一株产DHA的裂壶藻GT-D1及其应用、富含DHA油脂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，特别涉及一株产DHA的裂壶藻GT

【技术实现步骤摘要】
一株产DHA的裂壶藻GT
‑
D1及其应用、富含DHA油脂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一株产DHA的裂壶藻GT
‑
D1及其 应用、富含DHA油脂及其制备方法。

技术介绍

[0002]二十二碳六烯酸(22:6n
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3,docosahexaenoic acid,DHA)是一种重要的 ω
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3系列多不饱和脂肪酸(ω
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3polyunsaturated fatty acids)，其既能够 促进婴幼儿智力和视力发育，又具有预防老年人心血管疾病、抗癌、抗炎、 增强免疫力等功效。
[0003]传统的提取多不饱和脂肪酸的方法是从深海鱼油获取，但随着环境污染 以及海洋渔业资源的逐渐匮乏，从深海鱼中提取不饱和脂肪酸显露出存诸多 问题，例如品质不稳定、外源性污染、气味不良、纯化成本高等，鱼油中含 有的EPA和胆固醇也使其不适于添加入孕婴食品中。
[0004]裂殖壶菌(Schizochytrium)是目前工业化生产DHA的理想菌种之一，其 属于破囊壶菌科的一类海洋微藻，通过高密度发酵培养，其体内可积累大量 脂肪，且70％以甘油三酯形式存在，其中DHA可以占到总脂肪酸的45％～ 55％。如公告号为CN105018539B(公告日为2019年2月12日)的专利文 件公开了一种培养裂殖壶菌高产DHA的方法，具体将通过药瓶培养达到细胞 干重为18～22g/L裂殖壶菌种子液接种到种子罐，培养至转接水平后，再 接种到发酵罐中，采用前期高温22～33℃进行高密度培养，后期进行低温 18～22℃胁迫的方式进行诱导培养110～130小时，期间通过流加葡糖糖溶 液、氮源溶液和碱溶液维持发酵过程中葡萄糖、总氮含量保持一定浓度和pH在5.5～6.5区间。该方法得到的发酵液中细胞干重达到120～150g/L， DHA达到40～50g/L。
[0005]又如论文《高产DHA裂壶藻突变株的选育与发酵工艺研究》(发表时间 为2016年5月1日)提到的其裂壶藻ATCC20888的摇瓶产DHA的最佳发酵 条件为选择接种量为10.5％，温度为26.5℃，初始pH为6.5，在此培养条 件下，裂壶藻DHA产量平均达6.10g/L。
[0006]但上述用于生产DHA的裂壶藻(又称裂殖壶菌)的发酵工艺中，其发酵 产DHA温度普遍比较低(一般25℃左右)，这导致在发酵时需要大量的水 来冷却发酵液，产生较高的冷却成本，因此，有待进一步改进。

