植物乳杆菌LP1406及分离培养方法技术

本发明专利技术属于微生物培养领域，具体涉及一种可以发酵降解海带的植物乳杆菌的培养方法。所述的植物乳杆菌于2021年11月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M20211500。本发明专利技术提供的植物乳杆的培养方法，包括以下的步骤：S1：植物乳杆菌的分离及培养；S2：发酵海带的植物乳杆菌的菌筛选；S3：海带发酵；S4:发酵效果评价。本发明专利技术提供的植物乳杆菌，能够利用天然海带进行快速生长，其发酵海带性能优异，且代谢物的产量增加，为发酵海带提高海带生物活性提供了一种新的微生物处理方法；本发明专利技术的菌株，发酵海带效果显著，可使发酵后样品中的抗氧化和降血糖活性提升，ABTS的抑制能力为82%，α

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌LP1406及分离培养方法


[0001]本专利技术属于微生物培养领域，具体涉及一种植物乳杆菌，还涉及上述的植物乳杆菌的培养方法。

技术介绍

[0002]植物乳杆菌是乳杆菌科中的一种乳杆菌属，能在各种环境中生存，与人类生活密切相关。植物乳杆菌具有很强的抗酸能力,且大部分可耐受5%浓度以上的NaCl。具有繁殖快，生长周期短，且菌体营养丰富等特点。其生理功能主要有免疫调节，拮抗致病菌，降低胆固醇，降血糖，预防心脑血管等，是应用广泛的一种益生菌。此外，植物乳杆菌酶系丰富，代谢旺盛，具有利用海带成分进行发酵的潜力。乳酸菌降血糖机制主要通过调节人体肠道平衡和机体的免疫功能、提高抗氧化能力、调节糖代谢和脂代谢等方面作用，降低血糖水平。
[0003]关于植物乳杆菌的应用，以下的专利文献进行过披露：CN114231473A一株益生植物乳杆菌及其在低盐发酵肉食品制备中的应用；CN114196600A一种对肠易激综合征具有缓解作用的植物乳杆菌及其应用；CN114134089A一种具有高活性的复合菌剂及其在食品生产中的应用。关于植物乳杆菌应用于海带降解中的文献，鲜有披露。
[0004]海带含有丰富的化学成分和生物活性物质，还含有海带中含有丰富的褐藻多糖，在功能性食品和药品的加工应用中具有非常高的价值，此外还含有多种维生素和矿物质等。研究证明，海带具有降血脂、降血糖、调节免疫、抗凝血、抗肿瘤、排铅解毒和抗氧化等多种生物学功能。但我国海带产业仍处在以传统的粗放加工及初级加工品为主的低附加值和低效益的初级状态，海带产业的发展空间还远远没有发掘出来。
[0005]因此，创新性发展海带加工发酵产业，研发具有营养保健价值的海带产品，符合健康中国战略需求，促进海带产业链持续发展。若是寻找并培养一种合适的植物乳杆菌，使其能够发酵降解海带并提高发酵对海带降血糖和抗氧化功能，必然为海带的精深加工提供规模化生产和应用的基础。

