一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用。采用胰蛋白酶与分散酶消化牦牛瘤胃上皮组织，获得原代牦牛瘤胃成纤维细胞，采用携带SV40T的慢病毒感染原代成纤维细胞，再用嘌呤毒素筛选出稳定转入SV40T基因的永生化牦牛瘤胃成纤维细胞系并保种。该细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO.C2021253。该细胞系的建立解决了原代瘤胃成纤维细胞培养难、传代次数有限的缺陷，丰富了牦牛源细胞系库，填补了牦牛成纤维细胞相关研究试验材料的空白，也为牦牛成纤维细胞系诱导分化成为牦牛脂肪细胞、成骨细胞等提供细胞模型，也可为生命科学相关领域以及疫苗生产等科研研究提供主要原材料。苗生产等科研研究提供主要原材料。苗生产等科研研究提供主要原材料。

【技术实现步骤摘要】
一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用


[0001]本专利技术涉及一种细胞系及其构建方法，具体涉及一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系及其构建和应用。

技术介绍

[0002]牦牛是一种生活在海拔3千米以上寒冷高原上的牛科动物，中国拥有的牦牛为我国独有的珍贵基因资源。中国几乎所有的牦牛都分布在整个青藏高原，尤其是甘肃、青海和西藏。牦牛是甘肃、青海和西藏最重要的驯化动物之一。根据《中国家畜家禽品种志》目前我国有12个官方认可的家养牦牛品种，包括四川的九龙牦牛、麦洼牦牛，甘肃的天祝白牦牛、甘南牦牛，西藏的八里牦牛、嘉里牦牛、四步牦牛，青海的环湖牦牛、高原牦牛、长毛额牦牛、新疆的霸州牦牛以及云南的中甸牦牛。牦牛除了是当地牧民最主要的经济来源和生活支柱，还与当地的文化、宗教、社会生活紧密联系。牦牛因其特殊的生物学特征、经济特征和分布特点，不管是营养，育种或是遗传方面，动物生产研究较多，然而这些研究涉及细胞层面的报道非常有限。牦牛相关的细胞系也是及其有限。从我国种质资源保存的实际出发，构建重要的牦牛种群的细胞系的方式保存其基因资源，也是具有重要意义的。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系，其特征在于，所述细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.C2021253。2.一种如权利要求1所述永生化的牦牛瘤胃成纤维细胞系的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：S1.样本预处理：将牦牛瘤胃上皮组织用含抗生素的洗液清洗干净并剪碎；S2.酶消化及培养：用消化酶处理组织，收集上层消化液并进行终止消化，离心收集细胞沉淀，用完全培养基分散细胞沉淀并接种到培养瓶中进行常规细胞培养；同时，将酶消化后的组织于培养瓶中间隔放置，加入完全培养基进行培养；待细胞长至70％～80％时进行传代培养，用胰蛋白酶
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EDTA溶液消化1～2min，终止消化后离心收集细胞沉淀，再用含碱性成纤维细胞生长因子的完全培养基重悬细胞沉淀，所得的细胞为成纤维细胞；S3.慢病毒感染：当传代的成纤维细胞长至40％～50％时，将慢病毒用聚凝胺和含10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子的完全培养基进...

【专利技术属性】
技术研发人员：王之盛，王俊梅，胡瑞，邹华围，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：