一种测定抗体浓度的荧光偏振免疫分析方法技术

本发明专利技术涉及一种测定抗体浓度的荧光偏振免疫分析方法，所述方法包括以下步骤：1).制备带有荧光基团的抗体结合蛋白作为抗体荧光追踪分子；2).将所述荧光追踪分子与待测样品溶液混合并孵育；3).孵育完成后，用带有荧光偏振检测功能的酶标仪检测孵育后溶液的水平及垂直方向上光强，分别记为I

【技术实现步骤摘要】
一种测定抗体浓度的荧光偏振免疫分析方法


[0001]本专利技术涉及生物分析
，尤其涉及一种基于荧光偏振理论测定抗体浓度的免疫分析方法。

技术介绍

[0002]抗体表达量高低是衡量稳定细胞株质量关注的重要指标。获得稳定高表达抗体的细胞株是将治疗性抗体从实验室推向市场，真正应用到救治病人的重要一步，其意义不仅在于给临床研究提供足够量的试验药物，也为抗体药物上市后的量产尽可能降低生产成本。除此之外，抗体浓度的测定，几乎贯穿抗体药物的整个研发、生产过程。
[0003]获得高产的稳定细胞株通常需要从一大批单克隆中筛选，目前常用的抗体浓度定量方法用于高产稳定细胞株的大量筛选仍有缺陷，有待改进。常用的方法主要有：高效液相色谱(HPLC)法、酶联免疫吸附实验(ELISA)、和生物膜层干涉(BLI)法。HPLC法被认为是抗体浓度检测的“金标准”，但是HPLC测样通量低、对仪器和操作人员专业技术要求较高；ELISA是蛋白定量的成熟方法，但实验过程冗长、步骤多、花费时间长；BLI法通量较高，但费用昂贵，经济成本高。
[0004]因此亟需开发一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定抗体浓度的荧光偏振免疫分析方法，包括如下步骤：1).制备带有荧光基团的抗体结合蛋白作为荧光追踪分子；2).将所述荧光追踪分子与待测样品溶液混合并孵育，同步地，将所述荧光追踪分子与抗体浓度已知的标准品溶液混合并孵育，以及同步地，将所述荧光追踪分子与不含抗体的空白溶剂混合并孵育以便作为空白对照组；3).孵育完成后，用带有荧光偏振检测功能的酶标仪检测步骤2)得到的孵育后溶液的水平及垂直方向上光强，分别记为I
∥
和I
⊥
；以及4).数据分析：用计算公式：荧光偏振强度PI＝I
∥
‑
I
⊥
计算溶液的荧光偏振强度，通过扣除空白对照组的荧光偏振强度值来校正标准品溶液或待测样品溶液的荧光偏振强度值，以已知标准品浓度为横坐标，校正后的荧光偏振强度值为纵坐标绘制标准曲线，线性拟合得抗体浓度与荧光偏振强度关系式，将待测样品溶液测得的校正后的荧光偏振强度值代入该关系式即可得待测样品溶液中的抗体浓度，其中，在所述方法中，标准品和待测样品每个浓度均设置两复孔，采用两个复孔的PI均值进行数据分析。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，通过以下工序制备所述荧光追踪分子：1.1)使用二甲基亚砜(DMSO)溶解异硫氰酸荧光素(FITC)制备得到FITC预备溶液；1.2)准备抗体结合蛋白原液，并保证所述蛋白原液中不含有咪唑基或者含游离氨基的成分；1.3)将所述FITC预备溶液与抗体结合蛋白原液混合并进行分子偶联反应；以及1.4)终止偶联反应并通过纯化去除游离FITC，获得荧光追踪分子溶液。3.根据权利要求2所述的方法，其中，在工序1.1)中，所得到的FITC预备溶液的浓度为10mg/mL以上；在工序1.2)中，准备的抗体结合蛋白原液的浓度为5mg/mL以上；且所述抗体结合蛋白为重组葡萄球菌蛋白A(SPA)；在工序1.3)中，按FITC与SPA的摩尔比为18
‑
20:1将FITC预备溶液与抗体结合蛋白原液混合；在工序1.3)中，用pH在9.0
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10.0范围内的缓冲液将抗体结合蛋白浓度控制在2
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5mg/mL，充分混匀，于4℃避光搅拌过夜，从而进行偶联反应；在工序...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑玉娟，陈淦均，刘国键，陈艺丽，王春河，崔越，
申请(专利权)人：上海迈石生物技术有限公司深圳创石生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：