技术实现思路

[0006]为了解决上述的技术问题，本专利技术提供了能利用天然海带快速生长、且具有降解海藻酸能力的植物乳杆菌LP1406，通过该植物乳杆菌LP1406能够提高海带发酵样品降糖和抗氧化能力，为海带的精深加工提供了良好的基础。
[0007]本专利技术还提供了上述菌株在发酵海带中应用的具体方法，并且对应用后所获得的产品的降糖、抗氧化能力进行了评价。
[0008]本专利技术所述及的植物乳杆菌LP1406，于2021年11月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，保藏编号CCTCC NO：M20211500，分类命名为：植物乳杆菌 LP1406 Lactiplantibacillus plantarum LP1406。
[0009]本专利技术的植物乳杆菌LP1406（以下简称植物乳杆菌）的核苷酸序列为SEQ ID NO.1
所示，在MRS培养基中于37℃培养24h后，表面菌落直径约3mm，凸起，呈圆形，表面光滑，细密，色白，偶尔呈浅黄或深黄色；菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一；菌体细胞杆状，单个或成链；革兰氏染色呈阳性，H2O2实验阳性，甲基红试验阳性，明胶液化实验阳性，V.P.实验阴性，硫化氢实验阴性，氧化酶实验阴性，葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、甘露糖实验均为阳性；对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌具有明显的抑菌效果；pH耐受范围2.0
‑
6.0。
[0010]在分离及培养植物乳杆菌时，采用的是固体MRS培养基，含有：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖20g/L，柠檬酸铵2g/L，七水硫酸镁0.58g/L，乙酸钠3.12g/L，磷酸氢二钠1.63g/L，乙酸钾2.75g/L，吐温80 1mL，四水硫酸锰0.25g/L。
[0011]植物乳杆菌LP1406在发酵海藻制品中的应用，尤其是在发酵海带中的应用，是本专利技术所要重点保护的内容。
[0012]植物乳杆菌LP1406在发酵海带中的应用，其具体的步骤是：首先，筛选发酵海带的植物乳杆菌，然后再发酵海带；筛选发酵海带的植物乳杆菌时，将固体平板上的单菌落接种于种子培养基中培养，然后再接种在海带酶解液培养基中培养；所述的种子培养基为液体MRS培养基，含有：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L,葡萄糖20g/L，柠檬酸铵2g/L.七水硫酸镁0.58g/L，乙酸钠3.12g/L，磷酸氢二钠1.63g/L，乙酸钾2.75g/L，吐温80 1mL，四水硫酸锰0.25g/L；海带酶解液培养基的制备方法如下：海带经水洗、干燥、研磨，将粉末通过40目筛，收集，然后以1:50 (w/v)的比例溶解在蒸馏水中，将pH调至4.8，加入纤维素酶和果胶酶进行酶解，纤维素酶和果胶酶的添加量分别为2.5wt%和0.26 wt%，在50℃搅拌反应溶液2小时，调整pH至8.0后，加入0.3wt%碱性果胶酶，在60℃再孵育1.5小时，最后，将反应产物离心，收集酶解上清液为海带酶解液；发酵海带时，将MRS平板上的单菌落接种于种子培养基中，在37℃下培养24h；然后按照5%
‑
10%的接种量接种于海带酶解液培养基中，在37℃下培养48h。
[0013]发酵海带时，将MRS平板上的单菌落接种于种子培养基中，在37℃下培养24h；然后按照5%
‑
10%的接种量接种于海带发酵培养基时，先将海带酶解液中补葡萄糖至3%，121℃灭菌20min后接入3%含量的植物乳杆菌置于37℃静置培养，发酵时间为48h。
[0014]利用植物乳杆菌LP1406发酵海带的方法，包括以下的步骤：S1：植物乳杆菌的分离及培养在分离及培养植物乳杆菌时，具体步骤为：（1）取1mL奶制品，放入装有9mL生理盐水的试管中，涡旋振荡器充分涡旋振荡，使样品充分混合均匀；（2）用移液枪充分吸取混合后的样品1mL，加入含有9mL生理盐水的试管中，依次类推制成10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6的悬液；（3）用移液枪从浓度为10
‑2，10
‑4，10
‑6的试管中充分吸取0.1mL混合液,分别稀释涂布于已灭菌的固体MRS培养基中，37℃培养24h；（4）培养结束后，观察菌落形态，挑取乳白色光滑湿润的单菌落进行镜检；（5）镜检为杆状的菌落进行分离纯化培养，待菌落长好后，检查是否有杂菌，若有则需再一次进行分离纯化，直到获得纯菌株培养物；
S2：发酵海带的植物乳杆菌的筛选筛选发酵海带的植物乳杆菌，具体步骤为：将固体平板上的单菌落接种于种子培养基中，在37℃下培养24h，然后按照5
‑
10%的接种量接种于筛选培养基中，在37℃下培养40
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60h；S3：发酵海带发酵海带，具体操作步骤为：将MRS平板上的单菌落接种于种子培养基中，在37℃下培养24h；然后按照5%
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10%的接种量接种于海带发酵培养基时，先将海带酶解液中补葡萄糖至3%，121℃灭菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌LP1406，于2021年11月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M20211500，分类命名为：植物乳杆菌 LP1406 Lactiplantibacillus plantarum LP1406。2.如权利要求1所述的植物乳杆菌LP1406，其特征在于，所述的植物乳杆菌LP1406的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1所述的植物乳杆菌LP1406，其特征在于，所述的植物乳杆菌在MRS培养基中于37℃培养24h后，表面菌落直径约3mm，凸起，呈圆形，表面光滑，细密，色白，偶尔呈浅黄或深黄色；菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一；菌体细胞杆状，单个或成链；革兰氏染色呈阳性，H2O2实验阳性，甲基红试验阳性，明胶液化实验阳性，V.P.实验阴性，硫化氢实验阴性，氧化酶实验阴性，葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、甘露糖实验均为阳性；对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌具有明显的抑菌效果；pH耐受范围2.0
‑
6.0。4.如权利要求1所述的植物乳杆菌LP1406，其特征在于，在分离及培养植物乳杆菌时，采用的是固体MRS培养基，含有：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖20g/L，柠檬酸铵2g/L，七水硫酸镁0.58g/L，乙酸钠3.12g/L，磷酸氢二钠1.63g/L，乙酸钾2.75g/L，吐温80 1mL，四水硫酸锰0.25g/L。5.如权利要求1所述的植物乳杆菌LP1406在发酵海藻制品中的应用。6.如权利要求1所述的植物乳杆菌LP1406在发酵海带中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，首先，筛选发酵海带的植物乳杆菌，然后再发酵海带；筛选发酵海带的植物乳杆菌时，将固体平板上的单菌落接种于种子培养基中培养，然后再接种在海带酶解液培养基中培养；所述的种子培养基为液体MRS培养基，含有：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L,葡萄糖20g/L，柠檬酸铵2g/L.七水硫酸镁0.58g/L，乙酸钠3.12g/L，磷酸氢二钠1.63g/L，乙酸钾2.75g/L，吐温80 1mL，四水硫酸锰0.25g/L；海带酶解液培养基的制备方法如下：海带经水洗、干燥、研磨，将粉末通过40目筛，收集，然后以1:50 (w/v)的比例溶解在蒸馏水中，将pH调至4.8，加入纤维素酶和果胶酶进行酶解，纤维素酶和果胶酶的添加量分别为2.5wt%和0.26 wt%，在50℃搅拌反应溶液2小时，调整pH至8.0后，加入0.3wt%碱性果胶酶，在60℃再孵育1.5小时，最后，将反应产物离心，收集酶解上清液为海带酶解液；发酵海带时，将MRS平板上的单菌落接种于种子培养基中，在37℃下培养24h；然后按照5%
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10%的接种量接种于海带酶解液培养基中，在37℃下培养48h。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，发酵海带时，将MRS平板上的单菌落接种于种子培养基中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳秋林，赵林，李昆仑，李宝君，赵晨，苏乐，孙欣，张松，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学山东卓苒生物科技有限公司笙笙向荣生物科技山东有限公司山东晨彰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：