一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、试剂盒与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种诊断烟雾病的分子标志物，所述分子标志物为外周血外泌体内miR

【技术实现步骤摘要】
一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、试剂盒与应用


[0001]本专利技术涉及医学检测
，具体涉及一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、试剂盒与应用。

技术介绍

[0002]烟雾病是一种病因不明的、以双侧颈内动脉末端及大脑前动脉、大脑中动脉起始部慢性进行性狭窄或闭塞为特征，并继发颅底异常血管网形成的一种脑血管疾病，由于这种颅底异常血管网在脑血管造影图像上形似“烟雾”，故称为“烟雾病”。烟雾病发病隐匿，早期症状以短暂性脑缺血发作为主，后期以脑梗死或脑出血为主，致残率及致死率较高，目前对该病尚无早期的筛查手段，因此，明确病因，早期诊断尤为重要。
[0003]脑血管造影被认为是目前诊断烟雾病的金标准，但其成本高昂且具有创伤性，难以满足临床早期筛查需要。因此，开发一种特异性强、灵敏度高的诊断烟雾病的分子标志物对于烟雾病的治疗和早期发现具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强的诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、试剂盒与应用。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种诊断烟雾病的分子标志物，所述分子标志物为外周血外泌体内miR
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3p，所述的miR
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3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]本专利技术还提供了上述分子标志物的引物对，所述分子标志物的引物对为扩增miR
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3p的上游引物如SEQ ID NO:2所示和扩增miR
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3p的下游引物如SEQ ID NO:3所示。
[0008]本专利技术还提供了上述分子标志物或上述的引物对在制备诊断烟雾病产品中的应用。
[0009]优选地，所述产品包括试剂盒、试剂、芯片或试纸条。
[0010]优选地，当外周血外泌体内miR
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3p相对表达含量小于1.81时，表明未患烟雾病，当外周血外泌体内miR
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3p表达含量大于或等于1.81时，表明患有烟雾病。
[0011]本专利技术还提供了一种用于诊断烟雾病的试剂盒，包括上述引物对。
[0012]优选地，所述试剂盒还包括外周血外泌体提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0014]本专利技术提供了一种诊断烟雾病的分子标志物，所述分子标志物为外周血外泌体内miR
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3p，本专利技术选择外泌体内miR
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3p作为烟雾病新型血液分子标志物具有如下优点：1)烟雾病患者外周血中外泌体的数量显著高于健康人，且外泌体不含有血液中的高丰度蛋白，对检测干扰小，具有更高的敏感性。2)外泌体以脂质双分子层结构包裹miRNAs，使外泌体转运的miRNAs免于RNA酶的降解，提高外泌体在血液中的稳定性。3)血液标本易获
取，易于检测和标准化试剂盒生产。4)本专利技术外周血外泌体内miR
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3p在诊断烟雾病时特异性强、灵敏度高。
附图说明
[0015]图1中A:电镜观察外泌体形态；B:外泌体粒径大小；C:Western Blot检测外泌体特征性抗原CD9和TSG101的表达和阴性抗原Calnexin的表达；D:烟雾病(MMD)组和健康对照(Health)组外周血外泌体浓度分析；
[0016]图2为烟雾病患者组与健康对照组外周血外泌体内和外周血血浆内miR
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3p PCR鉴定结果图；
[0017]图3为miR
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3p的分子ROC曲线图。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供了一种诊断烟雾病的分子标志物，所述分子标志物为外周血外泌体内miR
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3p，所述的miR
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3p的核苷酸序列为CTAGACTGAAGCTCCTTGAGG(如SEQ ID NO:1所示)。
[0019]在本专利技术中，所述外周血外泌体提取方式优选地包括超速离心法、试剂盒提取法。
[0020]本专利技术还提供了一种上述分子标记物的引物对，所述引物对为扩增miR
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3p的上游引物为5
’‑
GGGCAACCTAGACTGAAGCTC
‑3’
(如SEQ ID NO:2所示)和扩增miR
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3p的下游引物5
’‑
GTGCGTGTCGTGGAGTCG
‑3’
(如SEQ ID NO:3所示)。
[0021]本专利技术还提供了上述分子标志物或上述的引物对在制备诊断烟雾病产品中的应用。
[0022]在本专利技术中，所述产品优选为包括试剂盒、试剂、芯片或试纸条。
[0023]在本专利技术中，判断是否患有烟雾病以样本中外周血外泌体内miR
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3p相对表达含量作为判断标准，以miR
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425
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5p为内参，当外周血外泌体内miR
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3p相对表达含量小于1.81时，表明未患烟雾病，当外周血外泌体内miR
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3p相对表达含量大于或等于1.81时表明患有烟雾病。在本专利技术中，所述试剂盒还优选地包括外周血外泌体提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂。
[0024]下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]以下实施例中涉及的烟雾病患者及健康患者的相关实验研究均征得济宁医学院附属医院伦理委员会批准，并经患者及家属同意，签署知情同意书。
[0026]以下实施例中的烟雾病入选标准：
①
所有患者均经脑血管造影检查确诊为烟雾病；
②
年龄小于60周岁；
③
无脑动脉硬化等合并疾病，排除严重心肺等其他系统疾病。
[0027]实施例1
[0028]建立临床血液标本及外周血外泌体实验数据库
[0029]选取烟雾病患者共20例入组研究，同时收集挑选与烟雾病患者年龄、入院时间、体重等身体状况相似的健康对照组10例，收本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诊断烟雾病的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为外周血外泌体内miR
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3p，所述的miR
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3p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述分子标志物的引物对，其特征在于，所述引物对为扩增miR
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3p的上游引物如SEQ ID NO:2所示和扩增miR
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3p的下游引物如SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求1所述的分子标志物或权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳峰，刘吉兰，王孟杰，张斌，
申请(专利权)人：济宁医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：