技术实现思路

[0007]为解决上述现有技术中生产DHA的裂壶藻(又称裂殖壶菌)的发酵工艺 中存在发酵温度较低的问题，本专利技术提供一种裂壶藻GT
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D1，在30℃下可以 实现DHA的大量产生与富集，提高发酵了温度，降低了发酵过程的冷却成本。
[0008]本专利技术提供的裂壶藻GT
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D1是从广东海岸潮间带积水样品中的分离筛选 得到的，并证明其在30℃下可以实现DHA的大量产生与富集；该菌株经分类 学研究和分子生物学研究鉴定为裂壶藻(Schizochytrium limacinum)，保藏编 号为：CCTCC NO:M20211573，已于
2021年12月08日在中国典型培养物保藏 中心保藏，保藏地址位于中国.武汉.武汉大学。
[0009]本专利技术还提供如上所述的裂壶藻GT
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D1在生产DHA中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种发酵生产富含DHA油脂的方法，利用如上所述的裂壶 藻GT
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D1接种至发酵培养基中，经发酵培养制得富含DHA油脂。
[0011]优选地，所述裂壶藻GT
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D1先接种于种子培养基中培养以获得种子液， 接着再将所述种子液转接于所述发酵培养基中进行发酵培养,发酵结束后通 过离心收集发酵液中的菌体，并从中提取粗油即得富含DHA的油脂。
[0012]在一实施例中，所述发酵培养的条件包括种子浓度为0.8～1.2cfu/mL、 温度为30～35℃、转速为100～300rpm、通气量为2～5vvm以及发酵时间 为90～100h。
[0013]在一实施例中，种子培养的条件包括温度为30～35℃、转速为100～300 rpm培养时间为20～30h。
[0014]在一实施例中，所述种子培养基的组成为碳源25～50g/L、氮源5～20 g/L、无机盐20～40g/L和维生素0.01～0.04g/L。
[0015]在一实施例中，所述发酵培养基的组成为碳源80～120g/L、氮源5～20 g/L、无机盐20～60g/L和维生素0.01～0.04g/L。
[0016]在一实施例中，所述碳源为葡萄糖、果葡糖浆、甘油、蔗糖、麦芽糖中 的一种或多种，所述氮源为谷氨酸钠、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、蛋白粉中 的一种或多种，所述无机盐为钙盐、磷酸盐、钾盐、钠盐、镁盐、铵盐中的 一种或多种，所述维生素为维生素B1、维生素B12、维生素B6中的一种或多 种。
[0017]在一实施例中，提取粗油的方法为对通过离心收集发酵液中的菌体进行 破壁、萃取即得到富含DHA的油脂。
[0018]本专利技术还提供一种富含DHA的油脂，由如上任意所述的利用裂壶藻GT
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D1 发酵生产富含DHA油脂的方法制得。
[0019]在一实施例中，所述富含DHA的油脂中DHA含量为55％～62％，棕榈酸含 量为14％～25％，DPA含量为7％～17％。
[0020]基于上述，与现有技术相比，本专利技术提供的一株裂壶藻GT
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D1,在30℃下 可以实现DHA的大量产生与富集，提高发酵了温度，降低了发酵过程的冷却 成本。
[0021]本专利技术的其它特征和有益效果将在随后的说明书中阐述，并且，部分地 从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的目的和其 他有益效果可通过在说明书、权利要求书所记载的内容来实现和获得。
附图说明
[0022]图1为裂壶藻GT
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D1在种子培养基上培养后的菌落状态；
[0023]图2为图1中的菌落的局部放大图。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发 明实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；下面 所描述的本专利技术不同实施方式中所设计
的技术特征只要彼此之间未构成冲突 就可以相互结合；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出 创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]在本专利技术的描述中，需要说明的是，本专利技术所使用的所有术语(包括技 术术语和科学术语)具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的含 义相同的含义，不能理解为对本专利技术的限制；应进一步理解，本专利技术所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株产DHA的裂壶藻GT
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D1(Schizochytrium limacinum)，其特征在于：其保藏编号为CCTCC NO:M20211573。2.一种根据权利要求1所述的产DHA的裂壶藻GT
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D1在生产DHA中的应用。3.一种发酵生产富含DHA油脂的方法，其特征在于：利用权利要求1所述的产DHA的裂壶藻GT
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D1接种至发酵培养基中，经发酵培养制得富含DHA油脂。4.根据权利要求3所述的发酵生产富含DHA油脂的方法，其特征在于：所述裂壶藻GT
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D1先接种于种子培养基中培养以获得种子液，接着再将所述种子液转接于所述发酵培养基中进行发酵培养,发酵结束后通过离心收集发酵液中的菌体，并从中提取粗油即得富含DHA的油脂。5.根据权利要求3所述的发酵生产富含DHA油脂的方法，其特征在于：所述发酵培养的条件包括种子浓度为0.8～1.2cfu/mL、温度为30～35℃、转速为100～300rpm、通气量为2～5vvm以及发酵时间为90～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨成飞，韩江，薛勇，
申请(专利权)人：深圳古他生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：