一种制备蜜蜂胚胎单细胞的方法技术

本发明专利技术披露了一种制备蜜蜂胚胎单细胞的方法，包括：在蜜蜂胚胎单细胞的收集过程中，将取得的蜂卵用离心管中不合钙、镁离子的磷酸缓冲盐溶液暂存，并在吸除所述磷酸缓冲盐溶液及加入胰酶后，选用与离心管契合且表面光滑的研磨棒研磨所述蜂卵。在对离心管中消化的蜂卵细胞进行低温旋转离心处理后，将离心管中未完全消化的卵壳组织进行二次消化；然后对该离心管中消化的蜂卵细胞进行低温旋转离心处理。中消化的蜂卵细胞进行低温旋转离心处理。中消化的蜂卵细胞进行低温旋转离心处理。

【技术实现步骤摘要】
一种制备蜜蜂胚胎单细胞的方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
里蜜蜂单细胞转录组技术，尤其涉及蜜蜂胚胎单细胞的制备方法。

技术介绍

[0002]单细胞转录组有助于深入理解基因型和表型之间的相互关系。随着高通量测序技术的不断成熟，单细胞测序技术成为备受关注的强大工具。在多细胞生物个体发育过程中，单个卵细胞分裂产生胚胎干细胞，进而能增殖分化成为具有不同表型和功能的任何类型的细胞。细胞间差异和异质性是干细胞群体固有的基本特性。对单个小鼠卵裂细胞的转录组分析发现，在相同的卵母细胞中至少有8
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19％的基因存在两个以上的转录异构体(Tang et al.2009)，这表明在胚胎发育过程中单细胞转录组表型的复杂性。如果对一群细胞进行组学分析，这些关键的信息就会被掩盖。单细胞转录组技术可以用在同种干细胞中全面剖析细胞异质性，鉴定不同表型的细胞，这将大大提高人们对胚胎发育中单细胞水平遗传信息异质性的理解，为深入阐明蜜蜂胚胎发育的分子机理开辟新途径和思路。目前，已经利用单细胞转录组技术陆续对拟南芥(Palovaara et al.2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备蜜蜂胚胎单细胞的方法，包括：在所述蜜蜂胚胎单细胞的收集过程中，将取得的蜂卵用离心管中的磷酸缓冲盐溶液暂存，并在吸除所述磷酸缓冲盐溶液及加入胰酶后，选用与离心管契合且表面光滑的研磨棒研磨所述蜂卵。2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，使用的所述磷酸缓冲盐溶液是不含钙镁离子的磷酸缓冲盐溶液。3.按照权利要求2所述的方法，具体包括：将通过移虫针收集的200只蜂卵样品置于含有1ml所述不含钙镁离子的磷酸缓冲盐溶液的1.5ml的离心管中；吸除所述磷酸缓冲盐溶液，加入200微升含有0.25％胰酶、0.038％乙二胺四乙酸及0.001％酚红的混合液在所述离心管中，用1.5ml离心管研磨棒于插入冰里的所述离心管中对所述蜂卵样品充分研磨，直至看不见完整卵壳；用300微升含有0.25％胰酶、0.038％乙二胺四乙酸及0.001％酚红的混合液冲洗该研磨棒，使该研磨棒上细胞充分洗脱至该离心管中，再将该离心管置于37℃水浴锅中，水浴5min。4.按照权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，还包括：对所述离心管中消化的蜂卵细胞进行低温旋转离心处理的过程。5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，所述对消化的蜂卵细胞进行低温...

【专利技术属性】
技术研发人员：房宇，马贝贝，马川，李建科，徐书法，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：