可载药寡肽及其可溶性分层微针的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种可载药寡肽及其可溶性分层微针的制备方法和应用，所述携载卡托普利寡肽的制备方法：(1)连接保护氨基，(2)连接小分子，(3)携载药物，(4)切肽反应和纯化；本发明专利技术实现了一步法合成寡肽载药策略，缩短了分步合成的流程，减少了中间产物的生成以及物料的使用，对抑制缩合反应中保护氨基酸的消旋提供了一种通行的解决方案。本发明专利技术的活化和缩合反应都在同一个反应器内连续进行，无需将保护氨基酸在活化器中低温活化再转移至缩合反应器进行缩合反应。而且本发明专利技术将携载卡托普利的寡肽装载在分层微针中，通过体内存在的脂肪酶将药物从寡肽上水解下来实现了持续释放的目的，延长了药物的作用时间同时缓解了口服药物的首过效应。过效应。

【技术实现步骤摘要】
可载药寡肽及其可溶性分层微针的制备方法和应用


[0001]本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及一种可载药寡肽及其可溶性分层微针的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]高血压是心脑血管疾病的重要病因及危险因素，会影响心、脑、肾的功能，能显著增加卒中、心衰、终末期肾病的发病风险。目前药物治疗是治疗高血压的主要方法，其中卡托普利(Cap)为一种常用的降压药物。卡托普利为竞争性血管紧张素转换酶抑制剂，使血管紧张素Ⅰ不能转化为血管紧张素Ⅱ，从而降低外周阻力，并通过抑制醛固酮分泌，减少水钠潴留。但几乎所有降压药为短效药物，需要每天不间断口服药物来控制血压，这样就导致患者频繁用药，并且口服药物使得生物利用度相对较低，目前有团队报道将药物与寡肽通过化学键键合能够实现药物的缓释，延长药效。
[0003]寡肽是肽类的一种,由2
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10个氨基酸组成,比蛋白质、多肽和氨基酸更容易被人体吸收,且具有多种生理活性,是生物技术新药的潜力股。寡肽的化学合成目前主要有液相合成和固相合成两种方法。液相合成的优点是每步中间产物的合成可以直接进行过程控制；缺点是工艺复杂，占用较多工时与人力，需要较多设备胡场地；固相合成法工艺简单，占用工时与人力较少，物料转移较少而节省设备与场地；但是每步中间产物不可纯化，必须优化各步反应条件使得转化率接近100％，而且尽可能避免副反应的发生。
[0004]尽管目前市面上有多种降血压药物，但所有药物均为口服使用，一旦口服使用就不可避免的存在“首过效应”，且所有降压药均为短效药物，需要每天不间断口服药物来控制血压，这样就导致患者频繁用药并且口服药物生物利用度相对较低。经皮药物递送系统是一种非侵入性和无痛给药系统，目前作为一种安全有效的给药方式被广泛应用于临床。微针是经皮药物递送系统的一种，由一系列微米的微型针头组成，将其施于皮肤时，微针支撑膜上的微米级针头会刺穿角质层并进入真皮层上层，从而避免与位于真皮层下层密布的血管和神经纤维接触。而现有技术中，可溶性微针在使用过程中存在药物利用度低、背衬层吸附药物、给药剂量不明确等。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种可载药寡肽的制备方法，本专利技术采用一步法固相合成寡肽，通过一步法将小分子键合到生物相容性很好的寡肽，改进了以往分布键合的技术路线，不需要在寡肽和小分子间添加连接体，减少化学试剂污染同时也减少原料的损失。
[0006]本专利技术合成的可载药寡肽的所有缩合反应在同一个反应器内依次连续完成，无需在活化器中低温活化保护氨基酸再转移至缩合反应器中，在进行任一保护氨基酸的缩合反应时，保护氨基酸、缩合剂先溶解在有机溶剂中，然后与树脂混合并利用氮气流和树脂充分均匀接触，缩合反应温度控制在室温。
[0007]本专利技术还提供一种可载药寡肽的可溶性分层微针的制备方法及其应用。
[0008]技术方案：为了实现上述目的，本专利技术所述一种可载药寡肽的制备方法，具体包括如下步骤：
[0009](1)连接保护氨基：在树脂上通过缩合反应依次连接第一至第n个保护氨基，n是大于等于2、小于等于10的自然数；
[0010](2)连接小分子：对第n个氨基酸末端进行脱保护基反应，加入有机分子进行缩合反应；
[0011](3)携载药物：步骤(2)缩合反应后，对整个寡肽侧链上的第一至第n个任一一个或者多个氨基酸残基进行脱保护基反应，加入药物和缩合剂，得到含有保护基团的携载药物的寡肽树脂；
[0012](4)切肽反应和纯化：步骤(3)的产物中加入切肽试剂进行切肽反应，震荡抽滤后，旋蒸浓缩切肽液，沉析后收集固体，洗涤，真空干燥过夜获得携载卡托普利的寡肽粗品；将粗品洗脱，收集，经减压旋蒸，最后经冷冻干燥得纯的携载卡托普利的寡肽。
[0013]其中，步骤(1)所述树脂为经二氯甲烷溶胀处理的Wang树脂，保护氨基酸是Fmoc
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Met
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OH、Fomc
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Lys(Boc)
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OH、Fomc
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Phe
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OH、Fomc
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Tyr(tBu)
‑
OH、Fomc
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Trp(Boc)
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OH、Fomc
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Thr(tBu)
‑
OH、Fomc
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Ser(tBu)
‑
OH、Fomc
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His(Thr)
‑
OH、Fomc
‑
Cys(Thr)
‑
OH、Fomc
‑
Asp(OtBu)
‑
OH、Fomc
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Arg(pbf)
‑
OH、Fomc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fomc
‑
Asn(Thr)
‑
OH、Fomc
‑
Asn
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OH、Fomc
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Ala
