获得成熟肝细胞的培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及获得成熟肝细胞的培养基及培养方法，属于细胞工程技术领域。获得成熟肝细胞的培养基，用于进一步诱导肝细胞获得成熟肝细胞，其包括肝细胞培养基和如下小分子化合物：Forskolin，SB431542，以及γ

【技术实现步骤摘要】
获得成熟肝细胞的培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞工程
，具体涉及多能干细胞定向诱导分化获得成熟肝细胞的培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]多能干细胞具有无限扩增及多潜能性，可分化为成人体内所有的细胞类型，可为再生医学提供丰富而无限的细胞来源。
[0003]以往的肝细胞分化一般为3段法，所获得的肝细胞尚不成熟。表现为：1)多能干细胞分化而来的肝细胞与原代肝细胞相比仍不够成熟，表现为ALB表达水平低，肝细胞表面的转运体表达水平较低，肝药酶表达较低；2)长时间培养多能干细胞分化而来的肝细胞仍比较困难。3)2D培养获得的肝细胞成熟度较低，消化较困难，大量扩增受限。
[0004]现有技术中(CN107723271A)曾提及通过增加第四个肝细胞成熟的培养基处理，可以提升分化而来的肝细胞成熟度。但其诱导过程中需要额外的静电刺激，且其获得肝细胞数据较少，仍需要进一步鉴定。本专利技术通过引入3D培养方式、操控特定信号通路，提供了一种便捷的、可促进了肝细胞进一步成熟的方法。我们进一步在急性肝衰竭小鼠模型上验证了该方法获得本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.获得成熟肝细胞的培养基，其特征在于，用于进一步诱导肝细胞获得成熟肝细胞，其包括肝细胞培养基和如下小分子化合物：腺苷酸环化酶激活剂，ALK5抑制剂，以及γ
‑
secretase抑制剂和/或Wnt抑制剂。2.根据权利要求1所述的获得成熟肝细胞的培养基，其特征在于，所述小分子化合物在肝细胞培养基中的含量如下：腺苷酸环化酶激活剂，优选为Forskolin，浓度为5
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100μM；ALK5抑制剂，优选为SB431542，浓度为0.1
‑
50μM；γ
‑
secretase抑制剂，浓度为1
‑
20μM；Wnt抑制剂，浓度为0.5
‑
20μM。3.根据权利要求1所述的获得成熟肝细胞的培养基，其特征在于，所述肝细胞培养基包括Hepatocyte Culture Medium，HepatoZYME
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SFM以及以William's E为基础培养基的自制培养基中的一种。4.根据权利要求1所述的获得成熟肝细胞的培养基，其特征在于，所述γ
‑
secretase抑制剂选自YO
‑
01027、LY41575、L
‑
685,458、Nirogacestat、NGP555、DAPT中的至少一种，优选为DAPT；所述Wnt抑制剂选自IWP
‑
2、Adavivint、XAV
‑
939ICG
‑
001、IWR
‑1‑
endo、CCT251545、NCB
‑
0846、Wnt
‑
C59、LGK
‑
974、PRI
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724、Pyrvinium pamoate、Salinomycin、IWP
‑
4、KY02111、NCB
‑
0846、Triptonide、FH535、LF3、DK419、iCRT3、KYA1797K、IQ 1、CWP232228、IWP
‑
3、JW74，JW55、MSAB中的至少一种，优选为IWP2。5.根据权利要求1所述的获得成熟肝细胞的培养基，其特征在于，所述多能干细胞包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。6.获得成熟肝细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)经第一培养基诱导获得内胚层细胞iPSC汇合至85％以上，消化为单细胞后，铺至细胞培养基质包被的培养板上，细胞基质GFR浓度为推荐浓度的1/4，细胞铺板浓度3
×
104cells/cm2；2)内胚层细胞经第二培养基诱导获得肝祖细胞，并经3D培...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨佳银，江利香，付建，谢鸿发，韦睿，杨波，
申请(专利权)人：深圳市三启生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：