多结构域蛋白疫苗制造技术

本文公开了一种允许将一个或多个癌症疫苗表位与支架结构域组合的蛋白质融合技术。本文还公开了所述蛋白质融合技术所涵盖的多肽和多核酸组合物和其使用方法。和多核酸组合物和其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多结构域蛋白疫苗
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年10月9日提交的美国临时申请序列号62/912,903的权益；所述申请的全部内容通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0003]癌症免疫疗法旨在利用患者的免疫系统来治疗癌症。癌症免疫疗法利用了这样一个事实：癌细胞通常在其表面具有可以被免疫系统检测到的分子，称为肿瘤抗原，所述肿瘤抗原通常是蛋白质或其它大分子(例如，碳水化合物)。主动免疫疗法通过靶向肿瘤抗原引导免疫系统攻击肿瘤细胞。被动免疫疗法增强现有的抗肿瘤应答，并且包含使用单克隆抗体、淋巴细胞和细胞因子。主动免疫疗法旨在诱导患者的新的免疫应答。肿瘤疫苗通常由肿瘤抗原和免疫刺激分子(例如佐剂、细胞因子或TLR配体)组成，它们共同作用以诱导识别和裂解肿瘤细胞的抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)。开发治愈性和肿瘤特异性免疫疗法的关键障碍中的一些障碍是有效地鉴定和选择高度特异性和限制性的肿瘤抗原，并且以某种方式将抗原递送到有需要的受试者，以便最大化受试者的T细胞激活以生成高抗肿瘤免疫原性。
[0004]由于恶性细胞内的遗传本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包括融合多肽，所述融合多肽包括多肽序列，所述多肽序列包括：(a)一个或多个抗原多肽序列；以及(b)两个或更多个支架多肽序列，其中所述两个或更多个支架多肽序列中的每个支架多肽序列包括人多肽序列、其片段或其变体，并且其中(i)所述两个或更多个支架多肽序列的分子质量大于11kDa，或者(ii)所述两个或更多个支架多肽序列中的每个支架多肽序列包括至少21个氨基酸残基。2.一种组合物，其包括融合多肽，所述融合多肽包括多肽序列，所述多肽序列包括：(a)一个或多个抗原多肽序列；以及(b)一个或多个支架多肽序列，其中所述支架多肽序列选自Stefin A、肌联蛋白
‑
I27、其片段和其变体。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的至少一个支架多肽序列通过一个或多个接头序列与所述一个或多个抗原多肽序列中的至少一个抗原多肽序列连接。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述融合多肽被配置成促进接头的切割、一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的切割或所述一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的呈递。5.一种组合物，其包括融合多肽，所述融合多肽包括多肽序列，所述多肽序列包括：(a)一个或多个抗原多肽序列；以及(b)一个或多个非免疫原性的支架多肽序列，其中所述支架多肽序列中的至少一个支架多肽序列通过一个或多个接头序列与所述一个或多个抗原多肽序列中的至少一个抗原多肽序列连接，并且其中所述融合多肽被配置成促进接头的切割、一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的切割或所述一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的呈递。6.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其中抗原多肽是癌抗原。7.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其中所述抗原多肽与自身免疫性疾病相关或者是自身免疫性抗原或病毒抗原。8.根据权利要求1到7中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列包括人多肽序列、其片段或其变体。9.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物，其中支架多肽包括重组人多肽。10.根据权利要求1或3到9中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽未被配置成具有靶向结合特性。11.根据权利要求1或3到9中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽各自独立地选自肌联蛋白I27、泛素、Stefin A、10FN
‑
III、Ig
‑
L细丝蛋白A、腱生蛋白、纤连蛋白、其片段和其变体。12.根据权利要求1或3到9中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽各自独立地选自Stefin A、肌联蛋白I27、其片段和其变体。13.根据权利要求1到12中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽缺乏以下：(i)翻译后修饰；(ii)肽内二硫键或两者。
14.根据权利要求1到13中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽是非免疫原性的。15.根据权利要求1到14中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽未被配置成具有酶活性、不具有抑制剂活性、不具有结合活性或其任何组合。16.根据权利要求1到12中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽中的每个支架多肽是Stefin A、其片段或其变体。17.根据权利要求1到16中任一项所述的组合物，其中所述一个或多个支架多肽序列包括两个或更多个相同或不同的支架多肽序列。18.根据权利要求1到17中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或15个支架多肽。19.