一种紫贻贝原代血细胞的培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种紫贻贝原代血细胞的培养方法。所述方法包括以下步骤：(1)提取紫贻贝血淋巴；(2)将步骤(1)中得到的血淋巴分离为血细胞和血淋巴上清液；(3)将所述血淋巴上清液制备为血细胞培养液；(4)用步骤(3)制备的血细胞培养液将步骤(2)中得到的血细胞重悬，得到血细胞悬液；(5)利用血细胞悬液进行血细胞培养。应用本发明专利技术方法进行的紫贻贝原代血细胞培养，培养48h内的血细胞密度与初始密度持平，并且细胞状态稳定、形态良好，有效解决了血细胞凝结和形变的问题，为相关贝类免疫学与生态毒理学研究提供了细胞工具和支撑。工具和支撑。工具和支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种紫贻贝原代血细胞的培养方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种紫贻贝原代血细胞的培养方法。

技术介绍

[0002]近年来，近海生态环境的恶化，不仅对贝类食品安全构成了严重威胁，还通过影响免疫功能及基础代谢造成了贝类的生理过程紊乱，严重制约了贝类养殖产业的健康发展。贻贝在世界贝类养殖中具有重要地位， 2019年全球贻贝养殖产量20.69
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105t，占贝类养殖总产量的12％，其中紫贻贝(Mytilus edulis)产量约占贻贝总产量的58％。更重要的是，贻贝为营固着的滤食性生物，对环境污染的规避能力弱、蓄积能力强，加之其广泛的地理分布，因此常被作为灵敏指示近海环境变化的岗哨生物，用以监测近海环境污染状况。
[0003]贝类免疫系统是生物体抵御外源胁迫的第一道屏障，血淋巴中的血细胞是其免疫功能的主要承担者。血细胞具有吞噬和包囊作用，可清除病原生物和自身损伤或死亡细胞，同时对机体的炎症、伤口进行修复，在宿主免疫防御机制中起着重要作用。由于贝类是开放式循环系统，血细胞更易接触环境中的有害物质而产生免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种紫贻贝原代血细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取紫贻贝血淋巴；(2)将步骤(1)中得到的血淋巴分离为血细胞和血淋巴上清液；(3)将所述血淋巴上清液制备为血细胞培养液；(4)用步骤(3)制备的血细胞培养液将步骤(2)中得到的血细胞重悬，得到血细胞悬液；(5)利用血细胞悬液进行血细胞培养。2.如权利要求1所述的紫贻贝原代血细胞的培养方法，其特征在于，步骤(1)在无菌条件下进行；优选地，步骤(1)中使用无菌针管提取血淋巴；优选地，所述无菌针管中吸有抗凝剂；优选地，所述抗凝剂的有效成分为柠檬酸钠；优选地，所述抗凝剂为阿氏液；优选地，所述抗凝剂与所述血淋巴的体积比为1:(8～10)，更优选的体积比为1：9。3.如权利要求1所述的紫贻贝原代血细胞的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述紫贻贝为生长状态良好的成年紫贻贝；优选地，所述紫贻贝壳长5
±
0.5cm；优选地，所述紫贻贝为经实验室条件驯化至少一周的成年紫贻贝；优选地，所述紫贻贝在水环境中饥饿处理16～32h后再进行血淋巴的提取，更优选为24h。4.如权利要求3所述的紫贻贝原代血细胞的培养方法，其特征在于，所述实验室条件驯化为：将成年紫贻贝在海水温度为18
±
2℃、盐度为31
±1‰
、pH为8.1
±
0.1的实验室条件下驯化两周，期间每日更换新鲜海水，并投喂小球藻，所述小球藻在所述海水中的浓度为1.5
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105cells/mL。5.如权利要求1所述的紫贻贝原代血细胞的培养方法，其特征在于，步骤(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王悠，张亚亚，姜永顺，李媛媛，曹赛，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：