一种TEX101重组蛋白及其在制备单克隆抗体中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种杂合肽，尤其涉及一种重组TEX101蛋白，其序列如SEQ ID NO:1所示，与已知蛋白相比，采用本发明专利技术TEX101重组蛋白更易于制备单克隆抗体；另外，采用本发明专利技术重组蛋白制备的单克隆抗体更容易识别生物样本中的天然构象蛋白TEX101，可用于构建检测人类精子质量的体系。体系。

【技术实现步骤摘要】
一种TEX101重组蛋白及其在制备单克隆抗体中的应用


[0001]本专利技术涉及一种杂合肽，尤其涉及一种人源杂合肽。

技术介绍

[0002]无精子症是指在射精过程中完全没有精子。它占男性不育病例的10
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15％。分为阻塞性无精子症和非阻塞性无精子症(NOA)。无精子症占所有无精子症病例的60％。
[0003]TEX101，又名睾丸表达蛋白101，已公开的氨基酸序列如UniProtKB
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Q9BY14(TX101_HUMAN)(序列详见SEQ ID NO:4)，是一种细胞特异性糖蛋白，以糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白的形式存在干细胞表面，在男性性腺发育过程中，它首先出现在胎儿睾丸未成熟精索的早孕细胞膜上，虽然TEX101不表达在精原细胞上，但它在青春期后减数分裂细胞和睾丸精子上重新出现，TEX101随后在运输过程中通过附睾头从附睾精子表面释放，TEX101
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小鼠产生形态完整的精子，不育表型是由于精子无法迁移到输卵管。关于230例的研究中得出，TEX101对于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TEX101重组蛋白，其特征在于所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的TEX101重组蛋白，其特征在于，所述TEX101重组蛋白为人源。3.权利要求1或2所述TEX101重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)根据已公开的人类TEX101的mRMA基因序列设计引物,通过逆转录合成cDNA文库；(2)以步骤(1)合成的cDNA文库作为模板，通过PCR方式进行扩增；(3)将步骤(2)扩增后回收的DNA片段与pPIC表达载体链接，酶切位点为：Xho1和EcoR1；(4)将步骤(3)构建好的表达载体通过电转方式转化入GS115酵母细胞系中；(5)在毕赤酵母表达培养基BMGY中培养酵母细胞株至对数期,转入BMMY培养基中，调整至OD600＝1，于30度恒温摇床培养；10ml/L浓度的甲醇诱导表达4天；(6)取上清液，使用鼠抗His标签抗体通过Westerblot方法鉴定蛋白表达；(7)SDS凝胶中回收蛋白条带，使用质谱进行蛋白鉴定；(8)亲和层析法从酵母培养上清液中纯化TEX101重组蛋白。4.根据权利要求3所述TEX101重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述人类TEX101的mRMA基因序列在GenBank中的登录号是NM_001130011.1。5.根据权利要求3所述TE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李树莲，杨波，
申请(专利权)人：普迪特泰州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：