马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用。本发明专利技术采用超速离心法从马氏珠母贝黏液中分离得到囊泡状纳米颗粒，并鉴定为外泌体，由此为从海洋生物中提取生物活性外泌体提供了参考，同时也提高了马氏珠母贝的利用价值。本发明专利技术从马氏珠母贝黏液中提取的外泌体能够增强细胞活力，降低细胞内ROS水平，抑制NF

【技术实现步骤摘要】
马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用。

技术介绍

[0002]外泌体和细胞外囊泡是由脂质、蛋白质、核酸等生物因子组成的球形纳米颗粒，目前国际上对于细胞外囊泡和外泌体并没有明确的分类，通常情况下，将他们称为囊泡状纳米颗粒。作为一种细胞分泌的囊泡状纳米颗粒，外泌体可以在细胞之间传递物质信息，因此外泌体已被应用于多种疾病的治疗，如抗肿瘤、抗炎症及抗氧化等。由于外泌体是细胞产物，因此，与其他治疗方法相比，使用外泌体作为治疗方法具有更低的细胞毒性和更高的生物相容性。
[0003]外泌体分布在许多生物体的体液和细胞中，但大多数外泌体的分离来源主体仍然是人类细胞，如间充质干细胞。然而，人源细胞外泌体存在许多局限性，如分离产量低和分离成本高。因此，寻找新的外泌体来源来取代人类细胞来源外泌体显得尤为重要。有研究发现外泌体已从卷心菜中分离出来，并经过鉴定，它们具有相关抗炎特性，而在海洋生物中，也有报道发现从海参中分离出具有类似抗炎作用的细胞外囊泡。此外，有研究成功从鳕鱼黏液中分离和提取出外泌体，并发现它们含有免疫相关蛋白。然而，与人类和植物来源的外泌体相比，从海洋生物中提取外泌体的研究仍相对缺乏。