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OH、Fomc
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val
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OH中的任一一种，整个氨基酸序列里要包含至少一种Fomc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH或Fomc
‑
Ser(tBu)
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OH，这两个氨基酸连接在第几个保护氨基酸，连接药物时就对第几个氨基酸进行脱保护和药物进行进行反应。
[0014]寡肽序列可以包含x(1≤x≤n)个Fomc
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Tyr(tBu)
‑
OH或Fomc
‑
Ser(tBu)
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OH，就可以连接x个带羧基的药物，该药物可以是同一种带羧基的药物，也可以是不同带羧基的药物。优势在于，如果连接x个带羧基的同一种药物就可以实现保护药物的同时增大药量，进一步延长药效；如果连接x个带羧基的不同种药物不仅可以实现保护药物，还可以实现不同药物的联合治疗；药物可以选择任何种类带羧基的药物实现不同疾病模型的治疗。
[0015]其中，步骤(2)所述有机分子为萘乙酸。
[0016]其中，步骤(3)所述药物为带羧基的药物，其加入种类为大于等于1，小于等于n的自然数。
[0017]其中，步骤(1)
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(3)中缩合反应的缩合剂为HOBt和液体缩合剂DIC，有机溶剂为DMF，助缩合剂是DMAP，缩合反应的温度为室温，时间为4
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6h。
[0018]其中，步骤(3)中所述药物为携带羧基的药物。
[0019]其中，步骤(4)中切肽试剂为三氟乙酸、茴香硫醚、β
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巯基乙醇、苯酚和水，其体积比为80～90：1～6：1～3：1～3：1～3。
[0020]其中，纯化的色谱条件为0.1％TFA/水(V/V)：0.1％TFA/ACN(V/V)为1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可载药寡肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)连接保护氨基：在树脂上通过缩合反应依次连接第一至第n个保护氨基酸，n是大于等于2、小于等于10的自然数；(2)连接小分子：对第n个氨基酸末端进行脱保护基反应，加入有机分子进行缩合反应；(3)携载药物：步骤(2)缩合反应后，对整个寡肽侧链上的第一至第n个任一一个或者多个氨基酸残基进行脱保护基反应，加入药物和缩合剂，得到含有保护基团的携载药物的寡肽树脂；(4)切肽反应和纯化：步骤(3)的产物中加入切肽试剂进行切肽反应，震荡抽滤后，旋蒸浓缩切肽液，沉析后收集固体，洗涤，真空干燥过夜获得载药的寡肽粗品；将粗品洗脱，收集，经减压旋蒸，最后经冷冻干燥得纯的载药寡肽。2.根据权利要求1所述的可载药寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述树脂为经二氯甲烷溶胀处理的Wang树脂，保护氨基酸是Fmoc
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Met
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OH、Fomc
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Lys(Boc)
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OH、Fomc
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Phe
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OH、Fomc
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Tyr(tBu)
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OH、Fomc
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Trp(Boc)
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OH、Fomc
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Thr(tBu)
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OH、Fomc
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Ser(tBu)
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OH、Fomc
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His(Thr)
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OH、Fomc
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Cys(Thr)
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OH、Fomc
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Asp(OtBu)
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OH、Fomc
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Arg(pbf)
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OH、Fomc
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Glu(OtBu)
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OH、F...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠艳敏，戴建君，张士薄，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：