一种乳源外泌体及提取方法技术

本发明专利技术涉及一种乳源外泌体的提取方法，依次按下述步骤进行：(1)将乳原料分装，离心，取清液；(2)将步骤(1)得到的清液离心，取中间层清液；(3)将步骤(2)得到的中间层清液离心，取清液，与PBS缓冲液和外泌体提取试剂混匀，孵育；(4)将步骤(3)的产物离心，保留沉淀，用PBS缓冲液重悬；(5)将步骤(4)的产物离心，取上清，即得。采用本发明专利技术提供的乳源外泌体提取方法制备的乳源外泌体，相较于其他方法制备的乳源外泌体而言，形态更完整，需要的样品体积更少，且在分离后包含的乳源外泌体的蛋白种类更多，更有利于分析研究作业。有利于分析研究作业。

【技术实现步骤摘要】
一种乳源外泌体及提取方法


[0001]本专利技术涉及乳制品
，特别是乳源外泌体及提取方法。

技术介绍

[0002]外泌体是细胞主动分泌产生的双层膜结构圆形或椭圆形囊泡，直径在30
‑
200nm，密度为1.13
‑
1.19g/mL。1983年，首次在网织红细胞中转铁蛋白受体的研究中发现50nm的小囊泡。1987年，加拿大学者Rose Johnstone创造“Exosome”一词并认为外泌体只是细胞向外界环境“排泄”的工具。2007年，Valadi等提出外泌体包含mRNA和miRNA并可以将其传递给另一个细胞，至此外泌体的功能及其机制开始得到广泛研究。外泌体存在于各种体液环境中，如血清、尿液、唾液、乳汁、羊水等。生物体液中的外泌体表明其起源细胞的功能状态，在医学上可作为肝癌、前列腺癌等疾病的生物诊断标记物；由于外泌体的膜结构还可以作为药物载体表现出高效药物传递的特性，例如外泌体负载不稳定的姜黄素可提高治疗效果。
[0003]乳源外泌体是由乳腺上皮细胞分泌的小囊泡，其主要组成成分是蛋白质、脂质以及核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳源外泌体的提取方法，其特征在于，依次按下述步骤进行：(1)将乳原料分装，离心，取清液；(2)将步骤(1)得到的清液离心，取中间层清液；(3)将步骤(2)得到的中间层清液离心，取清液，与PBS缓冲液和外泌体提取试剂混匀，孵育；(4)将步骤(3)的产物离心，保留沉淀，用PBS缓冲液重悬；(5)将步骤(4)的产物离心，取上清，即得。2.根据权利要求1所述的乳源外泌体的提取方法，其特征在于，步骤(1)中的离心工艺为室温下1500
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2500
×
g离心5
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15min。3.根据权利要求1所述的乳源外泌体的提取方法，其特征在于，步骤(2)中的离心工艺为室温下8500
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10000
×
g离心25
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35min，优选的，离心时间为30min。4.根据权利要求1所述的乳源外泌体的提取方法，其特征在于，步骤(3)中的离心工艺为室温下8500
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10000
×
g离心25
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35min，优选的，离心时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈历俊，李莹，陈璟瑶，乔为仓，张明辉，赵军英，杨宝雨，
申请(专利权)人：北京三元食品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：