根据权利要求1到18中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括至多5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或20个支架多肽。20.根据权利要求1到19中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括6个支架多肽。21.根据权利要求1到20中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列的分子质量大于11kDa、20kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、85kDa、90kDa、100kDa、110kDa、120kDa、150kDa或200kDa。22.根据权利要求1到21中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列的分子质量不大于15kDa、20kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、85kDa、90kDa、100kDa、110kDa、120kDa、150kDa、200kDa或500kDa。23.根据权利要求1到22中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列的分子质量大于5kDa、6kDa、7kDa、8kDa、9kDa、10kDa、11kDa、12kDa、13kDa、14kDa、15kDa、16kDa、17kDa、18kDa、19kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa、70kDa或100kDa。24.根据权利要求1到23中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列的分子质量不大于6kDa、7kDa、8kDa、9kDa、10kDa、11kDa、12kDa、13kDa、14kDa、15kDa、16kDa、17kDa、18kDa、19kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa、70kDa或250kDa。25.根据权利要求1到24中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列包括至少21个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少100个、至少125个、至少150个、至少175个、至少200个、至少500个、至少1000个或至少5000个氨基酸残基。26.根据权利要求1到25中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列包括至多30个、至多35个、至多40个、至多45个、至多50个、至多55个、至多60个、至多65个、至多70个、至多75个、至多80个、至多85个、至多90个、至多100个、至多125个、至多150个、至多175个或至多200个氨基酸残基。27.根据权利要求1到26中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽的分子质量大于20kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、85kDa、90kDa、100kDa、110kDa、120kDa、150kDa或200kDa。28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述融合多肽的分子质量大于75kDa。29.根据权利要求1到28中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽的分子质量不大于20kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、
85kDa、90kDa、100kDa、110kDa、120kDa、150kDa、200kDa或500kDa。30.根据权利要求1到29中任一项所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽序列中的每个抗原多肽序列包括少于100个、少于75个、少于50个或少于35个氨基酸残基。31.根据权利要求1到30中任一项所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽序列中的每个抗原多肽序列包括多于8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或15个氨基酸残基。32.根据权利要求1到31中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的至少一个支架多肽序列定位于所述融合多肽的N末端处或与所述融合多肽的所述N末端连接。33.根据权利要求1到31中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的至少一个支架多肽序列定位于所述融合多肽的所述N末端处或与所述融合多肽的C末端连接。34.根据权利要求1到31中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的至少两个支架多肽序列不被抗原序列或接头序列中断。35.根据权利要求1到34中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在所述N末端到所述C末端方向上包括具有式(Ia)结构的多肽序列，A
n
‑
S
m
或S
m
‑
A
n
式(Ia)，其中每个S独立地表示支架多肽序列，并且每个A独立地表示抗原多肽序列，并且其中m是等于或大于2的整数，并且n是等于或大于1的整数。36.根据权利要求35所述的组合物，其中n是选自1到5的整数，并且m是1或2。37.根据权利要求1到36中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在所述N末端到所述C末端方向上包括具有式(Ib)结构的多肽序列，S
o
‑
A
n
‑
S
m
