一种利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法，是将可溶性弹性蛋白溶解于去离子水或缓冲溶液中，配制成弹性蛋白水溶液；然后加入丙烯酸酯

【技术实现步骤摘要】
一种利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法


[0001]本专利技术属于生物领域，具体涉及一种利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法。

技术介绍

[0002]类器官是由体内组织中的干细胞或特定祖细胞在体外自组装(主要是上皮细胞)形成的三维的再现体内组织(部分)结构和功能的多细胞组织。因此，类器官是研究组织和器官发育、创伤修复、病变，肿瘤组织发生、发展、转移、耐药、靶向治疗和免疫治疗的强大模型。目前类器官的培养主要依赖于小鼠肉瘤的可溶性基底膜提取物，如商品化的基质胶。但基质胶存在成分含量不明确的问题，影响了类器官的培养质量。它是由多种蛋白(胶原、层粘连蛋白等)，多糖及生长因子组成的复合物，每一批次的成分及各自含量有较大差异性，造成了其培养的类器官存在较大的批次差异性，稳定性较差。因此亟待研发成分和含量明确的类器官培养材料。
[0003]弹性蛋白(Elastin)是由细胞分泌的可溶性弹性蛋白原在体内酶的作用下交联而成的不溶于水的三维网络结构。弹性蛋白存在于皮肤、肺、血管等组织和器官中，起到维持组织和器官弹性的功能。弹性蛋白具有促进细胞迁移增殖及促血管本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法，其特征在于包括下述步骤：(1)将0.5～2质量份可溶性弹性蛋白溶解于100份去离子水或缓冲溶液中，配制成弹性蛋白水溶液；(2)在所述弹性蛋白水溶液中，加入0.1～1质量份丙烯酸酯
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聚乙二醇
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N
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羟基琥珀酰亚胺(AC
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PEG
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NHS)或甲基丙烯酸酯
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聚乙二醇
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N
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羟基琥珀酰亚胺(MeAC
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PEG
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NHS)，常温充氮气避光条件下进行反应，得到改性弹性蛋白；(3)将所述改性弹性蛋白在去离子水中透析，将透析后的改性弹性蛋白水溶液置于<
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15℃环境中使其结冰，然后在冻干机中冻干，得到干态的改性弹性蛋白；(4)将所述干态的改性弹性蛋白0.5～20质量份溶解于100份磷酸盐生理(PBS)缓冲溶液中，加入光引发剂，得到弹性蛋白水凝胶前驱体溶液；(5)将组织或肿瘤组织消化成单细胞悬浮液，进行细胞计数，然后离心得到细胞团；将所述弹性蛋白水凝胶前驱体溶液与细胞团混合，然后在一定波长的光源下辐照，得到弹性蛋白水凝胶/细胞复合物；再将所述弹性蛋白水凝胶/细胞复合物在类器官培养基下培养；在培养基及水凝胶作用下，水凝胶包裹的细胞中的上皮细胞会在水凝胶中进行扩增，形成类器官。2.根据权利要求1所述的利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述可溶性弹性蛋白来源于鱼类或哺乳类动物组织中的不溶性弹性蛋白的水解物；所述缓冲溶液为0.01M的磷酸盐生理缓冲溶液或0.01～0.06M的NaH2PO4缓冲溶液；所述缓冲溶液的pH值为8.0～8.3。3.根据权利要求1所述的利用弹性蛋白水凝胶培养类器官的方法，其特征在于：步骤(2)中，丙烯酸酯
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聚乙二醇
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N
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羟基琥珀酰亚胺或甲基丙烯酸酯
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聚乙二醇
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N
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羟基琥珀酰亚胺中PEG的聚合度为4～20；丙烯酸酯

【专利技术属性】
技术研发人员：严乐平，何裕隆，张常华，徐云升，何勇，陈伟，万欢欢，
申请(专利权)人：中山大学附属第七医院深圳，
类型：发明
国别省市：