技术实现思路

[0004]本专利技术解决的问题是从海洋生物中提取一种新型的外泌体。
[0005]为解决上述问题，本专利技术第一方面提供一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途。
[0006]本专利技术第二方面提供一种外泌体的提取方法，采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体。
[0007]较佳地，所述采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体包括：
[0008]对所述马氏珠母贝黏液进行过滤及初步离心处理，得到待提取液；
[0009]对所述待提取液进行超速离心处理，得到第二底部沉淀；
[0010]用缓冲液重新悬浮所述第二底部沉淀，所得重悬液即为所述外泌体。
[0011]较佳地，对所述待提取液进行两次所述超速离心处理得到所述第二底部沉淀，两次所述超速离心处理的离心力均为100000g。
[0012]较佳地，所述对所述待提取液进行两次所述超速离心处理包括：
[0013]将所述待提取液置于水平转子中，进行第一次超速离心处理70min，弃去上清液，得到第一底部沉淀；
[0014]对所述第一底部沉淀进行洗涤后，进行第二次超速离心处理90min，弃去上清液，
得到所述第二底部沉淀。
[0015]较佳地，采用PBS溶液对所述第一底部沉淀进行洗涤。
[0016]较佳地，所述对所述马氏珠母贝黏液进行过滤及初步离心处理包括：
[0017]对所述马氏珠母贝黏液进行过滤后，得到滤液；
[0018]对所述滤液进行第一次离心处理和第二次离心处理，得到第一上清液，其中，所述第一次离心处理的离心力为500g，离心时间为10min，所述第二次离心处理的离心力为2000g，离心时间为10min；
[0019]对所述第一上清液进行第三次离心处理，得到的第二上清液即为所述待提取液，其中，所述第三次离心处理的离心力为10000g，离心时间为30min。
[0020]较佳地，所述缓冲液包括PBS溶液。
[0021]本专利技术第三方面提供一种外泌体，采用如上所述的外泌体的提取方法提取得到。
[0022]本专利技术第四方面提供一种上述的外泌体在用于治疗皮肤炎症方面的应用。
[0023]本专利技术相较于现有技术的优势在于：
[0024]本专利技术提供了一种马氏珠母贝黏液的新用途，从马氏珠母贝黏液中提取外泌体。本专利技术采用超速离心法从马氏珠母贝黏液中分离得到囊泡状纳米颗粒，并通过对提取的囊泡状纳米颗粒进行特征鉴定分析，鉴定结果为提取的颗粒确为外泌体，由此为从海洋生物中提取生物活性外泌体提供了参考，同时也提高了马氏珠母贝的利用价值。
[0025]本专利技术还通过脂多糖(LPS)刺激人角质形成细胞(HaCaT)，建立人皮肤炎症细胞体外模型，研究马氏珠母贝黏液来源外泌体对炎症的影响。结果表明：马氏珠母贝黏液来源外泌体能够增强细胞活力，降低细胞内ROS水平，抑制NF
‑
κB和NLRP3通路的激活，降低相关炎症因子mRNA的表达水平，具有一定的抗炎作用。
附图说明
[0026]图1为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体的分离步骤示意图；
[0027]图2为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体的透射电镜图像；
[0028]图3为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体的NTA分析结果；
[0029]图4为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体在NTA中的布朗运动；
[0030]图5为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体的DLS分析结果；
[0031]图6为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体的特征蛋白鉴定结果；
[0032]图7本专利技术实施例中HaCaT细胞摄取马氏珠母贝黏液来源外泌体的激光共聚焦显微照片；
[0033]图8本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体对HaCaT细胞的影响；
[0034]图9为本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体对炎性HaCaT细胞活力的影响；
[0035]图10本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体对炎性HaCaT细胞ROS水平的影响；
[0036]图11为本专利技术实施例中qRT
‑
PCR检测HaCaT细胞中IL
‑
6的mRNA表达水平；
[0037]图12为本专利技术实施例中qRT
‑
PCR检测HaCaT细胞中IL
‑
8的mRNA表达水平；
[0038]图13为本专利技术实施例中qRT
‑
PCR检测HaCaT细胞中TNF
‑
α的mRNA表达水平；
[0039]图14本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体对NF
‑
κB和NLRP3通路的影响；
[0040]图15本专利技术实施例的马氏珠母贝黏液来源外泌体对P65蛋白进入细胞核的影响。
具体实施方式
[0041]马氏珠母贝又称为合浦珠母贝，是一种重要的海水养殖贝类，主要用于珍珠养殖。马氏珠母贝肉大部分被食用或丢弃，有研究发现，马氏珠母贝肉含有抗氧化、抗炎、免疫等活性成分。不仅如此，除了马氏珠母贝肉外，也有研究发现马氏珠母贝黏液中含有抗氧化糖蛋白，这大大提高了马氏珠母贝及其黏液的开发潜力。此外，马氏珠母贝在治疗皮肤病方面也有相关应用。从马氏珠母贝中分离出的多肽已被鉴定为具有促进伤口愈合的功能。另外，珍珠提取物可以治疗紫外线照射下人角质形成细胞的炎症和凋亡，这表明珍珠提取物具有治疗皮肤炎的潜力。
[0042]特应性皮炎是一种常见的慢性炎症性皮肤病，其主要症状为皮肤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途。2.一种外泌体的提取方法，其特征在于，采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体。3.根据权利要求2所述的外泌体的提取方法，其特征在于，所述采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体包括：对所述马氏珠母贝黏液进行过滤及初步离心处理，得到待提取液；对所述待提取液进行超速离心处理，得到第二底部沉淀；用缓冲液重新悬浮所述第二底部沉淀，所得重悬液即为所述外泌体。4.根据权利要求3所述的外泌体的提取方法，其特征在于，对所述待提取液进行两次所述超速离心处理得到所述第二底部沉淀，两次所述超速离心处理的离心力均为100000g。5.根据权利要求4所述的外泌体的提取方法，其特征在于，所述对所述待提取液进行两次所述超速离心处理包括：将所述待提取液置于水平转子中，进行第一次超速离心处理70min，弃去上清液，得到第一底部沉淀；对所述第一底部沉淀进行洗涤后，进行第二次超速离心处理90min，弃去上清液，得到所述第二底部沉淀。6.根据权利要求5所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李承勇，洪鹏志，周春霞，千忠吉，任磊，梁燕秋，孙省利，
申请(专利权)人：广东海洋大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：