式(Ib)，其中每个S独立地表示支架多肽序列，并且每个A独立地表示抗原多肽序列，并且其中o、n、m中的每一个独立地是等于或大于1的整数。38.根据权利要求37所述的组合物，其中o是1或2或3，m是1或2或3，并且n是选自1到5的整数。39.根据权利要求37所述的组合物，其中所述融合多肽包括具有以下结构的多肽序列：S
‑
A
‑
S、A
‑
S
‑
A
‑
S、S
‑
A
‑
S
‑
A、S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S、S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S、S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S、S
‑
A
‑
S
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
A
‑
S、S
‑
S
‑
A
‑
S
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
A
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
A
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
A
‑
S
‑
S
‑
S或S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S。40.根据权利要求1到39中任一项所述的组合物，其中融合多肽序列包括两个或更多个接头序列。41.根据权利要求1到40中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在所述N末端到所述C末端方向上包括具有式(IIa)结构的多肽序列，(L
‑
A
‑
L)
n
‑
S
m
或S
m
‑
(L
‑
A
‑
L)
n
式(IIa)，其中每个S独立地表示支架多肽序列，每个A独立地表示抗原多肽序列，并且每个L独立地表示接头序列或不存在，并且
其中m是等于或大于2的整数，并且n是等于或大于1的整数。42.根据权利要求41所述的组合物，其中n是选自1到5的整数，并且m是1或2。43.根据权利要求1到42中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在所述N末端到所述C末端方向上包括具有式(IIc)结构的多肽序列，S
o
‑
(L
‑
A
‑
L)
n
‑
S
m
式(IIc)，其中每个S独立地表示支架多肽序列，每个A独立地表示抗原多肽序列，并且每个L独立地表示接头序列或不存在，并且其中o、n、m中的每一个独立地是等于或大于1的整数。44.根据权利要求43所述的组合物，其中o是1或2或3，m是1或2或3，并且n是选自1到5的整数。45.根据权利要求43所述的组合物，其中所述融合多肽包括具有以下结构的多肽序列：S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S、A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S、S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A、S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S、S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S、S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
S
‑
S、S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
S、S
‑
S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S、S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
S或S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S
‑
L
‑
A
‑
S
‑
L
‑
A
‑
L
‑
S。46.根据权利要求37或43所述的组合物，其中支架多肽和抗原多肽以交替方式位于所述融合多肽中。47.根据权利要求1到46中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽呈线性形式。48.根据权利要求1到47中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或20个抗原多肽。49.根据权利要求1到48中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、20个、50个或100个抗原多肽。50.根据权利要求1到49中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括1个、2个、3个、4个、5个或6个抗原多肽。51.根据权利要求3到50中任一项所述的组合物，其中所述支架多肽序列中的每个支架多肽序列通过所述接头序列中的至少一个接头序列与所述抗原多肽序列中的一个或两个抗原多肽序列连接。52.根据权利要求3到51中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽被配置成促进接头的切割或一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的切割。53.根据权利要求3到52中任一项所述的组合物，其中所述接头序列中的至少一个接头序列包括切割位点。54.根据权利要求53所述的组合物，其中所述切割位点可被肽酶或蛋白酶切割。55.根据权利要求3到54中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽被配置成促进所述一个或多个抗原多肽中的至少一个抗原多肽的呈递。56.根据权利要求3到55中任一项所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLAI类抗原多肽，并且其中所述接头序列中的至少一个接头序列包括赖氨酸残基、精氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、天冬酰胺残基、组氨酸残基、丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、天冬氨
