用于实施免疫组库测序的组合物及试剂盒和测序方法技术

一种用于实施免疫组库测序的组合物，包括如SEQ ID NO:1所示逆转录引物，含有如SEQ ID NO:17所示序列的链置换引物，第一PCR引物对，用于装在Tn5转座酶的核酸：如SEQ ID NO:3所示接头Tn

【技术实现步骤摘要】
用于实施免疫组库测序的组合物及试剂盒和测序方法


[0001]本专利技术涉及一种用于测序的核酸组合物，特别涉及一种适应性免疫组测序的核酸组合物，以及测序试剂盒，和以短读长测序平台对全长适应性免疫组库进行测序的方法。

技术介绍

[0002]适应性免疫是机体针对特异性抗原刺激产生的免疫应答。其存在使机体无需每时每刻都保持消耗巨大的免疫应激状态。适应性免疫系统的多样性，也保证生物体能应对自然环境中复杂且多变的风险。在此过程中，T淋巴细胞和B淋巴细胞及其表面分子T细胞受体(TCR)，B细胞受体(BCR，BCR的分泌形式即为抗体。)是机体执行适应性免疫的分子基础。
[0003]检测TCR和BCR序列的适应性免疫受体库测序(Adaptive Immune Receptor Repertoire sequencing,AIRR
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seq)是研究免疫系统动力学的常用方法。目前已有众多的适应性免疫受体库测序方法被开发。适应性免疫组测序一般以免疫细胞中的RNA为建库材料。但实际操作中，通常首选获得的往往是外周血的全血。全血中含有大量的红细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于包括：逆转录引物，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；链置换引物，含有如SEQ ID NO:17所示核酸序列，以及随机序列标签；第一PCR引物对，上游引物如SEQ ID NO:2所示，下游引物选自于SEQ ID NO:6～SEQ ID NO:14之一种或几种；用于装在Tn5转座酶的核酸，如SEQ ID NO:3所示接头Tn
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A，以及SEQ ID NO:4所示的嵌合端；第二PCR引物对，含SEQ ID NO:15所示的上游引物，含SEQ ID NO:16下游引物。2.根据权利要求1所述的用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于所述的链置换引物3
’
末端含有3～5个修饰的G。3.根据权利要求1所述的用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于所述的acacgacgctcttccgatct
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nnnnnnnn
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rgrglnag，其中，nnnnnnnn表示随机序列标签。4.根据权利要求1所述的用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于第二PCR引物的上游引物为：aatgatacggcgaccaccgagatctacac
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8bp barcode
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tcgtcggcagcgtcagatgt。5.根据权利要求1所述的用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于第二PCR引物的下游引物为：caagcagaagacggcatacgagat
‑
8bp barcode
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gtctcgtgggctcggagatg。6.根据权利要求1所述的用于实施免疫组库测序的组合物，其特征在于还包括如SEQ ID NO:5所示的接头Tn
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B。7.根据权利要求1～6之一所述的用于实施免疫组库测序的组合物用于以短读长测序平台对全长适应性免疫组库进行测序。8.一种用于实施免疫组库测序的试剂盒，其特征在于包括权利要求1～6之一所述的组合物。9.根据权利要求8所述的用于实施免疫组库测序的试剂盒，其特征在于还包括说明书，其上记载的实施测序的方法包括：逆转录模板制备：收集待测试的外周血，加入终浓度1
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10倍体积的固定液，10～40℃孵育5～60分钟；接着加入1～20倍体积的裂解液，25～42℃孵育5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张天成，沈晓蓉，吴斌，施惠娟，
申请(专利权)人：上海市生物医药技术研究院，
类型：发明
国别省市：