一种同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法技术

本发明专利技术涉及一种同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法。本发明专利技术以水稻稻曲病菌产生的稻曲球整球或者稻曲病菌产生的稻曲球孢子粉为原料，以水作为提取溶剂，精细树脂进行柱层析分离，采用固相萃取技术做为富集净化方法，采用半制备型高效液相色谱进行制备收集，液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法


[0001]本专利技术涉及一种稻曲菌毒素的分离纯化制备方法，特别是涉及一种同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的工艺技术方法。

技术介绍

[0002]稻曲菌毒素(Ustiloxins)是由水稻稻曲病菌Ustilaginodea virens(Cooke) Takahashi产生的一种真菌毒素，是一系列的杂环肽类化合物，目前已分离出7 种结构相近的稻曲菌毒素，主要为稻曲菌毒素Ustiloxins A、Ustiloxins B、Ustiloxins C、Ustiloxins D、Ustiloxins E、Ustiloxins F和Ustiloxins G。其中稻曲菌毒素Ustiloxins E和Ustiloxins G含量极微，因此有关稻曲菌毒素的研究主要针对的是Ustiloxins A、Ustiloxins B、Ustiloxins C、Ustiloxins D和Ustiloxins F 5种稻曲菌毒素。自80年代以来，由稻曲菌引发的稻曲病已成为稻米生产中的主要病害，现已广泛分布于世界各水稻栽培区，其中较为严重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、以稻曲球整球或者稻曲球孢子粉为原料，以水作为提取溶液对原料进行匀浆破碎、震荡提取和离心分离，获得的上清液经过真空冷冻干燥得到稻曲菌毒素的粗提物；S2、采用精细树脂HP20SS作为柱层析的填料按湿法装柱方式填入耐有机中压层析柱中，将耐有机中压层析柱安装于高效液相色谱仪的色谱柱位置，采用高效液相色谱仪作为输液系统，对层析柱进行压柱；S3、将粗提物用水溶解后离心，获取的上清液过膜滤去杂质后，上层析柱进行柱层析分离；S4、采用高效液相色谱仪作为输液系统进行稻曲菌毒素目标化合物的洗脱，洗脱溶液为甲醇
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水体系，洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱中流动相比例由5％梯度升至25％，洗脱液使用全自动部分收集器逐管收集；S5、对收集的洗脱液中的稻曲菌毒素类型进行追踪鉴定，合并属于同一类稻曲菌毒素的洗脱液，再分别对合并后的5种洗脱液进行真空离心浓缩，得到Ustiloxin A、Ustiloxin B、Ustiloxin C、Ustiloxin D和Ustiloxin F 5种稻曲菌毒素的柱层析分离提取物；S6、对5种稻曲菌毒素的柱层析分离提取物通过固相萃取技术进行富集净化后再进一步纯化，最终得到Ustiloxin A、Ustiloxin B、Ustiloxin C、Ustiloxin D和Ustiloxin F 5种稻曲菌毒素的纯化物。2.如权利要求1所述的同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法，其特征在于，所述S6中，所述富集净化的方式是：将5种稻曲菌毒素的柱层析分离提取物各自通过固相萃取柱进行固相萃取，得Ustiloxin A、Ustiloxin B、Ustiloxin C、Ustiloxin D和Ustiloxin F 5种稻曲菌毒素的富集净化物。3.如权利要求1所述的同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法，其特征在于，所述S6中，所述纯化的方式是：将经过富集净化得到的5种稻曲菌毒素的富集净化物，分别经制备型或半制备型高效液相色谱进一步分离制备，液相色谱馏分收集器根据目标化合物保留时间设置自动收集，收集液经真空冷冻干燥，最终分别得到含量均大于90％的5种稻曲菌毒素单体化合物Ustiloxin A、Ustiloxin B、Ustiloxin C、Ustiloxin D和Ustiloxin F纯化物。4.根据权利要求1所述的同时分离纯化制备5种稻曲菌毒素的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙丽华，张国梅，李晗，刘珊珊，周许茗，陆明旸，唐靓，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：