酸残基、甲硫氨酸残基、酪氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、谷氨酸残基、色氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基或其任何组合。57.根据权利要求56所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLA I类抗原多肽，并且所述接头序列中的至少一个接头序列包括与所述抗原多肽中的至少一个抗原多肽的N末端直接连接的赖氨酸残基、精氨酸残基或丙氨酸残基。58.根据权利要求56到57所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLA I类抗原多肽，并且所述接头序列中的至少一个接头序列包括与所述抗原多肽中的至少一个抗原多肽的C末端直接连接的丝氨酸残基、赖氨酸残基、精氨酸残基或丙氨酸残基。59.根据权利要求3到58中任一项所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLA II类抗原多肽，并且所述接头序列中的至少一个接头序列包括天冬氨酸残基、甲硫氨酸残基、亮氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、酪氨酸残基、苯丙氨酸残基、色氨酸残基或其任何组合。60.根据权利要求59所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLA II类抗原多肽，并且所述接头序列中的至少一个接头序列包括与所述抗原多肽中的至少一个抗原多肽的N末端直接连接的天冬氨酸残基、甲硫氨酸残基、亮氨酸残基、酪氨酸残基或苯丙氨酸残基。61.根据权利要求59到60所述的组合物，其中所述一个或多个抗原多肽是HLA II类抗原多肽，并且所述接头序列中的至少一个接头序列包括与所述抗原多肽中的至少一个抗原多肽的C末端直接连接的甲硫氨酸残基、亮氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、酪氨酸残基、苯丙氨酸残基或色氨酸残基。62.根据权利要求3到61中任一项所述的组合物，其中所述接头序列中的每个接头序列包括至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个或50个氨基酸残基。63.根据权利要求3到62中任一项所述的组合物，其中所述接头序列中的每个接头序列包括至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、25个、50个或100个氨基酸残基。64.根据权利要求3到63中任一项所述的组合物，其中接头是柔性的。65.根据权利要求3到64中任一项所述的组合物，其中所述接头序列相同或不同。66.根据权利要求1到65中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在水性溶剂中的溶解度为其在同一溶剂中测量的缺乏支架多肽的对应多肽的溶解度的至少1.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40或50倍。67.根据权利要求1到65中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽在包括血清的溶剂中的溶解度为其在同一包括血清的溶剂中测量的缺乏所述支架多肽的对应多肽的溶解度的至少1.1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。68.根据权利要求1到67和69中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽的血清半衰期为其缺乏所述支架多肽的对应多肽的血清半衰期的至少1.1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。69.根据权利要求1到68中任一项所述的组合物，其中在向受试者施用后，所述融合多肽在淋巴结中的累积为其缺乏所述支架多肽的对应多肽的累积的至少1.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、75、100、150、200、250、500、1000、5000或10000倍，如通过平均辐射效率测量的。
70.根据权利要求1到69中任一项所述的组合物，其中在向受试者施用后，所述融合多肽的抗原特异性T细胞应答为其缺乏所述支架多肽的对应多肽的抗原特异性T细胞应答的至少1.1、2、3、4、5、6、7、8、9或10、20、30、40、50、75、100、150、200、250或至少300倍，如通过抗原特异性T细胞的频率或IFNγ分泌的增加测量的。71.根据权利要求1到70中任一项所述的组合物，其中所述融合多肽包括一个或多个被配置成与抗原呈递细胞、佐剂或试剂结合的结合部分。72.根据权利要求1到70中任一项所述的组合物，其中多价融合多肽通过与和功能化药剂，如DC靶向结构域、佐剂或其它免疫调节剂偶联的抗支架抗体或其片段进行添加混合而功能化。73.根据权利要求71所述的组合物，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞(DC)、巨噬细胞、朗格汉斯细胞(Langerhans cell)或B细胞。74.根据权利要求71所述的组合物，其中所述一个或多个结合部分被配置成与在树突细胞上表达的一个或多个受体结合。75.根据权利要求74所述的组合物，其中所述一个或多个受体包括C型凝集素受体、清道夫受体、趋化因子受体、F4/80受体、DC特异性跨膜蛋白(DC
‑
STAMP)、Fc受体、内化受体或其任何组合。76.根据权利要求74所述的组合物，其中所述一个或多个受体包括Clec9a或XCR1。77.根据权利要求71所述的组合物，其中所述结合部分中的至少一个结合部分包括在所述支架多肽中。78.根据权利要求71所述的组合物，其中所述结合部分中的至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：E，
类型：发明
国别省市：