烷链和芳族烃亲脂或疏水性基团(C
14
H
22
O(C2H4O)
n
，其中n=9
‑
10)的表面活性剂例如Triton X
‑
100，或非离子表面活性剂例如Triton X
‑
114、Nonidet P
‑
40或Igepal CA
‑
630。5.根据上述权利要求中一项或多项所述的方法，其中所述离液剂是硫氰酸胍或高氯酸钠。6. 根据上述权利要求中一项或多项所述的方法，其中所述样品是血浆，所述去污剂是非离子表面活性剂例如Triton X
‑
100，并且所述离液剂是硫氰酸胍。7. 根据上述权利要求2
‑
6中一项或多项所述的方法，其中在所述结合混合物中血浆为约25
‑
40% v/v。8. 根据上述权利要求4
‑
7中一项或多项所述的方法，其中在所述结合混合物中非离子表面活性剂或Triton X
‑
100为约20
‑
30% w/v。9. 根据上述权利要求5
‑
8中一项或多项所述的方法，其中在所述结合混合物中硫氰酸胍为约1.5
‑
2.5 M。10. 根据上述权利要求中一项或多项所述的方法，其中在所述结合混合物中2
‑
丙醇为约15
‑
25% v/v。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述固相包含磁性微珠，优选二氧化硅包被的磁珠。12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述磁性微珠以20
‑
200 mg/ml在水性悬浮液中配制。13.一种用于从液体身体样品中尺寸选择性分离无细胞DNA的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供液体身体样品；b)向所述样品中加入：
‑
能够结合DNA的二氧化硅包被的磁性微珠的水性悬浮液；
‑
包含硫氰酸胍和非离子表面活性剂例如Triton X
‑
100的结合缓冲液；和
‑2‑
丙醇，
以形成其结合混合物，使得所述结合混合物包含约20
‑
30% w/v的所述非离子表面活性剂例如Triton X
‑
100、约1.5
‑
2.5 M的硫氰酸胍和约15
‑
25% v/v的2
‑
丙醇；c)在室温下孵育所述结合混合物约10
‑
30分钟以促进无细胞DNA与所述磁性微珠结合；d)用一种或多种包含乙醇的洗涤缓冲液洗涤所述磁性微珠；e)向步骤d)的经洗涤的磁珠中加入洗脱缓冲液，以释放溶液中与所述磁微珠结合的所述无细胞DNA；和f)任选地分析或定量在步骤e)中获得的所述无细胞DNA。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述样品是从在无细胞DNA稳定化管中...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：环球生命科学解决方案德国有限公司，
类型：发明
国别省市：