一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及细胞模型构建方法技术领域，尤其是一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法，现提出如下方案，其包括使用1μmol/LAFB1溶液长期连续干预HEEC至第30代，采用CCK8法来检测AFB1染毒不同代数的HEEC活力的影响，采用流式细胞仪检测不同代数细胞的细胞凋亡、细胞周期，采用Transwell法检测染毒30代细胞的侵袭、迁移能力。本发明专利技术进一步探索AFB1在食管癌发生过程的相关分子机制，为食管癌的病因学研究奠定基础，为防止食品中AFB1对食管的毒性提供一定的理论依据。的毒性提供一定的理论依据。的毒性提供一定的理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及细胞模型构建方法领域，尤其是一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法。

技术介绍

[0002]国际癌症研究机构报告显示，全球食管癌发病率在所有癌症中排名第七，总死亡率在所有癌症中排名第六，环境、饮食习惯、生活方式在食管癌的发生过程中起着重要作用，其中，霉菌毒素感染被认为是中国食管癌高发区居民食管癌发生的重要危险因素之一。黄曲霉毒素B1是食物中最常见的也是毒性最大的霉菌毒素，且在1993年AF B1被IARC定义为I类致癌物。一项病例对照研究表明，黄曲霉毒素B1的高暴露可能是中国淮安(食管癌高发区)食管癌前病变的重要危险因素。近年来，有关食管癌前病变细胞模型的建立方法极少见到，大多使用甲基苄基亚硝胺诱导建立食管癌前病变动物模型，为此，本专利技术提出了一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法。

技术实现思路

[0003]为解决现有技术中的问题，本专利技术提出了一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术采用了如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，培养HEEC；步骤二，染毒处理：将AFB1粉末溶于DMSO中得到10mmol/L的混合液，再加入完全培养液稀释混合液得到1μmol/L AFB1染毒液；将所述HEEC以40％密度接种25cm2培养瓶中，培养过夜，待HEEC贴壁恢复形态后进行AFB1处理，传代，此为AFB1处理第一代细胞，待细胞恢复形态贴壁过夜后，重复进行AFB1处理，重复培养30代，其中每处理5代，对相应细胞进行液氮冻存，所述AFB1处理为在HEEC中加入1μmol/L AFB1染毒液培养48
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72小时。2.根据权利要求1所述的一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法，其特征在于，所述培养HEEC的步骤为：将HEEC置于完全培养液中并置于5％CO2、37℃的培养箱中，所述完全培养液包括高糖DMEM培养液、FBS和双抗，高糖DMEM培养液：FBS：双抗的体积比为10：1：0.1，双抗为100U/ml的链霉素和100U/ml的青霉素。3.根据权利要求2所述的一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括采用CCK8法检测染毒处理后的HEEC活力。4.根据权利要求3所述的一种食管上皮细胞癌前病变细胞模型的构建方法，其特征在于，检测染毒处理后的HEEC活力的步骤包括如下：将HEEC以6
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103个/孔密度接种于96孔板中，每孔体积100μL，置于37℃、5％CO2培养箱内培养；24h后，板内分别加入100μL含0、0.01、0.1、1、10、100、1000μmol/L的AFB1培养液，每组5个复孔，并设置空白孔染毒24h；后弃去培养液，换成100μL DMEM培养液，随即每干预孔贴壁加入10μL CCK8溶液，培养箱内孵育1.5h，置于酶标仪CCK8模式下测定各孔OD值...

【专利技术属性】
技术研发人员：王少康，郭子琪，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：